TAGZyme System

Pour l’expression des protéines marquées à l’histidine et l’élimination des marqueurs His-tag

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TAGZyme DAPase Enzyme (2.5 U)

Cat. No. / ID:  34362

Pour traiter environ 50 mg de protéines marquées : 2,5 unités d’enzyme DAPase, 20 mM de chlorhydrate de cystéamine (1 ml)
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645,00 $US
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EnzymeVector
TAGZyme Enzyme
TAGZyme pQE Vector
Quantity
2.5 U (1 mL)
50 U (25 mL)
Le TAGZyme System est destiné aux applications de biologie moléculaire. Ce produit n’est pas conçu pour le diagnostic, la prévention ou le traitement des maladies.
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Features

  • Marqueur His-tag exprimé optimisé pour l’élimination par l’enzyme TAGZyme
  • Élimination performante du marqueur His-tag : > 95 % en seulement 30 minutes à 37 °C
  • Expression de haut niveau des protéines marquées à l’histidine sur l’extrémité N-terminale
  • Produits finis de grande pureté
  • Élimination complète des contaminants par la méthode Ni-NTA

Product Details

La TAGZyme DAPase Enzyme contient suffisamment d’enzyme pour une élimination hautement spécifique et performante du marqueur His-tag d’une quantité de protéine marquée à l’histidine allant jusqu’à 10 mg. Le TAGZyme System peut être utilisé pour l’élimination du marqueur His-tag de protéines contenant un point d’arrêt de DAPase intrinsèque exprimé avec le TAGZyme pQE-2 Vector.

Performance

La TAGZyme DAPase Enzyme élimine efficacement les dipeptides dans l’ordre, des marqueurs His-tag sur l’extrémité N-terminale jusqu’au « point d’arrêt » exprimé avec le TAGZyme pQE-2 Vector.

Principle

Les protéines recombinantes marquées à l’histidine sont devenues précieuses dans l’étude de la structure et du fonctionnement des protéines. Compte tenu de la petite taille et de la faible immunogénicité du marqueur His-tag, son élimination n’est pas toujours nécessaire. Pour autant, un produit de protéine dépourvu d’acides aminés dérivés de vecteurs est préférable pour certaines applications, comme les études de détermination de la structure par rayons X ou RMN, ou la production de traitements.

Le TAGZyme pQE-2 Vector est adapté aux protéines contenant un point d’arrêt de DAPase intrinsèque. 

Le TAGZyme System élimine les marqueurs His-tag sur l’extrémité N-terminale des protéines recombinantes présentant une spécificité et une efficacité élevées. L’enzyme DAPase permet de cliver dans l’ordre les dipeptides à partir de l’extrémité N-terminale de la protéine marquée à l’histidine purifiée (consultez l’illustration  « Élimination du marqueur His-tag »). La digestion est interrompue dès que l’enzyme atteint un « point d’arrêt », un motif d’acide aminé qui ne peut pas servir de substrat (consultez le tableau « Points d’arrêt de DAPase »).

Points d’arrêt de DAPase

Acide aminé Séquence de points d’arrêt de DAPase (↓)*
Lysine (Lys, K) Xaa-Xaa...Xaa-Xaa ↓ Lys-Xaa...
Arginine (Arg, R) Xaa-Xaa...Xaa-Xaa ↓ Arg-Xaa...
Proline (Pro, P) Xaa-Xaa...Xaa-Xaa ↓ Xaa-Xaa-Pro-Xaa...
Proline (Pro, P) Xaa-Xaa...Xaa-Xaa ↓ Xaa-Pro-Xaa-Xaa...
Glutamine (Gln, Q)† Xaa-Xaa...Xaa-Xaa ↓ Gln-Xaa...
Isoleucine (Ile, I) Xaa-Xaa...Xaa-Xaa ↓ Xaa-Ile-Xaa-Xaa...
See figures

Procedure

Grâce aux protéines recombinantes qui contiennent des points d’arrêt intrinsèques, l’expression avec le TAGZyme pQE-2 Vector permet une élimination complète et efficace du marqueur His-tag N-terminal, quel que soit le site de clonage de l’insert d’ADN (consultez l’illustration  « Élimination du marqueur His-tag »). Après incubation avec l’enzyme DAPase, le mélange réactionnel est soumis à une chromatographie d’affinité sur ions métalliques immobilisés (IMAC) soustractive avec une matrice de Ni-NTA (consultez l’illustration  « Purification de protéines non marquées »). Les fragments du marqueur His-tag et la TAGZyme DAPase Enzyme (qui porte un marqueur 6xHis-tag C-terminal) se lient à la matrice, puis une protéine pure, non marquée, est récupérée dans la fraction d’effluent.

See figures

Applications

Le TAGZyme System permet un clivage spécifique, l’utilisation de réactifs recombinants et l’élimination complète de tous les contaminants, cela en fait une méthode de choix pour la production de protéines dépourvues de marqueur His-tag pour des applications telles que :

  • Détermination de la structure des protéines par RMN ou cristallographie aux rayons X
  • Production de protéines à visée thérapeutique

Supporting data and figures

Resources

Selection Guides (1)
Vector Sequences & Maps (2)
For the pQE-1 vector
For the pQE-2 vector
Package Insert (1)
Kit Handbooks (1)
TAGZyme Handbook
PDF (2MB)
For exoproteolytic cleavage of N-terminal His tags
Certificates of Analysis (1)

Publications

Production and comprehensive quality control of recombinant human Interleukin-1beta: a case study for a process development strategy.
Block H; Kubicek J; Labahn J; Roth U; Schäfer F;
Protein Expr Purif; 2007; 57 (2):244-54 2007 Oct 17 PMID:18053740

FAQ

Is it possible to cleave the 6xHis-tag from an expressed protein?

Yes. In order to cleave off an N-terminal 6xHis tag, a protease cleavage site must be inserted between the coding sequences of the tag and the N-terminus of the protein. Factor Xa Protease recognizes the amino acid sequence Ile-Glu-Gly-Arg and cleaves the peptide bond C-terminal of the arginine residue. The expression vector pQE-30 Xa encodes a Factor Xa Protease recognition site between the N-terminal 6xHis-tag sequence and the multiple cloning site.

If the gene of interest is cloned blunt ended at the 5´-end using the StuI restriction site of the vector, Factor Xa Protease cleavage of the purified recombinant protein results in a protein product without any vector-derived amino acids at the N-terminus.

Tags can also be removed exoproteolytically using the TAGZyme System. This system is an efficient and specific solution for the complete removal of small N-terminal His tags and other amino acid tags by the use of exopeptidases. For detailed information on the procedure please review the TAGZyme handbook.

Please note that both tag removal options work on N-terminal 6xHis tags only.

 

 

FAQ ID -140
Does endogenously expressed DAPase in human cells degrade proteins that are expressed in cell culture?
DAPase (dipeptidyl aminopeptidase I = Cathepsin C), even though endogenously expressed in human tissues and cells, will have only a negligible effect on the degradation of proteins expressed in cell culture. The reason for this is the low level of endogenous DAPase compared to the much higher level of typically overexpressed recombinant protein. However, it is always worthwhile to run a time-course expression experiment to check for possible protein degradation, since proteases and peptidases tend to degrade proteins over time.
FAQ ID -527
How complete is the removal of DAPase in the TAGZyme process?
The removal of DAPase is >99%.
FAQ ID -319
What are the calculated molecular weights of the TAGZyme enzymes?
DAPase: heterodimer, 24 kDa and 6 kDa subunit; Qcyclase: 35 kDa; pGAPase: 28 kDa
FAQ ID -329
Is it possible to store TAGzyme enzymes at°C?
Yes. The TAGzyme enzymes do not experience any loss in function after several freeze and thaw cycles. However, storage at -80°C is not necessary as storage at -20°C is adequate.
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