CGT Viral Vector Lysis Kit

Para la lisis de vectores virales, así como distintos serotipos de virus adenoasociado (Adeno-Associated Virus, AAV) y adenovirus

Products

El CGT Viral Vector Lysis Kit está concebido para su uso en aplicaciones de biología molecular. Este producto no está concebido para el diagnóstico, la prevención ni el tratamiento de enfermedades.
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Cell and Gene Therapy Viral Vector Lysis Kit (100 rxn)

Cat. No. / ID:  250272

El kit incluye: Estabilizador de muestra para CGT, DNasa I, agua libre de nucleasas, tampón de lisis para CGT, tampón de DNasa I para CGT y tampón de dilución para CGT suficiente para procesar 100 muestras de AAV 
Copy order details
Recommended restriction enzyme HpaII is not included in the kit.
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Cell and Gene Therapy Viral Vector Lysis Kit (1000 rxn)

Cat. No. / ID:  250273

El kit incluye: Estabilizador de muestra para CGT, DNasa I, agua libre de nucleasas, tampón de lisis para CGT, tampón de DNasa I para CGT y tampón de dilución para CGT suficiente para procesar 1000 muestras de AAV 
Copy order details
Recommended restriction enzyme HpaII is not included in the kit.

Features

  • La solución en un kit y un protocolo para la lisis de AAV permite la normalización y el control de calidad (CC) de los flujos de trabajo actuales
  • Medición coherente y reproducible de los títulos virales para varios serotipos (p. ej., serotipos AAV)
  • Flujo de trabajo completo combinado con QIAcuity Cell and Gene Therapy (CGT) dPCR Assays y medición exacta de los títulos de AAV con el QIAcuity Digital PCR System

Product Details

El virus adenoasociado es un vector viral ampliamente usado en aplicaciones de terapia génica. Sin embargo, el proceso de generación y purificación de los vectores virales requiere un preciso control de calidad para permitir una dosificación segura y fiable durante los estudios clínicos o el cuidado de los pacientes. La capacidad para cuantificar con exactitud los títulos del vector, así como determinar si existe contaminación, es la clave para aplicar terapias génicas basadas en AAV seguras y eficaces. 


Con la introducción del CGT Viral Vector Lysis Kit, que incluye reactivos para 100 o 1000 reacciones, ahora disponemos de un flujo de trabajo optimizado y normalizado para la lisis del vector viral a través de una forma exacta y precisa de determinar el título viral. El kit también es compatible con adenovirus.

Performance

Ofrecemos un flujo de trabajo completo, desde la lisis del AAV hasta la cuantificación del titulo viral a partir de lisados celulares. El CGT Viral Vector Lysis Kit, con su fórmula mejorada, proporciona una determinación coherente, robusta y exacta del titulo final. Trabajando en conjunto con los QIAcuity Cell and Gene Therapy dPCR Assays, el QIAcuity Digital PCR System, QIAcuity Probe PCR Kit y QIAcuity Nanoplate 8.5K, ofrecen un flujo de trabajo de dPCR de principio a fin comparable al de la qPCR, pero proporcionando una cuantificación absoluta de las copias del genoma del vector AAV en su muestra.

Principle

La solución todo en uno para lisis de AAV proporciona:

  • Normalización de la lisis de AAV con la implementación de procedimientos normalizados de trabajo (PNT) y control de calidad (QC) mucho más sencillos
  • Cuantificación coherente de títulos
  • Amplio intervalo de detección de entre 2,5 copias/µl y 15 000 copias/µl en Nanoplaca QIAcuity de 8.5k
  • Robustez con un coeficiente de variación (CV) <10 % entre operadores y ensayos

El CGT Viral Vector Lysis Kit, junto con los QIAcuity Cell and Gene Therapy dPCR Assays y celular y el QIAcuity Probe PCR Kit que realizan reacciones únicas o múltiples en los instrumentos QIAcuity, ofrece ahora un flujo de trabajo completo de título viral.

El principio de la reacción de dPCR en las nanoplacas se describe aquí.

 

Procedure

El CGT Viral Vector Lysis Kit se suministra con reactivos para 100 o 1000 reacciones en dos cajas para vectores AAV. El kit es apto para la lisis de AAV2, AAV5, AAV6, AAV8 y AAV9. Los lisados están optimizados para los QIAcuity Cell and Gene Therapy dPCR Assays en combinación con el QIAcuity Probe PCR Kit. Estos ensayos permiten aplicaciones de terapia celular y génica tanto únicas como múltiples, incluidas mediciones de títulos virales y número de copias del vector. El kit no incluye las enzimas de restricción (p. ej., Hpall) que se indican en el protocolo (incluido en la sección Recursos a continuación).

Applications

El CGT Viral Vector Lysis Kit se utiliza para la lisis de AAV y adenovirus para un rango de aplicaciones, incluidas las mediciones de títulos genómicos del vector viral y número de copias del vector.

Supporting data and figures

Resources

Brochures & Guides (1)
Quick-Start Protocols (2)
This protocol is optimized for the processing of viral vectors for genome titer quantification on the QIAcuity® digital PCR instrument using the dPCR CGT Viral Vector Lysis Kits (cat. nos. 250272, 250273). The kits are optimized for usage with the QIAcuity Probe PCR Kit (cat. nos. 250101, 250102, 250103) and the QIAcuity Cell and Gene Therapy (CGT) dPCR Assays.
This protocol is optimized for the processing of viral vectors for genome titer quantification on the QIAcuity® digital PCR instrument using the dPCR CGT Viral Vector Lysis Kits (cat. no. 250272, 250273). The kits are optimized for usage with the QIAcuity Probe PCR Kit (cat. no. 250101, 250102, 250103) and the QIAcuity Cell and Gene Therapy (CGT) dPCR Assays
Safety Data Sheets (1)
Certificates of Analysis (1)

FAQ

Do you have to use a restriction enzyme to relieve ITR secondary structures and increase target accessibility?
It is highly recommended and an important step in the protocol. ITR secondary structures reduce target accessibility and negatively affect quantification of ITR targets and non-ITR targets.
We recommend using the following HpaII restriction enzymes: Thermo Scientific™ HpaII (10 U/µL, cat. nos. ER0511, ER0512) or Invitrogen™ Anza™ 93 HpaII (cat. no. IVGN0936).
FAQ ID - 3974
Do you need to dilute the lysates before setting up the PCR mix?
The lysates must be diluted in total of at least 1:100 taking together the dilution after capsid lysis and the dilution in the PCR reaction. A total of 200x dilution is recommended.
FAQ ID - 3978

Do I need to use Proteinase K in the CGT Viral Vector Lysis Kit? What is the recommended concentration?
No, Proteinase K use is optional and does not interfere with the kit performance. It is recommended to use 2 µL of Proteinase K (RP107B) in a 50 µL reaction. The Proteinase K has a concentration of 20mg/mL with 800 U/mL.
FAQ ID - 3971
Is the kit compatible with unpurified in-process samples?
Yes, it is.
FAQ ID - 3965
Can I use the lysate from the CGT Viral Vector Lysis kit and combine it with another PCR system?
Yes, however, the complete workflow has been optimized with the QIAcuity Cell and Gene Therapy (CGT) dPCR Assays on the QIAcuity Digital PCR System to ensure standardization and reproducibility of viral vector titer determinations.
FAQ ID - 3979

How do I know if the CGT dPCR assays are compatible with the sample DNA of interest?
An extended sequence context for each assay is provided in the corresponding data sheets. 
FAQ ID - 3980

Are the CGT dPCR assays also compatible with qPCR?
Yes, the assays can also be used for vector genome titration in a qPCR setup.
FAQ ID - 3981

Is it possible to store the lysates? How can the lysates be stored?
Long-term storage of lysates is not recommended. If lysates must be stored, it is recommended to store them at 4°C. Do not freeze.
FAQ ID - 3973
Can I use MspI or HpaII restriction enzymes from other suppliers?
The HpaII enzymes from Thermo Fisher Scientific ER0511, ER0512 and IVGN0936 have been extensively tested and show high compatibility with the QIAcuity Probe PCR chemistry. Use of MspI enzymes is not recommended. Compatibility of alternative enzymes must be individually tested and may need additional optimization.
FAQ ID - 3975
How many AAV genome copies can I load into the QIAcuity?
Recommended detection range in the dPCR using a 8.5k nanoplate is between 2.5 cop/μL to 15,000 copies/μL.
FAQ ID - 3977
Can the CGT Viral Vector Lysis kit be used with assays of other suppliers or custom designed assays?
Yes. Optimization of the cycling and imaging conditions might be needed.
FAQ ID - 3982

What is the recommended HpaII concentration?
Enzyme concentration depends on sample input and incubation time. When following our protocol described in the handbook HpaII enzymes work in the following range:
  • IVGN0936: 0.025 – 0.125 U/µL
  • ER0511/ER0512: 0.25 – 0.5 U/µL
FAQ ID - 3976
Do you recommend storage of highly diluted AAV samples?
No, it is not recommended to store AAV samples in a highly diluted state.
FAQ ID - 3972