QIAwave Plasmid Miniprep Kit

Die umweltfreundlichere Alternative zu unserem Standardkit für die Extraktion von bis zu 20 μg Plasmid-DNA in molekularbiologischer Qualität

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QIAwave Plasmid Miniprep Kit (50)

Cat. No. / ID:  27204

QIAprep 2.0 Spin Columns, Waste Tubes (2 ml), Reagents  
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125,00 $
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KitKit component
Eco-friendlier kit
Waste Tubes
Preparations
50
250
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Features

  • Qualität und Leistung der Plasmid-DNA identisch mit dem QIAprep Spin Miniprep Kit
  • Bis zu 22 % weniger Kunststoff und bis zu 14 % weniger Karton im Vergleich zum QIAprep Spin Miniprep Kit
  • Wiederverwendbare Abfallröhrchen aus 100 % recyceltem Kunststoff
  • Pufferkonzentrate, die bis zu 93 % weniger Kunststoff verbrauchen als unsere Standardpuffer

 

Product Details

Das QIAwave Plasmid Miniprep Kit ist umweltfreundlicher als unser Standard QIAprep Spin Miniprep Kit, denn es verbraucht bis zu 22 % weniger Kunststoff und bis zu 14 % weniger Karton. Es enthält Abfallröhrchen aus 100 % recyceltem Kunststoff, die Sie während des gesamten Verfahrens wiederverwenden können. QIAwave Puffer werden als Konzentrate bereitgestellt, was die Kunststoffmenge pro Flasche um bis zu 93 % reduziert. Um Papier zu sparen, enthält das Kit keine ausgedruckten Protokolle. Sie können die Protokolle herunterladen oder den QR-Code in der Kit-Verpackung scannen. Obwohl Verpackung und Komponenten unseres QIAwave Kit anders aussehen, sind einfache Handhabung, Chemie und Ergebnisse identisch zum Standard-Kit.


Wichtig: Für die Lagerung der rekonstituierten Puffer benötigen Sie sterile Glasflaschen.


Gemeinsam mit My Green Lab haben wir die Umweltverträglichkeit dieses Kits untersucht. Die My Green Lab ACT-Label wurden für die Produktbewertung und -einstufung anhand mehrerer Nachhaltigkeitskriterien entwickelt, u . a.:


• Herstellung
• Verantwortungsvoller Umgang mit Chemikalien
• Nachhaltige Inhaltsstoffe bei Produkten und Verpackungsmaterialien
• Entsorgung der Verpackung am Ende des Lebenszyklus

Die Produkte werden von 1–10 bewertet, mit Ausnahme des Energie- und Wasserverbrauchs mit 1 Punkt/kWh bzw. Gallone (3,785 Liter). Je niedriger die Punktzahl, desto geringer die Umweltbelastung (siehe Abbildungen „QIAwave Plasmid Miniprep Kit ACT Umweltverträglichkeitslabel USA 50/ 250, EU 50/ 250 und UK 50/ 250“).


Mit dem QIAwave Plasmid Miniprep Kit lassen sich bis zu 20 μg hochreiner Plasmid- oder Cosmid-DNA für molekularbiologische Routineanwendungen isolieren, wie z. B. fluoreszenz- und radioaktivitätsbasierte Sequenzierung und Klonierung. Mit dem QIAprep High-Yield Supplementary Protocol sind sogar noch höhere Ausbeuten (≤30 μg) möglich. Für optimale Ergebnisse empfehlen wir die Kombination mit dem QIAvac 24 Plus.

 

See figures

Performance

Die Leistung unseres QIAwave Plasmid Miniprep Kits und des QIAprep Spin Miniprep Kits ist identisch, da die Chemie die gleiche ist. Wir konnten zudem zeigen, dass beide Kits die Wettbewerberprodukte übertreffen (siehe Abbildung „ Leistung des QIAwave-Kits“).

Mit dem QIAwave Plasmid Miniprep Kit lassen sich bis zu 20 μg Plasmid-DNA oder Cosmid-DNA in molekularbiologischer Qualität aufreinigen, um sie in molekularbiologischen Routineanwendungen wie PCR, Sequenzierung und Klonierung einzusetzen.

Die QIAprep 2.0 Spin-Säulen sind so vielseitig, dass sie in Mikrozentrifugen, auf Vakuumgeräten und auf dem QIAcube Connect verwendet werden können (siehe Abbildungen „Handhabungsoptionen für QIAprep 2.0 Spin-Säulen:  Mikrozentrifuge,  Vakuumgerät und  automatisiertes System“). Das Vakuumverfahren vereinfacht die Handhabung und beschleunigt die Bearbeitung von Proben. Die QIAprep 2.0 Spin-Säulen können auch mit dem QIAvac 24 Plus oder jedem anderen handelsüblichen Vakuumgerät mit Luer-Anschlüssen bearbeitet werden.

Format Spin-Säulen
Aufreinigungsmodul QIAprep 2.0 Spin Columns
Durchsatz 1–24 Proben
Vorbereitungszeit 24 Minipräps in 30 Minuten
Erforderliche Arbeitsmittel Mikrozentrifuge oder Vakuumverteiler; vollständig automatisierbar mit QIAcube Connect
Lysatbereinigung Zentrifugation
Fassungsvermögen des Säulenreservoirs 800 µl
Minimales Elutionspuffervolumen 50 µl
Kulturvolumen für Plasmide mit hoher Kopienzahl 1–5 ml
Kulturvolumen für Plasmide mit geringer Kopienzahl/Cosmide 1–10 ml

Aufgereinigte DNA kann für den Restriktionsverdau verwendet werden (siehe Abbildung „ Kompletter Verdau mit verschiedenen Restriktionsenzymen“).

Wir haben auch die Ausbeuten an Plasmid-DNA verglichen, die mit dem QIAwave Plasmid Miniprep Kit (50) Puffer, hergestellt durch Gießen oder Pipettieren, und den QIAprep Spin Miniprep Kit (50) Standardpuffern erzielt wurden. Beide Methoden ergeben vergleichbare Ausbeuten, wie aus Abbildung “ Handhabung von Pufferkonzentraten” ersichtlich.

 

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Principle

Die QIAprep 2.0 Spin Columns enthalten eine einzigartige Silikamembran, die bei Vorliegen einer hohen Konzentration an chaotropem Salz bis zu 20 μg DNA bindet und die Elution in einem kleinen Volumen salzarmen Puffers ermöglicht. Mit der QIAprep Membrantechnologie entfallen die zeitaufwändige Phenol-Chloroform-Extraktion und die Alkoholausfällung sowie die Probleme und Nachteile, die mit losen Harzen und Aufschlämmungen einhergehen. Die aus den QIAprep 2.0 Spin Columns eluierte hochreine Plasmid-DNA ist sofort einsatzbereit und muss nicht ausgefällt, konzentriert oder entsalzt werden.

 

Procedure

Die Aufreinigung von DNA-Plasmiden mit dem QIAwave Plasmid Miniprep erfolgt nach einem einfachen Verfahren zum Binden, Waschen und Eluieren (siehe Flussdiagramm „ QIAwave Plasmid Miniprep Verfahren“).

1. Die Bakterienkulturen lysieren und die Lysate durch Zentrifugation bereinigen.

2. Die bereinigten Lysate in die QIAprep 2.0 Spin Columns einbringen. An diesem Punkt adsorbiert die Plasmid-DNA an der Silikamembran und Verunreinigungen werden weggewaschen.

3. Die reine DNA wird dann in einem kleinen Volumen Elutionspuffer oder Wasser eluiert.

Neben der Aufreinigung der Plasmid-DNA aus E. coli kann das QIAwave Plasmid Mini Kit auch zur Aufreinigung von Plasmid-DNA aus Saccharomyces cerevisiae, Bacillus subtilis und Agrobacterium tumefaciens verwendet werden. Sollten Sie Protokolle für diese Anwendungen benötigen, wenden Sie sich bitte an unser Team des technischen Kundendienstes oder an Ihren Händler vor Ort.

QIAwave Puffer werden als Konzentrate geliefert und lassen sich durch Zugabe von Wasser und/oder Ethanol leicht rekonstituieren; Einzelheiten entnehmen Sie bitte dem Handbuch. QIAwave QIAprep 2.0 Spin Columns und Waste Tubes werden einzeln verpackt geliefert und müssen vor Protokollbeginn vormontiert werden. Das kostet zwar etwas mehr Zeit, reduziert aber den Plastikmüll.

Das QIAwave Plasmid Miniprep Kit kann auf dem QIAcube Connect mit den QIAprep Spin Miniprep Kit Protokollen automatisiert werden.

 

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Applications

Das QIAwave Plasmid Miniprep Kit liefert reproduzierbare Ausbeuten an hochreiner DNA, die sich für die meisten Anwendungen eignet, einschließlich:

  • PCR
  • Restriktionsaufschluss
  • Ligation und Transformation
  • Sequenzierung
  • Screening

 

Supporting data and figures

Specifications

FeaturesSpecifications
ApplicationsFluoreszenz- und radioaktive Sequenzierung (einschließlich Kapillarsequenzierung), Ligation, Klonierung, Transformation etc.
ProcessingManuell (Zentrifugation oder Vakuum)
Plasmid typeHigh-Copy, Low-Copy, Cosmid-DNA
Culture volume/starting material1–10 ml Kulturvolumen
Elution volume50 µl (Minimum)
TechnologySilikatechnologie
Time per run or prep per run<30 Minuten
Yield<20 ug
Samples per run (throughput)1–24 Proben pro Lauf
Number of preps per run1–24 Proben pro Lauf

FAQ

What is the advantage of running an analytical gel with fractions of my plasmid preparation?

Running fractions saved from each step in the plasmid preparation procedure on an agarose gel enables monitoring the performance of each crucial step in the protocol. If the plasmid DNA is of low yield or quality, the samples can be analyzed to determine at what stage of the purification procedure the difficulty occurred.

Aliquots can be taken from the cleared lysate and the flow-throughs as indicated in the relevant protocols, precipitated with isopropanol and resuspended in a small volume of TE buffer.

Please see the Troubleshooting Section of the QIAprep Miniprep Handbook and Appendix A of the QIAGEN Plasmid Purification Handbook for instructions, and a picture and legend explaining the typical results you may see. You can also access this information on our Plasmid Resource Pages.

FAQ ID -769
What is the recipe for LB?
Preparation of LB medium: Dissolve 10 g tryptone, 5 g yeast extract, and 10 g NaCl in 800 ml dH2O. Adjust the pH to 7.0 with 1 N NaOH. Adjust the volume to 1 liter with dH2O. Sterilize by autoclaving.
FAQ ID -212
How do I know if my plasmid is a high- or low copy number type?

Find out which origin of replication your plasmid contains, and look at the table below for classification into high-copy or low-copy types. This table can also be found online at the QIAGEN Plasmid Resource Center in the section 'Growth of bacterial cultures; Plasmid Copy Number' . A way to determine experimentally if the copy number of your plasmid is high or low is to perform a miniprep. A high-copy plasmid should yield between 3-5 ug DNA per 1 ml LB culture, while a low-copy plasmid will yield between 0.2-1 ug DNA per ml of LB culture.

 

Origins of replication and copy numbers of various plasmids and cosmids

DNA construct Origin of Replication Copy number Classification
Plasmids      
pUC vectors pMB1* 500–700 high copy
pBluescript® vectors ColE1 300–500 high copy
pGEM® vectors pMB1* 300–400 high copy
pTZ vectors pMB1* >1000 high copy
pBR322 and derivatives pMB1* 15–20 low copy
pACYC and derivatives p15A 10–12 low copy
pSC101 and derivatives pSC101 ~5 very low copy
Cosmids      
SuperCos pMB1* 10-20 low copy
pWE15 ColE1 10-20 low copy

* The pMB1 origin of replication is closely related to that of ColE1 and falls in the same incompatibility group. The high-copy plasmids listed here contain mutated versions of this origin.

FAQ ID -350
Can I eliminate RNase A from buffer P1 for my plasmid preparation to obtain RNase-free DNA for in-vitro transcription?
No, RNase A should not be omitted from buffer P1. It is required to prevent RNA contamination of the purified plasmid DNA. RNase A will not interfere with downstream in-vitro transcription experiments, since it will be efficiently removed during the plasmid purification procedures using QIAGEN Plasmid Kits.
FAQ ID -366
I left Buffer P1 at room temperature after addition of RNase A, what shall I do?

Buffer P1 with RNase A used in QIAGEN Plasmid Purification Kits should be fine at room temperature for a few days. We would expect the enzyme to have some residual activity. However, optimal results cannot be guaranteed after storage at room temperature. If you notice that RNase A activity is substantially reduced, you can add fresh RNase A to your buffer.

We recommend that Buffer P1 with RNase A be stored in the refrigerator (2–8°C). RNase A will be stable for 6 months under this condition.

FAQ ID -859
How do I perform a DNA precipitation to concentrate my sample?
  • Add 1/10 volume of 3 M Na-Acetate pH 5.2, and 2 to 2.5 volumes of ice-cold 100% ethanol to the DNA sample
  • Mix, and store at –20°C for at least 1 h to precipitate the DNA
  • Recover the precipitated DNA by centrifugation at full speed in a microcentrifuge for 15–20 min
  • Pour off the ethanol and wash the pellet twice with room-temperature 70% ethanol
  • Allow the DNA pellet to air-dry
  • resuspend the DNA in a suitable volume of sterile TE buffer or distilled water
FAQ ID -305
With LyseBlue reagent for lysis control, can I now process more bacterial culture and overload the columns?

No. The maximum culture volumes recommended for QIAGEN's plasmid preparation kits still apply, and should be strictly followed. LyseBlue reagent now allows the user to monitor potential problems (insufficient bacterial cell resuspension and lysis as a consequence of overloading) early in the plasmid preparation process.

FAQ ID -864
What is the recipe for 2x YT?
2x YT medium, per liter 16 g tryptone 10 g yeast extract 5 g NaCl Media Preparation and Bacteriological Tools. Edited by: Fred M. Ausubel, Roger Brent, Robert E. Kingston, David D. Moore, J.G. Seidman, John A. Smith, Kevin Struhl Current Protocols in Molecular Biology (1994), Section 1.1.3.
FAQ ID -213
What are the additional plasmid bands I see on my gel?

Open circular plasmid, resulting from single strand nicks, usually migrates slower in agarose gels and forms (faint) bands above the supercoiled plasmid DNA band. Sometimes an additional band of denatured supercoiled DNA migrates just below the supercoiled form. This form may result from prolonged alkaline lysis with Buffer P2 and is resistant to restriction digestion.

For a detailed description on how to run and interpret an analytical gel, please see Appendix A in the QIAGEN Plasmid Purification Handbook: "Agarose Gel Analysis of the Purification Procedure", or visit this link.

FAQ ID -1059
Do you have a protocol for the isolation of plasmid DNA from Bacillus subtilis?
What is the composition of Buffer PB?
Buffer PB contains a high concentration of guanidine hydrochloride and isopropanol. The exact composition of Buffer PB is confidential. However, this buffer can be purchased separately: Buffer PB.
FAQ ID -2791
Do you have a protocol for obtaining > 20 µg plasmid DNA using the QIAprep Spin Miniprep Kit?
Why is my plasmid DNA yield low?

Low yields of plasmid DNA can be caused by a number of different factors. The most common causes for low yield are poor culturing conditions and plasmid propagation, excessive amounts of starting material resulting in insufficient bacterial cell lysis and column overloading. When working with the anion-exchange based QIAGEN Plasmid Purification Kits, extra care is required during the isopropanol precipitation step, as the glassy DNA pellet may be difficult to see, and tends to be only loosely attached to the side of the tube.

We strongly recommend to review the information provided on our Plasmid Resource Page in the section 'Optimal results with QIAGEN plasmid kits', as it provides useful background information on growing bacterial cultures and general considerations for optimal results. It is also necessary to follow the instructions in the relevant protocols precisely to ensure the best plasmid yield and quality.

To determine at what stage of the procedure any problem occurred, save fractions from different steps of the purification procedure, and analyze by agarose gel electrophoresis. For a detailed description on how to run and interpret an analytical gel, please see Appendix A in the QIAGEN Plasmid Purification Handbook: "Agarose Gel Analysis of the Purification Procedure", or visit the QIAGEN Plasmid Resource Center.

 

 

FAQ ID -768
Why do I get genomic DNA contamination in my plasmid prep?

Too vigorous mixing of the bacterial lysate causes genomic DNA to appear in the eluate. The lysate must be handled gently after addition of buffers P2 and P3 to prevent shearing of chromosomal DNA. The culture volume needs to be reduced if the lysate is too viscous for gentle mixing.

Use of LyseBlue Reagent enables visualization of efficient bacterial cell resuspension as a prerequisite for complete lysis, thereby helping to avoid overloading of the columns and additional difficulties related to highly viscous lysates.

Additional information for successful plasmid preparations using QIAGEN's broad selection of Plasmid Kits can be found at our Plasmid Resource Center.

FAQ ID -353
Do you have a protocol for the isolation of plasmid DNA from Agrobacterium?
FAQ ID -898
I am seeing a precipitate after adding LyseBlue reagent to Buffer P1. What should I do about that?

A precipitate forming upon adding LyseBlue reagent to Buffer P1 is a normal observation. This precipitate will completely dissolve after addition of Buffer P2. Please be sure to shake Buffer P1 vigorously before use to completely resuspend LyseBlue particles.

FAQ ID -1045
What to do if cell clumps are present after Buffer P2 addition when using LyseBlue Reagent?

If cell clumps are present after adding Buffer P2 to your samples when using a QIAGEN Plasmid Purification Kit in combination with LyseBlue Reagent, you have two options:

  • pipet the cell clumps up and down for resuspension
  • transfer any clumps to a separate tube, add Buffer P1 and mix vigorously for resuspension, add Buffer P2 for lysis, and subsequently transfer the lysed material back to combine it with the rest of the original solution

Note: Avoid incubation times longer than 5 minutes in Buffer P2 as this will irreversibly denature plasmid DNA. In the scenario above, Buffer P3 may need to be added to portions of the sample, which can be subsequently combined once resuspension, lysis and neutralization of all fractions is complete.

FAQ ID -861
What is the recipe for SOC medium?

The components of the SOC medium are:

  • 0.5% Yeast Extract
  • 2% Tryptone
  • 10 mM NaCl
  • 2.5 mM KCl
  • 10 mM MgCl2
  • 10 mM MgSO4
  • 20 mM Glucose*

*Note: add Glucose after autoclaving the solution with the remaining ingredients, and letting it cool down. Sterilize the final solution by passing it through a 0.2 µm filter.

SOC medium can be stored at room temperature and is stable for several years.

FAQ ID -798