miRCURY LNA miRNA Custom Probe PCR Assays

• 관심 있는 특정 miRNA에 대한 맞춤형 분석을 쉽게 설계
• miRNA 복사본 1개까지 매우 낮은 검출 범위에서 실제 신호 검출
• 2시간의 빠르고 간단한 워크플로우
• 새 miRNA, miRNA 동형(isoform) 또는 변이체를 위한 miRNA 분석 설계

miRCURY LNA miRNA Custom Probe PCR Assays는 맞춤형으로 설계된 miRNA PCR 프라이머-프로브 세트로 miRCURY LNA miRNA Probe PCR System을 사용하여 매우 민감하고 특이적인 miRNA 정량화를 가능하게 합니다. 정방향 PCR 증폭 프라이머와 FAM 및 어두운 소광제 라벨이 있는 프로브 모두 miRNA 특이적이며 LNA 기술로 최적화되어 분석 성능을 향상시킵니다. 분석은 사전 설계된 분석과 동일한 강력하고 최적화된 알고리즘을 사용하여 온라인에서 쉽게 생성할 수 있습니다. 따라서 맞춤형 분석과 사전 설계된 분석을 결합할 수 있으며 작동이 보장됩니다.

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실제 신호에 대한 고감도 검출

miRCURY LNA miRNA Custom Probe PCR Assays의 탁월한 민감도는 범용 역전사를 LNA 강화, T_m 정규화, miRNA 특이적 프라이머 및 프로브와 결합함으로써 얻은 것입니다. 이 조합을 사용하면 사전 증폭 없이 최소 1pg의 총RNA 또는 최소 1개의 분자에서 개별 miRNA를 정확하고 안정적으로 정량화할 수 있습니다( 소량의 시재료로도 정확한 정량화 가능 및  광범위한 동적 범위에서 뛰어난 효율성 제공 참조). 이 시스템은 민감도와 신속한 워크플로우로 인해 특히 혈청 또는 혈장 샘플에 적합합니다. QuantiNova 효소는 첫 번째 시도에서 기술적 복제와 생물학적 복제 간에 고도로 재현 가능한 결과를 보장하여 샘플 물질과 시간을 절약할 수 있습니다.

miRCURY LNA miRNA Custom Probe Assays의 LNA 강화 프라이머 및 프로브 모두 특이성을 생성하기 위해 프로브에만 의존하는 기타 miRNA 프로브 기반 PCR 시스템과 비교하여 miRNA 특이적이며 표적에 결합할 때 중첩되지 않을 만큼 충분히 짧아( miRCURY LNA miRNA Probe PCR System 개요 참조) 민감도를 개선합니다. 이 고유한 기능을 뛰어난 신호 대 잡음비( 높은 RNA 배경에서도 정확한 검출 참조)와 결합하여 사용하면 밀접하게 관련된 miRNA를 뉴클레오티드 1개 정도의 미세한 서열 차이로 구별할 수 있습니다( 단일 뉴클레오티드 차이까지의 변별력 참조).

검증 및 최적화 완료

새 miRNA를 위한 분석 설계(프라이머 및 프로브)는 LNA 및 분석 전문가가 만든 설계 알고리즘을 기반으로 합니다. 이 포괄적인 알고리즘은 매우 엄격한 성능 기준에 따라 인실리코(in silico) 검증을 거친 매개변수 60개를 평가하고 최적화하여 설계에서 최고 수준의 민감도와 특이성을 제공하도록 보장합니다. 그 결과 분석에서 1개의 miRNA 복사본까지 검출할 수 있습니다.

신속성 및 용이성

쉽게 따라할 수 있는 2시간 프로토콜을 통해 시간과 노력을 절약할 수 있습니다. 범용 전사 및 최적화된 RT-PCR 프로토콜을 사용하면 다른 솔루션에 비해 절차가 크게 간소화됩니다. 또한 RT 단계에서 생성된 cDNA를 miRCURY LNA miRNA Probe PCR System 전체에서 사용할 수 있어 연구 요구 사항에 따라 패널에서 분석으로 원활하게 전환하고 샘플 물질과 시간을 절약할 수 있습니다. 피펫팅 단계의 수가 최소한으로 줄어들어 기술적 변동도 최소화됩니다. 분석 강건성으로 인해 실온 설정 및 실행 지연이 가능하여 유연성이 향상되고 자동화에 사용할 수 있습니다. 또한 이처럼 간소화된 워크플로우가 ISO 준수 분석 제조 기술과 결합되어 매우 높은 수준의 일별 및 현장 간 재현성을 달성할 수 있습니다.

설계 프로세스

miRCURY LNA miRNA Custom Probe PCR Assay 설계 도구를 사용하면 사전 설계된 분석으로 제공되지 않는 miRNA에 대해 매우 민감하고 특이적인 LNA 강화 PCR 프라이머 세트 및 프로브를 쉽게 설계할 수 있습니다. 고급 알고리즘은 60개 이상의 다양한 기준을 기반으로 약 3,000개의 프라이머 쌍과 프로브 설계를 평가하여 몇 분 안에 miRNA에 대한 최적의 LNA 프라이머와 프로브를 찾습니다. 이 도구는 miRNA용으로 설계되었지만 길이가 14–27 뉴클레오티드인 다른 작은 RNA에도 사용할 수 있습니다.

설계 기준은 다음과 같습니다.

• 프라이머 및 프로브의 LNA 분포를 변경하여 용융 온도를 최적화함으로써 높은 증폭 효율성과 특이성 보장
• 효율적인 PCR 반응을 위한 자체 혼성화 및 교차 혼성화 점수 계산 및 조정.
• PCR 반응에서 잠재적인 프라이머–다이머(dimer)가 형성되지 않도록 조정.
• LNA 올리고뉴클레오티드 설계에 대한 방대한 지식을 바탕으로 프라이머 및 프로브에 LNA 염기를 지능적으로 배치.
• miRBase는 동일한 종 내에서 서열 유사성이 높은 잠재적인 miRNA를 식별하기 위해 검색합니다. 이 경우 프라이머 세트 및 프로브가 이들이 설계된 작은 RNA에 대해 매우 높은 특이성을 제공합니다.

miRNA 정량화를 위한 고유한 시스템

miRCURY LNA miRNA Probe PCR System을 사용하면 real-time PCR을 통해 miRNA를 민감하고 특이적으로 정량화하고 프로파일링할 수 있습니다. 검출은 FAM 및 어두운 소광제 라벨이 있는 가수분해 프로브를 기반으로 합니다. 이 시스템은 miRNA를 cDNA로 변환하고 miRNA의 후속 qPCR 검출과 관련된 모든 단계를 다룹니다. miRCURY LNA miRNA Custom Probe PCR Assays는 QuantiNova Probe Master Mix를 사용하여 검증되었습니다. qPCR에 다른 시약을 사용하면 결과에 영향을 미칩니다.

RNA Spike-In Kit for RT

RNA Spike-In Kit를 사용하면 miRCURY LNA miRNA Probe PCR 실험의 RNA 분리, cDNA 합성 및 PCR 증폭 단계를 정도 관리할 수 있어 프로세스 초기에 품질이 좋지 않은 샘플을 식별하고 시간과 시약을 절약할 수 있습니다. 이 키트에는 UniSp2, UniSp4, UniSp5 RNA 스파이크인 템플릿 혼합물과 cel-miR-39-3p RNA 스파이크인 템플릿이 포함되어 있습니다.

miRCURY LNA RT Kit

두 가지 검출 시스템을 위한 하나의 범용 역전사 키트입니다. miRCURY LNA RT Kit는 검출에 SYBR Green을 사용하는 miRCURY LNA miRNA PCR System과 프로브 기반의 miRCURY LNA miRNA Probe PCR System 모두에 사용됩니다. 이 키트에는 시스템별 반응 완충액 두 개와 단일 반응 단계에서 빠르고 편리한 miRNA 아데닐중합체형성 및 역전사를 수행하는 데 필요한 모든 시약이 포함되어 있습니다.

miRCURY Probe PCR Kit

이 키트는 miRCURY LNA miRNA Probe PCR System을 위해 최적화되었고 이 시스템 전용으로 설계되었으며, 고성능 QuantiNova Probe Master Mix 및 miRCURY Probe Universal Reverse Primer가 포함되어 있습니다. miRCURY LNA miRNA Probe Assay 또는 miRCURY LNA miRNA Probe PCR Panel과 결합된 이 화학 기술을 사용하면 정량적 real-time PCR을 통해 miRNA를 검출할 수 있습니다.

miRCURY LNA miRNA Probe Assays

이러한 프라이머 및 프로브 분석은 miRBase 22의 최신 서열 정보를 사용하여 mature miRNA를 검출하도록 설계된 miRNA 특이적인 가수분해 프로브와 miRNA 특이적인 정방향 프라이머를 사용합니다. miRCURY Probe Universal Reverse Primer는 miRCURY Probe PCR Kit에 포함되어 있습니다.

miRCURY LNA miRNA Probe PCR Panels

사전 설계되어 즉시 사용 가능한 일회용 PCR 패널 플레이트는 miRNome, 특정 경로, 혈청/혈장과 같은 특정 샘플 유형 또는 사용자가 설계한 맞춤형 패널에 중점을 두고 mature miRNA를 신속하게 프로파일링합니다.

GeneGlobe 데이터 분석 센터

무료로 이용 가능한 웹 기반 분석 도구로, 사용하기 쉬운 마법사를 통해 데이터의 정규화 및 분석을 단계별로 안내하고 발표할 수 있는 수치를 생성합니다.

첫 번째 단계인 역전사 반응은 수행하기 쉬운 단일 튜브 반응입니다. mature miRNA 검출을 위해 miRNA가 포함된 총RNA가 시재료로 사용되고, 생성된 cDNA는 LNA 강화 프라이머 및 가수분해 프로브와 함께 real-time PCR 증폭에 사용됩니다. 이를 통해 miRNA 정량화 및 프로파일링을 간단하게 수행할 수 있으며 real-time PCR 사이클러를 갖춘 모든 실험실에서 액세스할 수 있습니다.

miRCURY LNA miRNA Custom Probe Assays는 miRCURY LNA miRNA Probe PCR System의 일부로 다음 용도에 사용됩니다.

• miRNA 발현 검출, 프로파일링, 정량화
• miRNA 바이오마커 개발 – 스크리닝 및 식별
• miRNA 조절 및 경로 분석
• 복잡한 샘플 유형 및 miRNA 발현 수준이 낮은 샘플(예: 엑소솜, 혈청, 혈장, 소변, FFPE 절편)에서 miRNA 검출
• snoRNA 감지
• miRNA 염기서열 분석 검증