miRCURY LNA miRNA Custom Probe PCR Assay

利用 LNA 增强的、基于探针的 qPCR 技术,对成熟 miRNA 进行极其灵敏和准确的定量分析

S_1084_5_GEN_V2
Configure at GeneGlobe
Find or custom design the right target-specific assays and panels to research your biological targets of interest.
miRCURY LNA miRNA Custom Probe PCR Assay (200)

Cat. No. / ID:  339351

为任何用户定义的 miRNA 靶标定制设计的靶标特异性前向引物和探针。全套预混合检测试剂盒,可用于 200 次反应。
Copy order details
Log in To see your account pricing.
Product
miRCURY LNA miRNA Custom Probe PCR Assay (200)
miRCURY LNA miRNA Custom PCR Assay
Configure at GeneGlobe
Find or custom design the right target-specific assays and panels to research your biological targets of interest.

Features

  • 轻松为您感兴趣的特定 miRNA 设计定制检测方法
  • 在极低的检测范围(低至 1 个 miRNA 拷贝)内检测真实信号
  • 快速、简单的工作流程,只需 2 小时
  • 针对任何新型 miRNA、miRNA 同种型或变体设计 miRNA 检测方法

Product Details

miRCURY LNA miRNA Custom Probe PCR Assay 是定制设计的 miRNA PCR 引物-探针组合,可利用 miRCURY LNA miRNA Probe PCR 系统进行极其灵敏和特异的 miRNA 定量。正向 PCR 扩增引物和 FAM 及深色淬灭基团标记探针都是 miRNA 特异性的,并采用 LNA 技术进行了优化,从而提高了检测性能。使用与我们预先设计的检测方法相同的稳健、优化算法,轻松在线创建检测。因此,定制检测和预先设计的检测可以结合使用,并保证有效。

需要就您的研究项目获取相关报价或想要与我们的专家团队就您的项目进行讨论吗?请尽管联系我们!

Performance

高灵敏度检测真实信号

通过将通用逆转录与 LNA 增强、Tm 归一化、miRNA 特异性引物和探针相结合,实现了 miRCURY LNA miRNA Custom Probe PCR Assay 超高的灵敏度。这种组合能准确、可靠地定量单个 miRNA,可低至 1 pg 总 RNA 或 1 个分子,无需预扩增(见 即使起始材料少也能准确定量以及 在宽动态范围内效率极高)。该系统灵敏度高、工作流程快,特别适用于血清或血浆样本,QuantiNova 酶可确保技术和生物重复之间的结果首次尝试就具有高度的可重复性,从而节省了样品材料和时间。

与其他仅靠探针产生特异性的基于 miRNA 探针的 PCR 系统相比,miRCURY LNA miRNA Custom Probe Assay 的 LNA 增强引物和探针既具有 miRNA 特异性,又足够短,可防止与靶标结合时发生重叠(见  miRCURY LNA miRNA Probe PCR 系统概览),从而提高了检测灵敏度、特异性和效率。结合出色的信噪比(见 即使在高 RNA 背景下也能准确检测),这一独特功能可区分序列差异小至一个核苷酸的近缘 miRNA(见 差异小至一个核苷酸的区分能力)。

经过验证和优化

新型 miRNA 的检测设计(引物和探针)基于 LNA 和检测专家创建的设计算法。该综合算法根据高度严格的性能标准对 60 个参数进行评估和优化,这些参数已得到计算机模拟验证,以确保设计能提供最高的灵敏度和特异性。其结果是能检测到 1 个 miRNA 拷贝的检测方法。

快速简便

该试剂盒操作简单,只需 2 小时,省时省力。通过使用通用转录和优化的 RT-PCR 方案,与其他解决方案相比,程序大大简化。此外,RT 步骤中生成的 cDNA 可用于整个 miRCURY LNA miRNA Probe PCR 系统,让您可以根据研究需要从面板无缝过渡到检测,节省样品材料和时间。移液步骤减少到最低数量,还最大限度上减少了技术差异。检测稳健性允许室温设置和延迟运行,从而提高了自动化使用的灵活性。这种简化的工作流程与符合 ISO 标准的化验生产相结合,可以实现极高的日间和现场间重现性。

See figures

Principle

设计流程

miRCURY LNA miRNA Custom Probe PCR Assay 设计工具可以方便地为任何未作为预先设计检测提供的 miRNA 设计高灵敏度和特异性的 LNA 增强 PCR 引物组和探针。高级算法基于 60 多项不同标准评估大约 3,000 个引物对和探针设计,从而在数分钟内为您的 miRNA 找到最佳的 LNA 引物组和探针。该工具专为 miRNA 设计,但也可用于其他长度为 14–27 个核苷酸的小 RNA。

设计标准包括:

  • 通过改变引物和探针的 LNA 分布来优化熔解温度,从而确保高扩增效率和特异性。
  • 计算并调整自杂交和交叉杂交分数,从而实现高效 PCR 反应。
  • 进行调整以避免 PCR 反应中潜在的引物二聚体形成。
  • 基于我们对 LNA 寡核苷酸设计的丰富知识,能够智能定位引物和探针中的 LNA 碱基。
  • 进行 miRBase 搜索以在相同种类中识别具有高度序列相似性的潜在 miRNA。这确保引物组和探针对小 RNA 具有高度特异性。
独特的 miRNA 定量系统

miRCURY LNA miRNA Probe PCR 系统可通过 real-time PCR 进行灵敏、特异的 miRNA 定量和分析。检测基于 FAM 和深色淬灭基团标记的水解探针。该系统涵盖了将 miRNA 转化为 cDNA 以及随后对 miRNA 进行 qPCR 检测的所有步骤。miRCURY LNA miRNA Custom Probe PCR Assay 已使用 QuantiNova Probe Master Mix 进行了验证;使用其他试剂进行 qPCR 会影响结果。

用于 RT 的 RNA Spike-In Kit

RNA Spike-In Kit 可对 miRCURY LNA miRNA Probe PCR 实验的 RNA 分离、cDNA 合成和 PCR 扩增步骤进行质量控制,这样您就能在实验过程的早期发现任何劣质样品,从而节省时间和试剂。该试剂盒包括 UniSp2、UniSp4 和 UniSp5 Spike-in Template Mix、以及 cel-miR-39-3p RNA Spike-in Template。

miRCURY LNA RT Kit

适用于两种检测系统的通用逆转录试剂盒。miRCURY LNA RT Kit 既适用于使用 SYBR Green 进行检测的 miRCURY LNA miRNA PCR 系统,也适用于基于探针的 miRCURY LNA miRNA Probe PCR 系统。该试剂盒包括两种系统专用的反应缓冲液和所有必要的试剂,可在单个反应步骤中快速方便地进行 miRNA 多腺苷酸化和逆转录。

miRCURY Probe PCR Kit

该试剂盒专为 miRCURY LNA miRNA Probe PCR 系统优化设计,包含高性能 QuantiNova Probe Master Mix 和 miRCURY Probe Universal Reverse Primer。该化学品与 miRCURY LNA miRNA Probe Assay 或 miRCURY LNA miRNA Probe PCR Panel 结合使用,可通过定量 real-time PCR 检测 miRNA。

miRCURY LNA miRNA Probe Assay

这些引物和探针检测试剂盒使用 miRNA 特异性水解探针和 miRNA 特异性正向引物,利用 miRBase 22 提供的最新序列信息检测成熟的 miRNA。miRCURY Probe Universal Reverse Primer 包含在 miRCURY Probe PCR Kit 中。

miRCURY LNA miRNA Probe PCR Panel

即用、预先设计、一次性 PCR 组合,用于快速分析成熟的 miRNA,侧重于 miRNome、特定途径、血清/血浆等特定样本类型,或用户设计的定制组合。

GeneGlobe 数据分析中心

这款免费的基于网络的分析工具通过简易向导逐步指导您对数据进行归一化和分析,并生成可供发表的数据。

Procedure

第一步是逆转录反应,这是一个易于操作的单管反应。包括 miRNA 在内的总 RNA 用作起始材料,得到的 cDNA 用 LNA 增强引物和水解探针进行 real-time PCR 扩增,以检测成熟的 miRNA。这样就能直接进行 miRNA 定量和分析,任何拥有 real-time PCR 循环器的实验室都能使用。

Applications

miRCURY LNA miRNA Custom Probe Assay 是 miRCURY LNA miRNA Probe PCR 系统的一部分,用于:

  • miRNA 表达检测、图谱分析和定量
  • miRNA 生物标记物的开发 – 筛选和鉴定
  • miRNA 调控和通路分析
  • 复杂样品类型和 miRNA 表达水平较低样品(如外泌体、血清、血浆、尿液、FFPE 切片)中的 miRNA 检测
  • snoRNA 检测
  • miRNA 测序验证

Supporting data and figures

Resources

安全数据表 (1)
Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
学术海报 (1)
Poster for download
试剂盒操作手册 (3)
For highly sensitive, real-time RT-PCR detection of miRNAs using hydrolysis probes
For highly sensitive, ultrafast real-time RT-PCR detection of miRNAs from exosomes, serum/plasma, and other biofluids
For highly sensitive detection of miRNA using EvaGreen
Certificates of Analysis (1)