RT² Easy First Strand Kit

• 迅速で効率的な一本鎖cDNA合成
• ゲノム DNAを完全に除去
• 反応あたりわずか25 ngのトータルRNAで良好な結果
• 合成したcDNAはリアルタイムPCRに即使用可能

RT²  Easy First Strand Kitは、効率的な一本鎖cDNA合成とRNAサンプル中のゲノムDNA除去のために、迅速で簡便な手法を提供します。この画期的なフォーマットにより、複数のRNAサンプルの逆転写反応を容易に同時処理できます。RT² SYBR Green Mastermixes、RT² qPCR Primer Assay、あるいは市販のプライマーアッセイを用いて、合成したcDNAを複数の遺伝子のリアルタイムPCR発現解析にすぐに使用できます。

本キットは逆転写反応を行なう前に、RNAサンプルからゲノムDNAのコンタミを効率的に除去するための独自の操作が含まれています。Random hexamerとoligo-dTプライマーが逆転写反応で均一にプライマーとして作用し、逆転写酵素が最適な収量と長さを持つcDNA産物を合成します。操作に組み込まれている外因性RNAコントロールは、逆転写効率のモニタリングおよび酵素阻害物質のチェックに役立ちます。RT² First Strand Kitは、RT² Profiler PCR ArrayおよびRT² qPCR Primer Assayを用いたリアルタイムPCRベースの遺伝子発現解析用に至適化されていますが、市販の遺伝子発現解析アッセイにも使用できます。

独自のBuffer GE2とサンプルを混和し、サーマルサイクラーでインキュベートします。酵素とバッファーを追加後、サンプルをサーマルサイクラーを用いて逆転写します。逆転写されたcDNAは続くアプリケーションにすぐに使用できます。解析にはRT² Profiler PCR ArrayあるいはRT² qPCR Primer Assayをご使用になることをお勧めします。 

RT² Easy First Strand Kitは反応あたりわずか25 ngのトータルRNAあるいは最高5 µgのトータルRNAを用いてcDNAを合成します。しかし、最適なスタートサンプル量は目的の転写物の相対発現量により異なります。転写産物量が少ない場合はRNA量を増やし、多い場合はRNA量を減らします。RNAのインプット量が多いと直線性のあるダイナミックレンジにおけるpositive call（すなわち遺伝子発現検出）の数が増加します。