RT² HT First Strand Kit

• 迅速で効率的な一本鎖cDNA合成
• ゲノム DNAを完全に除去
• 反応あたりわずか25 ngのトータルRNAで好結果を実現
• 合成したcDNAはリアルタイムPCRに即使用可能
• 酵素阻害物質をモニターするための外因性RNAコントロール

RT² HT First Strand Kitは、 効率的な一本鎖cDNA合成およびRNAサンプル中のゲノムDNA除去のために、迅速で簡便な手法を提供します。本キットで96個のRNAサンプルの逆転写反応を容易に同時処理できます。合成したcDNAは複数の遺伝子のリアルタイムPCR発現解析にすぐに使用できます。

RT² HT First Strand Kitは、遺伝子発現アッセイに使用するmRNAからの効率的な一本鎖cDNA合成のための迅速で簡便な手法を提供します。

本キットは逆転写反応を行なう前に、RNAサンプルからゲノムDNAのコンタミを効率的に除去するための独自の操作が含まれています。Random hexamerとoligo-dTプライマーが逆転写反応で均一にプライマーとして作用し、逆転写酵素が最適な収量と長さを持つcDNA産物を合成します。操作に組み込まれている外因性RNAコントロールは、逆転写効率のモニタリングおよび酵素阻害物質のチェックに役立ちます。RT² HT First Strand Kitは、RT² Profiler PCR ArrayおよびRT² qPCR Primer Assayを用いたリアルタイムPCRベースの遺伝子発現解析用に至適化されていますが、市販の遺伝子発現解析アッセイにも使用できます。

各サンプルは96ウエルプレートの各ウエルで、独自のBuffer GE2と混和します。プレートを付属のsealing filmで密封し、サーマルサイクラーでインキュベートします。マスターミックス（BC4 Reverse Transcriptase Mix）の添加後、サーマルサイクラーを用いてサンプルを逆転写します。逆転写されたcDNAは続くアプリケーションにすぐに使用できます。解析にはRT² Profiler PCR ArrayあるいはRT² qPCR Primer Assayをご使用になることをお勧めします。

RT² HT First Strand Kit は反応あたりわずか25 ngのトータルRNAあるいは最高5 µgのトータルRNAを用いてcDNAを合成します。しかし、最適なスタートサンプル量は目的の転写物の相対発現量により異なります。転写産物量が少ない場合はRNA量を増やし、多い場合はRNA量を減らします。RNAのインプット量が多いと直線性のあるダイナミックレンジにおけるpositive call（すなわち遺伝子発現検出）の数が増加します。