DNAおよびRNA調製中のプロテアーゼによる分解用

QIAGEN Protease およびQIAGEN Proteinase K は、広範囲な反応条件において高活性で幅広い基質特異性を示します。両プロテアーゼは、ほとんどのDNAおよびRNA調製法で使用されているバッファー中で高い活性を示し、QIAGEN で品質保証されています。

製品名 Cat. no. List price:
QIAGEN Proteinase K (2 ml)
2 ml (>600 mAU/ml, solution)
19131
¥14,000
QIAGEN Proteinase K (10 ml)
10 ml (>600 mAU/ml, solution)
19133
¥49,500

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パフォーマンス

QIAGEN Protease およびQIAGEN Proteinase Kは、広範囲な塩濃度、変性剤および界面活性剤(表“汎用されているバッファー中でのプロテアーゼ活性”)、pH あるいは温度条件のもとでも高活性で幅広い基質特異性を示し、ほとんどのDNAおよびRNA調製法で使用されているバッファー中で高い活性を示します。両プロテアーゼはQIAGEN で品質保証されています。

汎用されているバッファー中でのプロテアーゼ活性
BufferActivity(%)
QIAGEN
Protease
QIAGEN
Proteinase K
30 mM Tris·Cl100100
30 mM Tris·Cl; 30 mM EDTA; 5% Tween 20; 0.5% Triton X-100; 800 mM GuHCl210313
36 mM Tris·Cl; 36 mM EDTA; 5% Tween 20; 0.36% Triton X-100; 735 mM GuHCl205301
10 mM Tris·Cl; 25 mM EDTA; 100 mM NaCl; 0.5% SDS78128
10 mM Tris·Cl; 100 mM EDTA; 20 mM NaCl; 1% Sarkosyl10174
10 mM Tris·Cl; 50 mM KCl; 1.5 mM MgCl2; 0.45% Tween 20; 0.5% Triton X-100159106
10 mM Tris·Cl; 100 mM EDTA; 0.5% SDS98120
30 mM Tris·Cl; 10 mM EDTA; 1% SDS38203
* pH 8.0、50°C、1.25 µg/ml proteaseで15分インキュベート。
血液、培養細胞、組織からのDNA分離用のQIAGEN Genomic-tip調製法で使用されているBuffer G2。
バクテリアDNA分離用のQIAGEN Genomic-tipプロトコールでのプロテアーゼ分解(Buffers B1+ B2) に推奨されているバッファー条件。
原理
技術仕様
QIAGEN ProteaseQIAGEN Proteinase K
フォーマット凍結乾燥品即使用可能な溶液
7.5 AUあるいは4 x 7.5 AU2 mlあるいは10 ml(20 mg/ml)
活性45 mAU/mg タンパク質>600 mAU/ml
活性の定義1 μmolチロシンに相当するフォリン反応陽性のアミノ酸またはペプチドを1分間に生成する酵素活性を1 mAUとする

QIAGEN Proteinase K は、腐生菌(Tritirachium album) から分離されたスブチリシンタイプのプロテアーゼで、特に短時間のインキュベーションに最適です。本酵素は高温度でより高い活性を示し、幅広い温度およびpH値において安定した活性を保持します。可溶性カルシウムは酵素活性に必須ではありません。したがってヌクレアーゼのようなMg2+依存酵素の阻害に使用されるEDTAが、Proteinase K活性に影響を与えることはありません。Proteinase K は以下のキットに含まれています。

QIAamp DNA Mini Kit
QIAamp DNA Stool Mini Kit
QIAamp 96 DNA Swab BioRobot Kit
DNeasy Tissue Kit
DNeasy 96 Tissue Kit
QIAamp DNA Micro Kit
QIAamp MinElute Media Kit
QIAamp UltraSens Virus Kit
QIAamp Media MDx Kit

QIAGEN Protease は組み換え枯草菌株から分離されたセリンプロテアーゼで、各種サンプルからの未変性DNAおよびRNAの分離に、Proteinase Kの経済的な代用品として使用できます。QIAGEN Protease はDNaseおよびRNase活性を一切含みません。QIAGEN Protease は以下のキットに含まれています。

QIAamp DNA Blood Mini、Midiおよび Maxi Kits
QIAamp 96 DNA Blood Kit
Blood & Cell Culture DNA Kit
QIAamp DNA Blood BioRobot 9604 Kit
QIAamp Virus BioRobot 9604 Kit
QIAamp DNA Blood BioRobot MDx Kit
QIAamp DSP 96 Virus MDx Kit
QIAamp DSP Virus Kit
QIAamp DSP DNA Blood Mini Kit

注:マニュアルでQIAamp DNA Blood KitおよびQIAGEN Blood & Cell Culture DNA Kitを使用する場合、7 mlの蒸留水で各々のQIAGEN Proteaseをボトル中で再懸濁してください。

注:QIAamp 96 DNA Blood BioRobot 9604 Kit は各々のQIAGEN Proteaseをボトル中で10 mlの蒸留水で再懸濁してご使用ください。

注:QIAGEN Protease はDNeasy Tissue、DNeasy 96 Tissue Kit およびQIAamp DNA Mini Kit に添付されているBuffer ATLと併用しないでください。SDS 0.5%以上、サルコシル1%以上、あるいは他の界面活性剤が高濃度の場合には、インキュベーション時間を延長し、またフル活性を得るため、EDTA濃度は8 mM 以下にする必要があります。

操作手順

QIAGEN Protease またはQIAGEN Proteinase Kを使用する場合の手順は、対応するキットのハンドブックに記載されています。

アプリケーション

QIAGEN ProteaseおよびQIAGEN Proteinase KはDNAおよびRNA調製中のプロテアーゼ処理を行ないます。プロテアーゼ処理を行なう際には、酵素間の微妙な差異を考慮してください。

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Supplementary Protocols
2
マイクロダイセクションにより採取した組織サンプルからのDNA分離およびHotStarTaq DNA Polymeraseを用いた増幅
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マイクロダイセクションにより採取した組織サンプルからRNeasy Mini Kit を用いたRNA 分離
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MSDS
1
Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
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