QIAcuity OneStep Advanced Probe Kit

• Fonctionnalité HotStart RT permettant une configuration de la nanoplaque simultanée pour QIAcuity Four et Eight
• Configuration de la réaction à température ambiante grâce à la fonctionnalité HotStart RT
• Pour réactions simplex et multiplex
• Master Mix de PCR à la concentration 4x pour charger plus d’échantillons
• Robustesse avancée contre les inhibiteurs

Le QIAcuity OneStep Advanced Probe PCR Kit permet une quantification sensible des cibles d’ARN ou d’ARN+ADN sur l’instrument de PCR numérique QIAcuity en une réaction de RT-PCR combinée. Il contient un Master Mix à la concentration 4x et un mélange RT à la concentration 100x optimisé pour l’utilisation multifluidique dans les QIAcuity Nanoplates. Ce kit améliore la spécificité et l’efficacité de la PCR numérique à base de sonde pour assurer l’exactitude des analyses simplex à 5-plex.

Le nouveau kit est équipé d’une enzyme de transcription inverse (RT) HotStart, permettant une configuration de réaction à température ambiante et une configuration de nanoplaque simultanée pour le chargement dans les instruments QIAcuity Four ou Eight.

Ce kit fonctionne conjointement avec le QIAcuity Digital PCR System et les QIAcuity Nanoplates.

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Performance de transcription inverse avancée

Le nouveau mélange de transcription inverse avancée QIAcuity inclut la nouvelle technologie de transcription inverse HotStart de QIAGEN en attente de brevet. La nouvelle enzyme RT HotStart est non fonctionnelle à température ambiante et empêche la génération d’ADNc hors cible même en cas d’incubation à 37 C pendant de nombreuses heures (voir la figure  Analyse de courbe de fusion de la nouvelle RT HotStart). Elle permet ainsi une configuration de la réaction à température ambiante. L’enzyme RT HotStart permet aux utilisateurs d’assembler leurs réactions à température ambiante. En outre et surtout, l’enzyme RT HotStart permet aux utilisateurs d’assembler et de charger plusieurs nanoplaques en parallèle, sans devoir s’inquiéter d’une activité de RT indésirable et potentiellement non spécifique pendant que les plaques attendent à température ambiante. L’enzyme RT HotStart est bloquée tandis que les Nanoplates sont calées et attendent à l’intérieur de l’instrument QIAcuity jusqu’à ce qu’elles soient transférées vers le thermocycleur où se déroule l’étape de RT du protocole.

L’Enhancer GC améliore la performance du dosage spécifique

La performance du dosage dPCR dépend des séquences et de la conception de l’amorce et des sondes. Le contenu de GC et la longueur de l’amplicon varient pour les dosages en série de l’industrie et les dosages personnalisés. Les chimies de PCR sont optimisées pour l’utilisation universelle et la meilleure performance ; cependant, il est parfois recommandé d’ajouter des amplificateurs spécifiques. Le nouveau Enhancer GC est un composant facultatif (flacon séparé) que vous pouvez ajouter à la réaction dPCR quand les amplicons sont riches en GC ou plus longs que 150 nt. Il est également recommandé de l’utiliser avec les dosages d’expression génétique TaqMan (Thermo Fisher).

Tableau : Efficacité de la RT avec et sans Enhancer GC

Performance d’amplification supérieure

Le QIAcuity OneStep Advanced Probe Kit pour la dPCR à base de sonde d’hydrolyse fait appel à la dernière version d’ADN polymérase QIAGEN de haute qualité. La combinaison unique entre la nouvelle ADN polymérase QuantiNova et la technologie de tampon exclusive et éprouvée de QIAGEN, optimisée pour la microfluidique des nanoplaques, fournit des résultats très homogènes en termes de sensibilité, reproductibilité et efficacité.

Internal Control RNA

Le QIAcuity OneStep Advanced Probe Kit est accompagné d’un QuantiNova Internal Control RNA (QN IC RNA), qui peut être utilisé en option comme transcription inverse et contrôle d’amplification. Le QuantiNova IC Probe Assay (200) (n° de réf. 205813), qui peut être acheté séparément, détecte l’ARN de contrôle interne QuantiNova sur un amplicon de 200 bp sur le canal jaune sur l’instrument QIAcuity. Les séquences de l’amorce et des sondes pour la détection du QuantiNova IC RNA ont été validées sur le plan bioinformatique pour la non-homologie par rapport à des centaines d’organismes eucaryotes et prokaryotes. De plus, elles ont été vérifiées sur le plan expérimental à l’aide d’une multitude d’échantillons d’ARN humain, de souris et de rat, issus de plusieurs lignées tissulaires et cellulaires.

REMARQUE : les utilisateurs ne doivent pas acheter le QuantiNova IC Probe Assay Red 650 (500) (n° de réf. 205824), car il n’est pas optimisé pour fonctionner avec QIAcuity.

Le QIAcuity One-Step Advanced Probe Kit contient un mélange principal de PCR prêt à l’emploi à la concentration 4x, supprimant la nécessité d’optimiser les conditions de réaction et de thermocyclage. La chimie OneStep permet la RT et l’amplification de l’ARN viral d’intérêt en une seule étape. Dans la réaction OneStep, les ARN et ADN cibles peuvent aussi être détectés ensemble, par exemple l’ARN viral avec l’ADN bactérien.

Vous trouverez ici une description du principe de la réaction de dPCR sur nanoplaque.

Le QIAcuity One-Step Advanced Probe Kit contient un mélange principal de PCR prêt à l’emploi à la concentration 4x, supprimant la nécessité d’optimiser les conditions de réaction et de thermocyclage. Il vous suffit d’ajouter le mélange de RT 100x, la matrice d’ARN et le jeu d’amorces et de sondes au mélange principal et de suivre la procédure décrite dans le protocole de démarrage rapide pour obtenir des résultats fiables sur le QIAcuity. La nouvelle enzyme RT HotStart, permet la configuration en parallèle et le chargement simultané de plusieurs nanoplaques dans les instruments QIAcuity Four et Eight (voir figure  Configuration et chargement de la nanoplaque).

Associé au QIAcuity Digital PCR System et aux QIAcuity Nanoplates, le QIAcuity OneStep Advanced Probe Kit permet l’analyse quantitative des ARN cibles dans diverses applications, dont la détection d’ARN ou d’ARNm viraux. Les applications nécessitant une détection simultanée des ARN et ADN cibles sont également possibles, par exemple pour l’analyse des eaux usées.