RT2 First Strand Kit (12)

迅速で効率的な一本鎖cDNA合成とRNAサンプル中のゲノムDNA除去

Products

RT2 First Strand Kit (12)は分子生物学的アプリケーション用であり、疾病の診断、予防、あるいは治療に使用することはできません。
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RT2 First Strand Kit (12)

Cat. No. / ID:  330401

For twelve 20 µl first strand cDNA synthesis reactions; Buffer GE (24 µl), 5x Buffer BC3 (48 µl), RE3 Reverse Transcriptase Mix (24 µl), Control P2 (12 µl), Nuclease-Free Water (1 ml)
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¥45,000
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RT2 First Strand Kit (50)

Cat. No. / ID:  330404

For fifty 20 µl first strand cDNA synthesis reactions; Buffer GE (100 µl), 5x Buffer BC3 (200 µl), RE3 Reverse Transcriptase Mix (100 µl), Control P2 (50 µl), Nuclease-Free Water (1 ml)
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¥81,000

Features

  • 迅速で効率的な一本鎖cDNA合成
  • ゲノム DNAを完全に除去
  • 反応あたりわずか25 ngのトータルRNAで好結果を実現
  • 合成したcDNAをリアルタイムPCRに即時使用可能
  • 酵素阻害物質をモニターするための外因性RNAコントロール

Product Details

RT2 First Strand Kitは、効率的な一本鎖cDNA合成およびRNAサンプル中のゲノムDNA除去のために、迅速で簡便な手法を提供します。合成したcDNAは複数の遺伝子のリアルタイムPCR発現解析にすぐに使用できます。

Principle

RT2 First Strand Kitは、遺伝子発現アッセイに使用する一本鎖cDNAをmRNAから効率的に合成するための迅速で簡便な手法を提供します。

本キットは逆転写反応を行なう前に、RNAサンプルからゲノムDNAのコンタミを効率的に除去するための独自の操作が含まれています。Random hexamerとoligo-dTが逆転写反応で均一にプライマーとして作用し、逆転写酵素が最適な収量と長さを持つcDNA産物を合成します。操作に組み込まれている外因性RNAコントロールは、逆転写効率のモニタリングおよび酵素阻害物質のチェックに役立ちます。RT2 HT First Strand Kitは、RT2 Profiler PCR ArrayおよびRT2 qPCR Primer Assayを用いたリアルタイムPCRベースの遺伝子発現解析用に至適化されていますが、市販の遺伝子発現解析アッセイにも使用できます。

Procedure

独自のBuffer GEとサンプルを混和し、サーマルサイクラーでインキュベートします。酵素とバッファーを追加後、サンプルをサーマルサイクラーを用いて逆転写します。逆転写されたcDNAは続くアプリケーションにすぐに使用できます。解析にはRT² Profiler PCR ArrayあるいはRT² qPCR Primer Assayをご使用になることをお勧めします。 

RT² First Strand Kitは反応あたりわずか25 ngのトータルRNAあるいは最高5 µgのトータルRNAを用いてcDNAを合成します。しかし、最適なスタートサンプル量は目的の転写物の相対発現量により異なります。転写産物量が少ない場合はRNA量を増やし、多い場合はRNA量を減らします。RNAのインプット量が多いと直線性のあるダイナミックレンジにおけるpositive call(すなわち遺伝子発現検出)の数が増加します。

Applications

RT2 First Strand Kitを用いて合成したcDNAは、リアルタイムPCRによる複数遺伝子の発現解析で最適な結果を実現します。

Resources

MSDS (1)
Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
キットハンドブック (3)
For pathway-focused gene expression profiling using real-time RT-PCR
パンフレット (1)
Simultaneously profile mRNA, miRNA and lncRNA using a simple, complete workflow
機器テクニカル資料 (1)
For pathway-focused gene expression analysis
Certificates of Analysis (1)
Brochures & Guides (1)
Simultaneously profile mRNA, miRNA and lncRNA using a simple, complete workflow
Instrument Technical Documents (1)
For pathway-focused gene expression analysis
Kit Handbooks (3)
For pathway-focused gene expression profiling using real-time RT-PCR

FAQ

What do I need to complete a RT² qPCR Primer Assay?

You need:

  1. A RT² SYBR Green Mastermix that matches the qPCR instrument in your laboratory;
  2. RT² qPCR Primer Assays for your target genes;
  3. A Housekeeping gene RT² qPCR Primer Assay.

We also recommend using our RT² First Strand Kit for reverse transcription.

FAQ ID -2707
What is the recommended solution in which to store RNA samples that will be used as templates for cDNA synthesis?
For best results, all RNA samples should be suspended in RNase-free water. Alternatively, RNase-free 1 mM sodium citrate (pH 6.5) or 10 mM Tris buffer (pH 7.0) may be used. Do not use DEPC-treated water, as most DEPC preparations are contaminated with molecules that are inhibitory to reverse transcription and/or PCR. For long-term storage, RNA preps may be stored at -70 ºC in RNase-free water, or the buffers listed above, or precipitated in ethanol or isopropanol. In order to avoid repeated freeze-thaw cycles, it is recommended that frozen RNA samples be stored as multiple, single-use aliquots.
FAQ ID -2659
How can I avoid or remove genomic DNA contamination from the total RNA preparation?

Carry out all procedures in a "DNA-free" workspace (see FAQ 2654). Be sure to include any DNase treatment steps in the recommended RNA isolation procedure or treat RNA separately with RNase-free DNase followed by repurification using a spin-column based method. RNeasy Mini Kit can be easily combined with RNase-free DNase. Alternatively, kits like the RNeasy Plus Universal Tissue already include a DNA removal step. Be sure to double both the units of enzyme and the incubation time recommended by the RNase-free DNase manufacturer. To minimize DNA contamination in your RNA preparations, and avoid the need for supplemental DNase treatments, we recommend using the RT2 First Strand Kit, which includes a highly efficient genomic DNA elimination step before reverse transcription.

 

NOTE: Our Chemistries are not compatible with AMBION's Turbo DNA-Free Kits.

FAQ ID -2662