miRCURY LNA miRNA PCR Assay

使用基于 LNA 优化、SYBR ® Green 的 miRNA PCR系统,实现极其灵敏和特异的 miRNA 定量

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miRCURY LNA miRNA PCR Assay

Cat. No. / ID:  339306

包含正反向引物对,可用于 200 次基于 SYBR® Green 的real-time qPCR 反应、166 次基于 EvaGreen 的数字 PCR 反应( Nanoplate 8.5k)或 50 次基于 EvaGreen 的数字 PCR 反应(Nanoplate 26k)
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Features

  • 出色的灵敏度,允许仅从 1 pg 总 RNA 中定量 miRNA
  • 适用于 RNA 得率较低的样本,如血清/血浆、FFPE 切片和 LCM 样本
  • 高度特异性,能够将序列相近的 miRNA 和成熟 miRNA 与前体区分开
  • 快速简单的两步法方案,耗时小于 3 小时
  • 完全覆盖 miRBase,可对绝大多数物种进行 miRNA 分析

Product Details

miRCURY LNA miRNA PCR Assay 是独立的 miRNA PCR 引物组,可利用 miRCURY LNA miRNA PCR 系统进行极其灵敏和特异的 miRNA 定量。正向和反向 PCR 扩增引物均具有 miRNA 特异性,并使用 LNA 技术进行了优化。检测试剂盒有管式和板式两种,每管或每孔可进行 200 次反应。

需要就您的研究项目获取相关报价或想要与我们的专家团队就您的项目进行讨论吗?请尽管联系我们!

Performance

无与伦比的灵敏度
通过将通用逆转录与 LNA 增强引物和 Tm 归一化引物相结合,实现了 miRCURY LNA miRNA PCR Assay 超高的灵敏度。这种组合能从最初的第一链 cDNA 合成中输入的低至 1 pg 的总 RNA 中准确可靠地定量单个 miRNA(见图 从低至 1 pg 的总 RNA 初始材料中准确定量)。
与使用茎-环引物或标准 DNA 引物的其他 miRNA real-time PCR 系统相比,LNA 增强引物的灵敏度显著提高,尤其是对于富含 AT 的 miRNA(见图 与 DNA 引物相比,LNA 增强引物的灵敏度显著提高)。
由于样本要求低,因此还能使用从 LCM 样本和血清/血浆等困难样本中纯化的总 RNA 定量 miRNA(见图 从 FFPE 组织切片检测 LCM 标本中 miRNA 的差异表达 血清样品中 miRNA 的差异表达)。
全面验证和优化
所有经过湿实验室验证的 miRCURY LNA miRNA PCR Assay 都经过优化,以尽可能提高灵敏度。超过 80% 的检测方法都能在 PCR 反应中检测到至少 5 个 miRNA 拷贝(见图  hsa-miR-181a 连续稀释)。引物组还通过了目标物特异性扩增和最小背景信号的验证(见图  miRNA 的特异和灵敏扩增)。
唯一具有完美特异性的平台
miRCURY LNA miRNA PCR Assay 是唯一具有绝对特异性的 miRNA 定量平台(见发表在《自然-方法》(Nature Methods) 上的 miRQC 研究),在特异性测试中优于另一种基于探针的 miRNA qPCR 平台(见图:基于探针的 miRNA qPCR 系统的特异性测试)。完美的特异性消除了假阳性,确保只有稳健可靠的 miRNA 信号。
卓越的分辨能力
由于在正向和反向 PCR 扩增引物中都加入了 LNA,因此设计的检测方法可以区分只有一个核苷酸差异的 miRNA 序列(见图 单核苷酸鉴别)。此外,检测方法还能区分成熟的 miRNA 序列和前体 miRNA。
快速、简便、可重复
简便易行的 3 小时实验方案可为您节省时间和精力。与需要特异性 miRNA cDNA 合成的系统相比,通过在所有后续 PCR 反应中使用相同的逆转录反应作为模板,这大大简化了操作步骤。移液步骤减少到最低限度,技术差异也降到最低。这样就能实现极高的不同时间的重复性,甚至是不同地点之间的重复性。
miRCURY LNA miRNA PCR Assay 经过优化,可与 miRCURY LNA RT Kit 和 miRCURY LNA SYBR Green PCR Kit 配合使用。使用其他试剂会影响结果质量。
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Principle

独特的 miRNA 分析系统
miRCURY LNA miRNA PCR Assay 通过结合使用通用逆转录 和 LNA PCR 扩增,在 microRNA real-time PCR 市场上提供了性能和易用性的最佳组合(参见图片  miRCURY-LNA miRNA PCR 系统示意图)。通用逆转录使得使用一个第一链 cDNA 合成反应作为多个 miRNA real-time PCR 分析的模板成为可能。这节省了宝贵的样本,减少了技术差异,并且节省了实验室内的工作时间。此外,正向和反向 PCR 扩增引物均具有 miRNA 特异性,并使用 LNA 进行了优化。这提供了 1) 极高的灵敏度和极低的背景,能够准确定量极低的 miRNA 水平,2) 高度特异性检测,能够区分密切相关的 miRNA 序列。
覆盖范围
可提供超过 20,000 种检测方案,覆盖了 miRBase 20 中的所有生物。已经对超过 1,400 种检测方案进行了完整的湿实验验证,其灵敏度、特异性、效率和背景均适用于合成样本和不同的生物样本。其余检测方案均使用综合设计算法进行了计算机模拟验证,确保高品质、物种特异性、LNA 增强的检测方案在每个生物体上实现最佳灵敏度和特异性这意味着多项不同的检测方案可能针对同一序列。最终,根据生物的遗传背景选择用于每个物种的检测方案。如果您正在使用新型 miRNA,例如来自 NGS 实验的 miRNA,也可以为任何miRNA定制设计的LNA miRNA引物对。
用于归一化的内参基因检测方案
有九套内参基因引物组可供使用,可进行高质量的数据归一化,并可从许多不同的样本类型中生成可靠的数据(见下表)。这些对照引物组以在不同人体组织中组成性地和相对稳定地表达的内源性、非编码小 RNA 为靶标(参见图片 内参基因在不同人体组织中的表达水平)。对照内参基因覆盖了很大的 Cq 值范围,可以准确可靠地对各种 miRNA 表达水平进行归一化处理。
对照引物组已被验证可作为 miRCURY LNA miRNA PCR 系统的内参基因,与 miRCURY LNA RT Kit 和 miRCURY LNA SYBR Green PCR Kit 配合使用效果最佳。重要的是,在选择某个基因作为内参基因之前,一定要确认该基因在实验的所有组织和所有处理过程中都有一致且不变的表达。我们建议您测试多个内参基因,并使用 GeNorm 和 NormFinder(GenEx 软件的一部分)等软件来选择和验证参比基因。
可用的内参基因检测方案列表
产品名称目标生物替代名称NCBI 编号
Control primer set,SNORD38B (hsa)hsaU38B; RNU38BNR_001457
Control primer set,SNORD44 (hsa)hsaU44; RNU44NR_002750
Control primer set,SNORD48 (hsa)hsaU48; RNU48NR_002745
Control primer set,SNORD49A (hsa)hsaU49; U49A; RNU49NR_002744
Control primer set,SNORA66 (hsa)hsaU66; RNU66NR_002444
Control primer set,5S rRNA (hsa)hsa, mmuV00589
Control primer set,U6 snRNA (hsa, mmu)hsa, mmu, rnoU6X59362
Control primer set,RNU5G snRNA (mmu, hsa)mmu, hsa, rnoRnu5a; U5a; Rnu5gNR_002852
Control primer set,RNU1A1 (mmu, hsa)mmu, hsa, rnoRnu1a-1; Rnu1a1NR_004411
Control primer set,SNORD65 (mmu)mmuU65; RNU65NR_028541
Control primer set,SNORD68 (mmu)mmuU68; RNU68NR_028128
Control primer set,SNORD110 (mmu)mmuU110; RNU110NR_028547
See figures

Procedure

miRCURY LNA miRNA PCR Assay 系统是一种基于 LNA 的 miRNA 特异性检测系统,采用 SYBR Green 定量 real-time PCR 技术,灵敏准确地检测 miRNA。第一步是通用逆转录,然后使用 LNA 增强引物进行 real-time PCR 扩增(见图 miRCURY LNA miRNA PCR 系统概览)。

Applications

miRCURY LNA miRNA PCR Assay 是 miRCURY LNA miRNA PCR 系统的一部分,用于:
  • 成熟 miRNA 定量
  • snoRNA 检测

Supporting data and figures

Resources

安全数据表 (1)
Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
试剂盒操作手册 (3)
For highly sensitive detection of miRNA using EvaGreen
For highly sensitive, real-time RT-PCR detection of miRNAs using SYBR® Green
应用说明 (1)
Here, we present a highly efficient, high-throughput workflow that combines two technologies, cellenONE and QIAcuity Digital PCR, to accurately analyze miRNAs in well-defined individual cells and populations of cells.
Safety Data Sheets (1)
Certificates of Analysis (1)
Application Notes (1)
Here, we present a highly efficient, high-throughput workflow that combines two technologies, cellenONE and QIAcuity Digital PCR, to accurately analyze miRNAs in well-defined individual cells and populations of cells.