miRCURY LNA miRNA Probe PCR Assay

利用 LNA 增强的、基于探针的 qPCR 技术,对成熟 miRNA 进行极其灵敏和准确的定量分析

S_1084_5_GEN_V2
Configure at GeneGlobe
Find or custom design the right target-specific assays and panels to research your biological targets of interest.
miRCURY LNA miRNA Probe PCR Assay (200)

Cat. No. / ID:  339350

包含 LNA 增强的目标特异性正向引物和探针的全套预混合检测试剂盒。适用于 200 次反应。
Copy order details
Log in To see your account pricing.
Configure at GeneGlobe
Find or custom design the right target-specific assays and panels to research your biological targets of interest.

Features

  • LNA 增强的 miRNA 特异性正向 PCR 引物和水解探针
  • 在极低的检测范围(低至 1 个 miRNA 拷贝)内检测真实信号
  • 快速、简单的两步工作流程,只需 2 小时
  • 稳健性和可重复性高,结果可靠

Product Details

miRCURY LNA miRNA Probe PCR Assay 是一套 miRNA PCR 引物探针,可利用 miRCURY LNA miRNA Probe PCR 系统进行极其灵敏和特异的 miRNA 定量。该系统坚固耐用、灵敏度高,能从 RNA 含量低的样品(包括血清、血浆和尿液)中准确检测 miRNA。正向 PCR 扩增引物和 FAM 及深色淬灭基团标记探针都是 miRNA 特异性的,并采用 LNA 技术进行了优化,从而提高了检测性能。所有重要 miRNA 的检测都经过湿法工作台验证。除了涵盖 miRBase 中所有 miRNA 的预先设计的检测方法外,miRCURY LNA miRNA Custom Probe PCR Assay 也可以使用相同的设计算法,针对任何感兴趣的 miRNA 轻松创建。

需要就您的研究项目获取相关报价或想要与我们的专家团队就您的项目进行讨论吗?请尽管联系我们!

Performance

高灵敏度检测真实信号

通过将通用逆转录与 LNA 增强、Tm 归一化、miRNA 特异性引物和探针相结合,实现了 miRCURY LNA miRNA Probe Assay 超高的灵敏度。这种组合能准确、可靠地定量单个 miRNA,可低至 1 pg 总 RNA 或 1 个分子,无需预扩增(见 即使起始材料少也能准确定量以及在宽动态范围内效率极高)。该系统灵敏度高、工作流程快,特别适用于血清或血浆样本,QuantiNova 酶可确保技术和生物重复之间的结果首次尝试就具有高度的可重复性,从而节省了样品材料和时间。

与其他仅靠探针产生特异性的基于 miRNA 探针的 PCR 系统相比,miRCURY LNA miRNA Probe Assay 的 LNA 增强引物和探针既具有 miRNA 特异性,又足够短,可防止与靶标结合时发生重叠(见  miRCURY LNA miRNA Probe PCR 系统概览)。因此,miRCURY LNA miRNA Probe Assay 在效率(见 与其他方法相比效率提高)、线性度和无预扩增灵敏度(见 提高线性度和无预扩增高灵敏度)方面都优于其他方法。结合出色的信噪比(见 即使在高 RNA 背景下也能准确检测),这一独特功能可区分序列差异小至一个核苷酸的近缘 miRNA(见 差异小至一个核苷酸的区分能力)。

经过验证和优化

检测设计(引物和探针)基于 LNA 和检测专家创建的设计算法。该综合算法根据高度严格的性能标准对 60 个参数进行评估和优化,这些参数已得到计算机模拟验证,以确保设计能提供最高的灵敏度。其结果是能检测到 1 个 miRNA 拷贝的检测方法。所有重要 miRNA 的检测也都经过了充分的湿法实验台验证。

覆盖范围

可提供超过 30,000 种检测方案,覆盖了所有 miRBase 22。1,000 多种检测方法都经过了全面的湿实验室验证,以检测灵敏度、特异性、效率和背景。其余检测方案均使用综合设计算法进行了计算机模拟验证,符合严格的检测性能标准,可确保高品质、物种特异性、LNA 增强的检测方案在每个生物体上实现最佳灵敏度和特异性如果您正在处理新型 miRNA,如来自 NGS 实验的 miRNA,可使用 miRCURY LNA miRNA Custom Probe PCR Assay 设计自己的检测方法。

快速简便

该试剂盒操作简单,只需 2 小时,省时省力。通过使用通用转录和优化的 RT-PCR 方案,与其他解决方案相比,程序大大简化。此外,RT 步骤中生成的 cDNA 可用于整个 miRCURY LNA miRNA Probe PCR 系统,让您可以根据研究需要从面板无缝过渡到检测,节省样品材料和时间。移液步骤减少到最低数量,还最大限度上减少了技术差异。化验稳健性允许室温设置和延迟运行,从而提高了自动化使用的灵活性(参见反应稳定性和设置稳健性)。这种简化的工作流程与符合 ISO 标准的化验生产相结合(见 批量间高度一致性),可以实现极高的日间和现场间重复性。

See figures

Principle

miRCURY LNA miRNA Probe PCR 系统可通过 real-time PCR 进行灵敏、特异的 miRNA 定量和分析。检测基于 FAM 和深色淬灭基团标记的探针淬灭基团标记的水解探针。该系统涵盖了将 miRNA 转化为 cDNA 以及随后对 miRNA 进行 qPCR 检测的所有步骤。miRCURY LNA miRNA Probe PCR Assay 已使用 QuantiNova Probe Master Mix 进行了验证;使用其他试剂进行 qPCR 会影响结果。

用于 RT 的 RNA Spike-In Kit

RNA Spike-In Kit 可对 miRCURY LNA miRNA Probe PCR 实验的 RNA 分离、cDNA 合成和 PCR 扩增步骤进行质量控制,这样您就能在实验过程的早期发现任何劣质样品,从而节省时间和试剂。该试剂盒包括 UniSp2、UniSp4 和 UniSp5 Spike-in Template Mix、以及 cel-miR-39-3p RNA Spike-in Template。

miRCURY LNA RT Kit

适用于两种检测系统的通用逆转录试剂盒。miRCURY LNA RT Kit 既适用于使用 SYBR Green 进行检测的 miRCURY LNA miRNA PCR 系统,也适用于基于探针的 miRCURY LNA miRNA Probe PCR 系统。该试剂盒包括两种系统专用的反应缓冲液和所有必要的试剂,可在单个反应步骤中快速方便地进行 miRNA 多腺苷酸化和逆转录。

miRCURY LNA Probe PCR Kit

该试剂盒专为 miRCURY LNA miRNA Probe PCR 系统优化设计,包含高性能 QuantiNova Probe Master Mix 和 miRCURY Probe Universal Reverse Primer。该化学品与 miRCURY LNA miRNA Probe PCR Assay 或 miRCURY LNA miRNA Probe PCR Panel 结合使用,可通过定量 real-time PCR 检测 miRNA。

miRCURY LNA miRNA Probe PCR Assay

这些引物和探针检测试剂盒使用 miRNA 特异性水解探针和 miRNA 特异性正向引物,利用 miRBase 22 提供的最新序列信息检测成熟的 miRNA。miRCURY Probe Universal Reverse Primer 包含在 miRCURY Probe PCR Kit 中。

miRCURY LNA miRNA Probe PCR Panel

即用、预先设计、一次性 PCR 组合,用于快速分析成熟的 miRNA,侧重于 miRNome、特定途径、血清/血浆等特定样本类型,或用户设计的定制组合。

GeneGlobe 数据分析中心

这款免费的基于网络的分析工具通过简易向导逐步指导您对数据进行归一化和分析,并生成可供发表的数据。

尖峰检测
产品名称 对照类型 用于控制 目标模板
UniSp2 miRCURY LNA miRNA Probe Assay 尖峰对照测定 提取效率 UniSp2 – 合成 RNA 模板,包含在 RNA Spike-In Kit 中,用于 RT – 339390
UniSp4 miRCURY LNA miRNA Probe Assay 尖峰对照测定 提取效率 UniSp4 – 合成 RNA 模板,包含在 RNA Spike-In Kit 中,用于 RT – 339390
UniSp5 miRCURY LNA miRNA Probe Assay 尖峰对照测定 提取效率 UniSp5 – 合成 RNA 模板,包含在 RNA Spike-In Kit 中,用于 RT – 339390
UniSp6 miRCURY LNA miRNA Probe Assay RT 对照检测 逆转录反应 UniSp6 – 合成 RNA 模板,包含在 miRCURY LNA RT Kit 中 – 339340
UniSp9 miRCURY LNA miRNA Probe Assay IPC – 板间校准物 PCR 反应 UniSp9 – 合成 DNA 模板。板上有检测斑点。仅适用于板(组合)
cel-miR-39-3p miRCURY LNA miRNA Probe Assay RT 对照检测 逆转录反应 UniSp6 – 合成 RNA 模板,包含在 RNA Spike-In Kit 中,用于 RT – 339390
对照检测
产品名称 目标生物 替代名称 NCBI 编号
Control primer set,SNORD38B (hsa) hsa U38B; RNU38B NR_001457
Control primer set,SNORD44 (hsa) hsa U44; RNU44 NR_002750
Control primer set,SNORD48 (hsa) hsa U48; RNU48 NR_002745
Control primer set,SNORD49A (hsa) hsa U49; U49A; RNU49 NR_002744
Control primer set,SNORA66 (hsa) hsa U66; RNU66 NR_002444
Control primer set,5S rRNA (hsa) hsa, mmu V00589  
Control primer set,U6 snRNA (hsa, mmu) hsa, mmu, rno U6 X59362
Control primer set,RNU5G snRNA (mmu, hsa) mmu, hsa, rno Rnu5a; U5a; Rnu5g NR_002852
Control primer set,RNU1A1 (mmu, hsa) mmu, hsa, rno Rnu1a-1; Rnu1a1 NR_004411
Control primer set,SNORD65 (mmu) mmu U65; RNU65 NR_028541
Control primer set,SNORD68 (mmu) mmu U68; RNU68 NR_028128
Control primer set,SNORD110 (mmu) mmu U110; RNU110 NR_028547

Procedure

第一步是逆转录反应,这是一个易于操作的单管反应。包括 miRNA 在内的总 RNA 用作起始材料,得到的 cDNA 用 LNA 增强引物和水解探针进行 real-time PCR 扩增,以检测成熟的 miRNA。这样就能直接进行 miRNA 定量和分析,任何拥有 real-time PCR 循环器的实验室都能使用。

Applications

miRCURY LNA miRNA Probe PCR Assay 是 miRCURY LNA miRNA Probe PCR 系统的一部分,用于:

  • miRNA 表达检测、图谱分析和定量
  • miRNA 生物标记物的开发 – 筛选和鉴定
  • miRNA 调控和通路分析
  • 复杂样品类型和 miRNA 表达水平较低样品(如外泌体、血清、血浆、尿液、FFPE 切片)中的 miRNA 检测
  • snoRNA 检测
  • miRNA 测序验证

Supporting data and figures

Resources

快速启动实验方案 (1)
安全数据表 (1)
Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
试剂盒操作手册 (2)
For highly sensitive, real-time RT-PCR detection of miRNAs using hydrolysis probes
For highly sensitive, ultrafast real-time RT-PCR detection of miRNAs from exosomes, serum/plasma, and other biofluids
Safety Data Sheets (1)
Certificates of Analysis (1)