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MagAttract HMW DNA Kit (48)
Cat. No. / ID: 67563
Para 48 preparaciones de ADN: Suspensión G MagAttract, Buffer ATL, Buffer AL, Buffer MB, Buffer MW1, Buffer PE, Proteinase K, RNase A, Buffer AE, agua libre de nucleasas
El MagAttract HMW DNA Kit está concebido para su uso en aplicaciones de biología molecular. Este producto no está concebido para el diagnóstico, la prevención ni el tratamiento de enfermedades.
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Features
- Aislamiento reproducible de ADN de alto peso molecular
- Elevados niveles de rendimiento y pureza a partir una variedad de materiales de muestra
- Protocolos rápidos y prácticos
- Eliminación completa de inhibidores
Product Details
El MagAttract HMW DNA Kit permite la purificación de ADN de alto peso molecular (100–200 kb) mediante un protocolo simple basado en microesferas magnéticas. El procedimiento de purificación elimina cuidadosamente los contaminantes e inhibidores, al tiempo que ofrece elevados niveles de rendimiento y pureza. El ADN genómico extraído es adecuado para varias aplicaciones, incluidos el archivado y la secuenciación de última generación (NGS).
Performance
El MagAttract HMW DNA Kit garantiza el aislamiento reproducible de ADN genómico >150 kb. Se comparó el ADN aislado con el MagAttract HMW DNA Kit y con otros procedimientos basados en microesferas magnéticas mediante electroforesis en gel de campo pulsado. El MagAttract HMW DNA Kit demostró un rendimiento superior en el aislamiento de ADN de alto peso molecular (consulte la figura Aislamiento satisfactorio de ADN de alto peso molecular).
Elevados niveles de rendimiento y pureza uniformes
El MagAttract HMW DNA Kit usa un procedimiento sencillo y directo para ofrecer alto rendimiento de ADN puro de alto peso molecular. Las condiciones de lisis suave reducen al mínimo la fragmentación de ADN, al tiempo que se eliminan eficazmente los contaminantes y los inhibidores de la PCR, lo que resulta en ADN puro de alto peso molecular. La química y el procedimiento optimizados del MagAttract HMW DNA Kit mejoran notablemente el rendimiento y la pureza del ADN, en comparación con los métodos clásicos basados en columnas de centrifugación o microesferas magnéticas de otros proveedores (consulte las figuras Máximo rendimiento y pureza y Mejora en el rendimiento de varios tipos de muestra).
Eliminación eficaz de los inhibidores de la PCR
Las aplicaciones altamente sensibles como la real-time PCR o NGS requieren la eliminación de anticoagulantes, enzimas, cationes divalentes y otros inhibidores de este tipo. Se realizó la amplificación por real-time PCR de ADN aislado a partir de muestras de sangre estabilizadas con EDTA, heparina y citrato estabilizados con el MagAttract HMW DNA Kit. No se observa inhibición en ninguna de las muestras, lo que demuestra una correlación altamente lineal de los valores de CT con el volumen de entrada de las muestras (consulte la figura Sin inhibición en las muestras obtenidas de sangre anticoagulada).
ADN genómico listo para secuenciación de última generación
Dado que las tecnologías de secuenciación masiva en paralelo (MPS) utilizan longitudes de lectura cortas, la secuenciación se puede realizar con ADN genómico intacto >10 kb. Sin embargo, el ensamblaje de novo del genoma y el descubrimiento de variantes estructurales heredadas y adquiridas siguen siendo complejas con los productos de purificación de ADN estándar. Las bibliotecas de parejas con insertos más grandes tienen un impacto significativo en el éxito de la secuenciación, especialmente para genomas complejos ricos en repeticiones. El ADN genómico de alto peso molecular obtenido con el MagAttract HMW DNA Kit está listo para su uso en experimentos de NGS
| Parámetro | Especificación |
|---|---|
| Lecturas (largas) mapeadas totales | 6521106 |
| Tasa de errores | 0,36 % |
| Tasa indel | 0,01 % |
| Quimeras | 0,14 % |
| Porcentaje de duplicación | 1,15 % |
See figures
Principle
El aislamiento de ADN genómico es un paso fundamental en cualquier método de análisis de ADN. Los parámetros clave suelen ser el rendimiento, la pureza y la integridad del ADN aislado. Si bien para métodos estándar como las técnicas de PCR, secuenciación o hibridación, un peso molecular en el intervalo de 10–30 kb puede ser suficiente, algunos métodos sensibles como la generación de bibliotecas de CBA o fósmidos, o el archivado de ADN requieren mayor integridad del ADN genómico.
El MagAttract HMW DNA Kit está específicamente diseñado para proporcionar ADN de alto peso molecular a partir de una amplia variedad de muestras, incluidos el tejido, la sangre y las bacterias de origen humano o animal. El kit usa una combinación eficaz de microesferas de alto rendimiento y química innovadora basada en sílice. Las partículas magnéticas de alto rendimiento garantizan que el ADN aislado cuente con altos niveles de rendimiento y pureza.
El MagAttract HMW DNA Kit está específicamente diseñado para proporcionar ADN de alto peso molecular a partir de una amplia variedad de muestras, incluidos el tejido, la sangre y las bacterias de origen humano o animal. El kit usa una combinación eficaz de microesferas de alto rendimiento y química innovadora basada en sílice. Las partículas magnéticas de alto rendimiento garantizan que el ADN aislado cuente con altos niveles de rendimiento y pureza.
Procedure
El práctico protocolo MagAttract permite resultados reproducibles en tan solo 70 minutos.
Protocolo rápido y optimizado
Las enzimas y los tampones optimizados lisan suavemente las muestras, al tiempo que garantizan una fragmentación reducida del ADN genómico. El procedimiento incluye 4 pasos simples: lisado, unión, lavado y elución. Tras la lisis de la muestra, el ADN se une a la superficie de las microesferas magnéticas. Durante los pasos de lavado, los contaminantes y los inhibidores de la PCR se eliminan eficazmente y el ADN puro de alto peso molecular se eluye en el Buffer AE (consulte la figura Procedimiento del MagAttract HMW DNA Kit).
Protocolo rápido y optimizado
Las enzimas y los tampones optimizados lisan suavemente las muestras, al tiempo que garantizan una fragmentación reducida del ADN genómico. El procedimiento incluye 4 pasos simples: lisado, unión, lavado y elución. Tras la lisis de la muestra, el ADN se une a la superficie de las microesferas magnéticas. Durante los pasos de lavado, los contaminantes y los inhibidores de la PCR se eliminan eficazmente y el ADN puro de alto peso molecular se eluye en el Buffer AE (consulte la figura Procedimiento del MagAttract HMW DNA Kit).
See figures
Applications
El ADN genómico de alto peso molecular obtenido con el MagAttract HMW DNA Kit está listo para su uso en experimentos de NGS. Se puede usar para la generación de bibliotecas, tanto con insertos pequeños como grandes y, por ende, es ideal para todas las aplicaciones de secuenciación.
Supporting data and figures
Distribución de tamaño ejemplar con MagAttract HMW DNA Kit (células)
Distribución de tamaño ejemplar de ADN de células con el MagAttract HMW DNA Kit. Las muestras se analizaron con el Femto Pulse System y se normalizaron las señales en un pico máximo.
Specifications
| Features | Specifications |
|---|---|
| Sample amount | 200 μl de sangre; hasta 25 mg de tejido; 2 × 10e9 células bacterianas |
| Process time | ~70 minutos para 12 muestras |
| Elution volume | 100-200 µl |
Resources
Brochures & Guides (1)
Kit Handbooks (1)
Quick-Start Protocols (1)
Safety Data Sheets (1)
Certificates of Analysis (1)
FAQ
Can I scale up reagents if I want to use more sample with the MagAttract HMW DNA Kit (cat. no. 67563)?