miRNeasy Serum/ Plasma Kit

動物およびヒトの血漿および血清からの、miRNAを含む無細胞性トータルRNA精製用

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miRNeasy Serum/Plasma Kit (50)

Cat. No. / ID:  217184

For 50 total RNA preps: 50 RNeasy MinElute Spin Columns, Collection Tubes (1.5 ml and 2 ml), QIAzol Lysis Reagent, RNase-free Reagents and Buffers
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¥80,000
miRNeasy Serum/ Plasma Kitは分子生物学的アプリケーション用であり、疾病の診断、予防、あるいは治療に使用することはできません。

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Features

  • 標準化用インターナルコントロールが入手可能
  • 最少の溶出量
  • すべてのダウンストリームアプリケーションに最適な高純度 RNA
  • 容易で適応性の高い操作
  • 自動化プロトコール

Product Details

miRNeasy Serum/Plasma Kit は少量の血清および血漿から、主にmiRNAやその他のsmall RNAなどの無細胞性トータルRNA精製のためにデザインされています。血清および血漿からのRNAは通常は100ヌクレオチド未満の分子で構成されています。miRNeasy Serum/Plasma Kitは miRNeasy Serum/Plasma Spike-In Controlを検出するmiScript Primer Assayを含んだ、簡便な標準化システムを提供します。miRNeasy Serum/Plasma Spike-In Control(別途注文)は C. elegans miR-39 miRNA mimicで、1チューブあたり10 pmolの凍結乾燥品としてお届けします。

Performance

miRNeasy Serum/Plasma Kitは最高200 µlの血清あるいは血漿からRNAを精製します。miRNeasy法を用いて調製した RNA は、解析に悪影響を及ぼす塩やフェノールが混入する可能性を最小限に抑え、感度の高いダウンストリームアプリケーションに直ぐに使用できます。

Principle

現在miRNA研究で現在最も関心の高い分野の一つとして、血清や血漿サンプルに存在するmiRNAの評価があります。血清や血漿中に比較的安定に存在する細胞外miRNAは、これらmiRNAレベルの変動が、様々な疾病の非侵襲的バイオマーカーとして利用できる可能性があり、関心が高まっています。いくつかのがんでは、血清や血漿から精製したRNAを用いて数種類のmiRNAの発現の変化がみられました。miRNeasy Serum/Plasma Kitを用いて小量の血漿や血清からRNAを精製できます。血清および血漿からのRNAは通常は100ヌクレオチド未満の分子で構成されています。精製したRNAはmiScript PCR Systemと共にバイオマーカーの検索に使用できます。

miRNeasy Serum/Plasma Kitは、フェノール/グアニジンをベースにしたサンプル溶解法とシリカゲルメンブレンによるトータルRNAの精製を組み合わせています。キットに入っているQIAzol Lysis Reagentはフェノールとグアニジンチオシアネートの混合溶液で、組織の溶解を容易にし、RNaseを阻害、また有機溶媒抽出によりほとんどの細胞のDNAとタンパク質をライセートから除去するようにデザインされています。

標準化用インターナルコントロールの使用

血清または血漿サンプル中のmiRNA発現プロファイリングのための標準化用インターナルコントロールとして何を使用すべきかについては、研究者の間においてまだ明確なコンセンサスはありません。多くの研究者が、RNA回収率と逆転写効率をモニタリングするために、RNA精製に合成miRNAを添加する方法を選択しています。QIAGENは血清あるいは血漿中のmiRNA発現プロファイルのインターナルコントロールとして RNeasy Serum/Plasma Spike-In Control(別途注文)を推奨しています。miRNeasy Serum/Plasma Spike-In Controlは C. elegans miR-39 miRNA mimic であり、miScript PCR SystemとCe_miR-39_1 miScript Primer Assay(miRNeasy Serum/Plasma Kitに付属)を組み合わせたリアルタイムRT-PCRにより容易に検出できます。詳細はmiRNeasy Serum/Plasma Handbookをご覧ください。

Procedure

血清あるいは血漿サンプルはQIAzol Lysis Reagentで溶解されます。クロロホルムを添加した後、ライセートを遠心操作により水層と有機溶媒層に分離します。RNAは上の水層に、一方DNAは有機溶媒層、タンパク質は下の有機溶媒層か中間層に含まれています。

上の水層を抽出し、約18ヌクレオチド以上のRNA分子をすべて結合する条件にするため、ライセートにエタノールを添加します。サンプルをRNeasy MinElute Spin Columnにアプライすると、トータルRNA はメンブレンに結合し、フェノールおよびその他の夾雑物は効率的に除去されます。高品質なRNAを少量のRNaseフリー水で溶出します。

血清および血漿は主にsmall RNAを含むので、small RNAとlarge RNA画分の精製を別々に行なう必要はありません。

miRNeasy Serum/Plasma Spike-In Controlを用いた標準化

miRNeasy Serum/Plasma Kitを使用したmiRNA精製の際に、QIAzol Lysis Reagentの添加後、クロロホルムを加えて液層分離を行なう前に、miRNeasy Serum/Plasma Spike-In Controlをサンプルに添加します。リアルタイムRT-PCRの後、合成miRNAをターゲットとするアッセイを用いて得られたCT値によるサンプルの間の標準化と、RNA回収率および増幅効率の変動を確認できます。また、RNAの回収率は、RNA分離手順とは独立して用意された合成miRNAの標準曲線とCT 値の比較によって評価することができます。

QIAcube上でmiRNA自動精製

層分離後の水層からのmiRNAを含むトータルRNA精製はQIAcubeを用いて自動精製が可能です。革新的なQIAcubeはQIAGENスピンカラムを操作するための最先端テクノロジーを駆使しており、ロースループットサンプルの自動調製をラボにおける様々な実験操作ステップでスムーズに取り込むことができます。QIAcube を用いたサンプル調製はマニュアル操作と同じプロセス(溶解、結合、洗浄、溶出)で行なわれるため、高品質RNAの精製にお手持ちのmiRNeasy Serum/Plasma Kit を使用することができます。

Applications

miRNeasy Serum/Plasma Kitは以下のような様々なアプリケーションに使用可能な、miRNAを含む無細胞性のトータルRNA精製を実現します。

バイオマーカーの探索
ノーザンブロット解析
miScript PCR Systemを使用したリアルタイム定量RT-PCR
マイクロアレイ解析

Resources

クイックスタートプロトコール (1)
MSDS (1)
Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
サイエンティフィック・ポスター (1)
Poster for download
キットハンドブック (2)
パンフレット (4)
Simultaneously profile mRNA, miRNA and lncRNA using a simple, complete workflow
Safety Data Sheets (1)
Certificates of Analysis (1)
miRNA Research (1)
Brochures & Guides (3)
Simultaneously profile mRNA, miRNA and lncRNA using a simple, complete workflow
Scientific Posters (1)
Poster for download
Quick-Start Protocols (1)

FAQ

I received a kit containing the MinElute columns; however, they were left out for a while and not stored at 2–8°C upon receipt. Can I still use them?

The MinElute spin columns included in the following kits should be stored at 2–8°C upon arrival: AllPrep DNA/RNA Micro, EpiTect Fast DNA Bisulfite, EpiTect Fast FFPE Bisulfite, EpiTect Fast LyseAll Bisulfite, EpiTect Plus DNA Bisulfite, EpiTect Plus FFPE Bisulfite, EpiTect Plus LyseAll Bisulfite, exoRNeasy Serum/plasma Maxi, exoRNeasy Serum/Plasma Midi, GeneRead DNA FFPE, GeneRead rRNA Depletion, GeneRead Size Selection, MinElute Gel Extraction, MinElute PCR Purification, MinElute Reaction Cleanup, miRNeasy FFPE, miRNeasy Micro, miRNeasy Serum/Plasma, QIAamp DNA FFPE, QIAamp DNA Investigator, QIAamp DNA Micro, QIAamp MinElute Media, QIAamp MinElute Virus Spin, QIAamp MinElute Virus Vacuum, RNeasy FFPE, RNeasy Micro, RNeasy Plus Micro.

Short-term storage (up to 4 weeks) at room temperature (15–25°C) does not affect the performance. However, for optimal performance and quality, storage temperature should not exceed 25°C.

FAQ ID - 3560
What is the Spike-in-Control in the miRNeasy Serum/Plasma Kit ?

The miRNeasy Serum/Plasma Spike-In Control (219610) is ordered separately from the miRNeasy Serum/Plasma Kit. It is 10 pmol lyophilized C. elegans miR-39 miRNA mimic.

FAQ ID -3169
What is the bacterial ribosomal RNA recommended to use in the miRNeasy Serum/Plasma Protocol?

It is bacterial ribosomal RNA (Roche), cat. no. 10 206 938 001.

FAQ ID -3173
Do you have a protocol for the isolation of genomic DNA and/or proteins from fatty tissue treated with QIAzol?
FAQ ID -955
How do I clean up RNA preparations containing miRNA?

RNA preparations containing miRNA can be cleaned up by modifying* the cleanup protocols listed in the handbooks of the RNeasy Mini Kit or the RNeasy MinElute Cleanup Kit .

 

* Modify the cleanup protocol at step 2, by increasing the volume of ethanol (96-100%) from 250 µl to 950 µl.

FAQ ID -3002
3339 - Does the miRNeasy Serum/Plasma Spike-in Control (cat n° 219610) negatively impact subsequent NGS sequencing?

The miRNeasy Serum/Plasma Spike-in Control (cat n° 219610)  will not pose a problem for NGS sequencing. In case of a library prep for larger RNAs, a size selection step may be part of the procedure that removes small RNA in that size range.

How do I prepare the Spike-in-Control catalog # 219610 to get copies/μl?

Reconstitute by adding 300 μl RNase-free water per tube, resulting in a 2 x 10^10 copies/μl stock. miRNeasy Serum/Plasma Spike-In Control stock should be stored at –80°C. For large volumes, first aliquot into smaller volumes prior to long-term storage at –80°C.

Refer to page 25 of the miRNeasy Serum/Plasma Protocol Handbook for Preparation of miRNeasy Serum/Plasma Spike-In Control

http://www.qiagen.com/products/catalog/sample-technologies/rna-sample-technologies/mirna/mirneasy-serumplasma-kit#resources

FAQ ID -3170
What is the miRNA yield from the miRNeasy Serum/Plasma Kit?

Yields of total RNA achieved with the miRNeasy Serum/Plasma Kit vary strongly between samples from different individuals. However, yield of RNA from 50-200 µl human plasma and serum is not quantifiable with photometric methods like NanoDrop; they are usually too low for quantification by OD measurement.

You may use more sensitive colorimetric or fluorimetric assays for quantification, i.e. RiboGreen assays.

Use of miRNeasy Serum/Plasma Spike-In Control (cat. no. 219610) and corresponding Ce_miR-39_1 miScript Primer Assay (cat.no. MS00019789) is recommended to monitor miRNA purification and amplification.

FAQ ID -3171
3338 - Does the miRNeasy Serum/Plasma Spike-in Control (cat n° 219610) have 3'-hydroxyl and 5'-phosphate groups?

Both ends of the miRNeasy Serum/Plasma Spike-in Control carry only the hydroxyl groups. The 5'-phosphate is not relevant for the biological function.