CGT Viral Vector Lysis Kit

Pour la lyse des vecteurs viraux, tels que les différents sérotypes de virus adéno-associé (AAV) et adénovirus

Products

Le CGT Viral Vector Lysis Kit est destiné aux applications de biologie moléculaire. Ce produit n’est pas conçu pour le diagnostic, la prévention ou le traitement des maladies.
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Cell and Gene Therapy Viral Vector Lysis Kit (100 rxn)

Cat. No. / ID:  250272

Inclus dans le kit : stabilisateur d’échantillon CGT, DNase I, eau exempte de nucléase, tampon de lyse CGT, tampon DNase I CGT et tampon de dilution CGT pour traiter 100 échantillons d’AAV 
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266,00 €
Recommended restriction enzyme HpaII is not included in the kit.
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Cell and Gene Therapy Viral Vector Lysis Kit (1000 rxn)

Cat. No. / ID:  250273

Inclus dans le kit : stabilisateur d’échantillon CGT, DNase I, eau exempte de nucléase, tampon de lyse CGT, tampon DNase I CGT et tampon de dilution CGT pour traiter 1000 échantillons d’AAV 
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1 655,00 €
Recommended restriction enzyme HpaII is not included in the kit.

Features

  • Un kit et un protocole pour la lyse de l’AAV permettent la standardisation et le contrôle qualité (CQ) des procédures actuelles
  • Mesure constante et reproductible des titres viraux pour plusieurs sérotypes (p. ex. sérotypes d’AAV)
  • Procédure complète associée aux QIAcuity Cell and Gene Therapy (CGT) dPCR Assays et mesure de précision des titres d’AAV sur le QIAcuity Digital PCR System

Product Details

Le virus adéno-associé est un vecteur viral largement utilisé dans les applications de thérapie génique. Cependant, le processus de génération et de purification des vecteurs viraux requiert un contrôle qualité précis pour permettre un dosage sûr et fiable pendant les études cliniques ou le traitement du patient. La capacité à quantifier avec précision les titres des vecteurs et à déterminer la contamination est essentielle pour des thérapies géniques basées sur l’AAV sûres et efficaces. 


Grâce au CGT Viral Vector Lysis Kit qui comprend des réactifs pour 100 ou 1 000 réactions, nous bénéficions désormais d’une procédure optimisée et standardisée pour la lyse des vecteurs viraux avec un mode précis de détermination du titre viral. Ce kit est également compatible avec les adénovirus.

Performance

Nous proposons une procédure complète de la lyse de l’AAV à la quantification du titre viral à partir de lysats cellulaires. Avec sa formule améliorée, le CGT Viral Vector Lysis Kit permet une détermination homogène, précise et fiable du titre final. Il fonctionne avec les QIAcuity Cell and Gene Therapy dPCR Assays, le QIAcuity Digital PCR System, le QIAcuity Probe PCR Kit et la QIAcuity Nanoplate 8.5K, permettant ainsi une procédure de dPCR complète comparable à la qPCR, mais avec une quantification absolue des copies du génome du vecteur d’AAV dans votre échantillon.

Principle

La solution tout-en-un pour la lyse de l’AAV comprend :

  • Standardisation de la lyse de l’AAV avec une procédure de fonctionnement standard (Standard Operating Procedure, SOP) et mise en œuvre et un CQ nettement plus faciles
  • Quantification homogène des titres
  • Large plage de détection, entre 2,5 copies/µl et 15 000 copies/µl sur la QIAcuity Nanoplate 8.5k
  • Fiabilité du CV < 10 % entre les opérateurs et les dosages

Le CGT Viral Vector Lysis Kit associé aux QIAcuity Cell and Gene Therapy dPCR Assays et au QIAcuity Probe PCR Kit réalisant des réactions simplex ou multiplex sur les instruments QIAcuity permettent à présent une procédure complète de titre viral.

Vous trouverez ici une description du principe de la réaction de dPCR sur nanoplaque.

 

Procedure

Le CGT Viral Vector Lysis Kit est fourni avec des réactifs pour 100 ou 1 000 réactions dans deux boîtes pour les vecteurs d’AAV. Le kit permet la lyse de l’AAV2, AAV5, AAV6, AAV8 et AAV9. Les lysats sont optimisés pour les QIAcuity Cell and Gene Therapy dPCR Assays associés au QIAcuity Probe PCR Kit. Ces dosages permettent des applications de thérapie cellulaire et génique simplex comme multiplex, y compris les mesures du titre viral et du nombre de copies du vecteur. Le kit n’inclut pas les enzymes de restriction (p. ex. pour Hpall) qui apparaissent dans le protocole (figurant dans la section Ressources ci-après).

Applications

Le CGT Viral Vector Lysis Kit est utilisé pour la lyse de l’AAV et des adénovirus pour diverses applications, notamment les mesures du titre du génome du vecteur viral et du nombre de copies du vecteur.

Supporting data and figures

Resources

Brochures & Guides (1)
Quick-Start Protocols (2)
This protocol is optimized for the processing of viral vectors for genome titer quantification on the QIAcuity® digital PCR instrument using the dPCR CGT Viral Vector Lysis Kits (cat. nos. 250272, 250273). The kits are optimized for usage with the QIAcuity Probe PCR Kit (cat. nos. 250101, 250102, 250103) and the QIAcuity Cell and Gene Therapy (CGT) dPCR Assays.
This protocol is optimized for the processing of viral vectors for genome titer quantification on the QIAcuity® digital PCR instrument using the dPCR CGT Viral Vector Lysis Kits (cat. no. 250272, 250273). The kits are optimized for usage with the QIAcuity Probe PCR Kit (cat. no. 250101, 250102, 250103) and the QIAcuity Cell and Gene Therapy (CGT) dPCR Assays
Safety Data Sheets (1)
Certificates of Analysis (1)

FAQ

Do you have to use a restriction enzyme to relieve ITR secondary structures and increase target accessibility?
It is highly recommended and an important step in the protocol. ITR secondary structures reduce target accessibility and negatively affect quantification of ITR targets and non-ITR targets.
We recommend using the following HpaII restriction enzymes: Thermo Scientific™ HpaII (10 U/µL, cat. nos. ER0511, ER0512) or Invitrogen™ Anza™ 93 HpaII (cat. no. IVGN0936).
FAQ ID - 3974
Do you need to dilute the lysates before setting up the PCR mix?
The lysates must be diluted in total of at least 1:100 taking together the dilution after capsid lysis and the dilution in the PCR reaction. A total of 200x dilution is recommended.
FAQ ID - 3978

Do I need to use Proteinase K in the CGT Viral Vector Lysis Kit? What is the recommended concentration?
No, Proteinase K use is optional and does not interfere with the kit performance. It is recommended to use 2 µL of Proteinase K (RP107B) in a 50 µL reaction. The Proteinase K has a concentration of 20mg/mL with 800 U/mL.
FAQ ID - 3971
Is the kit compatible with unpurified in-process samples?
Yes, it is.
FAQ ID - 3965
Can I use the lysate from the CGT Viral Vector Lysis kit and combine it with another PCR system?
Yes, however, the complete workflow has been optimized with the QIAcuity Cell and Gene Therapy (CGT) dPCR Assays on the QIAcuity Digital PCR System to ensure standardization and reproducibility of viral vector titer determinations.
FAQ ID - 3979

How do I know if the CGT dPCR assays are compatible with the sample DNA of interest?
An extended sequence context for each assay is provided in the corresponding data sheets. 
FAQ ID - 3980

Are the CGT dPCR assays also compatible with qPCR?
Yes, the assays can also be used for vector genome titration in a qPCR setup.
FAQ ID - 3981

Is it possible to store the lysates? How can the lysates be stored?
Long-term storage of lysates is not recommended. If lysates must be stored, it is recommended to store them at 4°C. Do not freeze.
FAQ ID - 3973
Can I use MspI or HpaII restriction enzymes from other suppliers?
The HpaII enzymes from Thermo Fisher Scientific ER0511, ER0512 and IVGN0936 have been extensively tested and show high compatibility with the QIAcuity Probe PCR chemistry. Use of MspI enzymes is not recommended. Compatibility of alternative enzymes must be individually tested and may need additional optimization.
FAQ ID - 3975
How many AAV genome copies can I load into the QIAcuity?
Recommended detection range in the dPCR using a 8.5k nanoplate is between 2.5 cop/μL to 15,000 copies/μL.
FAQ ID - 3977
Can the CGT Viral Vector Lysis kit be used with assays of other suppliers or custom designed assays?
Yes. Optimization of the cycling and imaging conditions might be needed.
FAQ ID - 3982

What is the recommended HpaII concentration?
Enzyme concentration depends on sample input and incubation time. When following our protocol described in the handbook HpaII enzymes work in the following range:
  • IVGN0936: 0.025 – 0.125 U/µL
  • ER0511/ER0512: 0.25 – 0.5 U/µL
FAQ ID - 3976
Do you recommend storage of highly diluted AAV samples?
No, it is not recommended to store AAV samples in a highly diluted state.
FAQ ID - 3972