QIAcuity OneStep Advanced Probe Kit

适用于在 QIAcuity 数字 PCR 仪器上进行一步法RT-PCR

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QIAcuity OneStep Advanced Probe Kit (1 ml)

Cat. No. / ID:  250131

1 ml OneStep Advanced Probe 预混液 (4x),45 µl OneStep RT 混合物 (100x),1 ml Enhancer GC,20 µl QN 内部对照品 RNA,2 x 1.9 ml 不含 RNase 的水;适用于在Nanoplate 26k中进行 100 次反应和在Nanoplate 8.5k中进行 333 次反应
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Volume
1 ml
5 ml
QIAcuity OneStep Advanced Probe Kit 旨在用于分子生物学应用。该产品不能用于疾病诊断、预防和治疗。

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Features

  • HotStart RT 功能支持为 QIAcuity Four 和 QIAcuity Eight 进行纳米微孔板配置
  • 得益于 HotStart RT 功能,能够在室温下进行反应体系构建
  • 适用于单重和多重反应
  • 4x 浓缩 PCR 预混液,可加载更多样本
  • 针对抑制剂的卓越稳健性

Product Details

QIAcuity OneStep Advanced Probe PCR Kit 能够在 QIAcuity 数字 PCR 仪器上通过一个组合式 RT-PCR 反应实现对 RNA 或 RNA+DNA 靶标的灵敏定量。QIAcuity Probe PCR Kit 包含一份用在 QIAcuity Nanoplate 微流体中优化的 4x 浓缩即用型预混液和 100x 浓缩 RT 混合物。该试剂盒提高了基于探针法的数字 PCR 的特异性和效率,可提供准确的单重或最多 5 重的定量分析结果。

新试剂盒配备了 HotStart 逆转录 (Reverse Transcription, RT) 酶,可实现室温反应体系构建和QIAcuity Four 或 QIAcuity Eight Nanoplate同步加载 。

该试剂盒应与 QIAcuity Digital PCR SystemQIAcuity Nanoplate 结合使用。

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Performance

卓越的逆转录性能

新的 QIAcuity Advanced Reverse Transcription Mix 包括 QIAGEN 正在申请专利的新 HotStart 逆转录技术。新的 HotStart RT 酶在室温下不起作用,即使在 37°C 下孵育数小时,也能抑制产生非靶标 cDNA(参见图片 新 HotStart RT 的熔解曲线分析)。因此可在室温下进行反应体系构建。HotStart RT 酶允许用户在室温下配制其反应体系。此外,更重要的是,HotStart RT 酶使用户能够并行配制和加载多个纳米微孔板,而无需担心其在常温下等待时出现不需要的和潜在的非特异性 RT 活性。纳米微孔板加载至 QIAcuity 仪器内时,HotStart RT 酶被阻断,等到转移至热循环仪后才会执行程序的 RT 步骤。

Enhancer GC 提高特异性检测性能

dPCR 检测性能取决于引物和探针的序列及设计。GC 含量和扩增子长度因行业目录及定制设计的检测而异。PCR 化学试剂经过优化,可实现通用性和最佳性能;然而,有时建议添加特定的增强子。新的 Enhancer GC 是一种可选成分(单独的小瓶),可在扩增子富含 GC 或长度超过 150 nt 时添加到 dPCR 反应体系中。还建议与 TaqMan (Thermo Fisher) 基因表达检测一起使用。

表:使用和不使用 Enhancer GC 时的 RT 效率

    标准 RT HotStart RT
      不使用 Enhancer GC 使用 Enhancer GC
ABI TaqMan 检测 ATOX1 100% 68% 95%
TGFBR2 100% 87% 107%

卓越的扩增性能

QIAcuity OneStep Advanced Probe Kit 基于水解探针法,同时使用了最新版的 QIAGEN 高品质 DNA 聚合酶。QIAGEN 的专有技术与经过良好验证的专门针对纳米微孔板微流体优化的缓冲液技术及新的 QuantiNova DNA 聚合酶的独特结合,可在灵敏度、重复性及效率等方面获取高度一致的结果。

内部对照品 RNA

 QIAcuity OneStep Advanced Probe Kit 附带 QuantiNova 内部对照品 RNA (QN IC RNA),可选择性用作逆转录和扩增对照品。QuantiNova IC Probe Assay (200)(目录编号205813)可单独购买,可通过 QIAcuity 仪器的黄色通道中超过 200 bp 扩增子来 检测QuantiNova 内部对照品 RNA。用于检测 QuantiNova IC RNA 的引物和探针序列已经过生物信息学验证,与数百种真核微生物和原核微生物无同源性。此外,对来自大量人体、小鼠和大鼠多种的组织和细胞系的RNA 样本进行了实验验证

提示: 用户不应购买 QuantiNova IC Probe Assay Red 650 (500)(目录编号205824),因为它未经过优化,无法与 QIAcuity 配合使用。

See figures

Principle

QIAcuity OneStep Advanced Probe Kit 包含一份即用型 4x PCR 预混液,无需优化反应及循环条件。OneStep 化学试剂允许在一个步骤中对目标病毒 RNA 进行 RT 和扩增。在 OneStep 反应中,也可一起检测 RNA 和 DNA 靶标,例如病毒 RNA 和细菌 DNA。

有关纳米微孔板中 dPCR 反应的原理说明,请参见这里

Procedure

QIAcuity OneStep Advanced Probe Kit 包含一份即用型 4x PCR 预混液,无需优化反应及循环条件。仅需将 100x RT 混合物、模板 RNA 和引物探针组添加到预混液中并执行快速启动协议中列出的程序,就能在 QIAcuity 上快速获得可靠的结果。使用新的 HotStart RT 酶,可以并行配制多个纳米微孔板并同时将它们装载到 QIAcuity Four 和 QIAcuity Eight 仪器中(参见图片  纳米微孔板配制和装载)。

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Applications

QIAcuity OneStep Advanced Probe Kit 与 QIAcuity Digital PCR System 和 QIAcuity Nanoplate 的结合使用可让您在各种应用(包括病毒 RNA 或 mRNA 检测)中进行 RNA 靶标的定量分析。也可适用于需要同时检测 RNA 和 DNA 靶标的应用,例如废水检测。

Supporting data and figures

Resources

快速启动实验方案 (1)
应用说明 (1)
With the cellenONE-QIAcuity workflow, we achieved high-throughput absolute quantification of low-abundance targets at the single-cell level. cellenONE’s single-cell isolation platform enabled real-time and 100% accurate single-cell isolation without compromising viability and transcript expression. This allowed us to use the exact number of intact cells for RT-dPCR reactions. Moreover, the elimination of the RNA purification step significantly reduced hands-on time, and QIAcuity’s probe-based chemistry allowed the multiplexing of up to five targets in a one-step RT-dPCR format with no or minimal optimization.
产品介绍与指南 (1)
A versatile workflow for the detection of low-abundance microbes
Safety Data Sheets (1)
Certificates of Analysis (1)
Application Notes (1)
With the cellenONE-QIAcuity workflow, we achieved high-throughput absolute quantification of low-abundance targets at the single-cell level. cellenONE’s single-cell isolation platform enabled real-time and 100% accurate single-cell isolation without compromising viability and transcript expression. This allowed us to use the exact number of intact cells for RT-dPCR reactions. Moreover, the elimination of the RNA purification step significantly reduced hands-on time, and QIAcuity’s probe-based chemistry allowed the multiplexing of up to five targets in a one-step RT-dPCR format with no or minimal optimization.
Brochures & Guides (1)
A versatile workflow for the detection of low-abundance microbes
Quick-Start Protocols (1)