CGT Viral Vector Lysis Kit

Für die Lyse viraler Vektoren wie verschiedener Serotypen des Adeno-assoziierten Virus (AAV) und Adenoviren

Products

CGT Viral Vector Lysis Kit ist für molekularbiologische Anwendungen vorgesehen. Dieses Produkt ist nicht für die Diagnose, Prävention oder Behandlung einer Krankheit bestimmt.
Image
Cell and Gene Therapy Viral Vector Lysis Kit (100 rxn)

Cat. No. / ID:  250272

Das Kit enthält: CGT-Probenstabilisator, DNase I, nukleasefreies Wasser, CGT-Lysepuffer, CGT-DNase-I-Puffer und CGT-Verdünnungspuffer, ausreichend zur Verarbeitung von 100 AAV-Proben 
Copy order details
273,00 €
Recommended restriction enzyme HpaII is not included in the kit.
Image
Cell and Gene Therapy Viral Vector Lysis Kit (1000 rxn)

Cat. No. / ID:  250273

Das Kit enthält: CGT-Probenstabilisator, DNase I, nukleasefreies Wasser, CGT-Lysepuffer, CGT-DNase-I-Puffer und CGT-Verdünnungspuffer, ausreichend zur Verarbeitung von 1000 AAV-Proben 
Copy order details
1.695,00 €
Recommended restriction enzyme HpaII is not included in the kit.

Features

  • Die Komplettlösung für die AAV-Lyse, bestehend aus einem Kit und einem Protokoll, ermöglicht die Standardisierung und Qualitätskontrolle (QK) aktueller Workflows
  • Konsistente und reproduzierbare Messung von Virustitern für verschiedene Serotypen (z. B. AAV-Serotypen)
  • Kompletter Workflow kombiniert mit QIAcuity Cell and Gene Therapy (CGT) dPCR Assays und der genauen Messung von AAV-Titern auf dem QIAcuity Digital PCR System

Product Details

Das Adeno-assoziierte Virus ist ein häufig bei Gentherapieanwendungen eingesetzter viraler Vektor. Der Prozess der Generierung und Aufreinigung der viralen Vektoren erfordert jedoch eine präzise Qualitätskontrolle, um eine sichere und zuverlässige Dosierung im Rahmen klinischer Studien oder der Patientenversorgung zu gewährleisten. Die Möglichkeit zur genauen Quantifizierung von Vektortitern sowie zum Nachweis von Kontaminationen ist für sichere und wirksame AAV-basierte Gentherapien von zentraler Bedeutung. 


Mit der Einführung des CGT Viral Vector Lysis Kit, das Reagenzien für entweder 100 oder 1000 Reaktionen enthält, bieten wir nun einen optimierten und standardisierten Workflow für die Lyse viraler Vektoren an, der eine genaue und präzise Bestimmung des Virustiters ermöglicht. Das Kit ist auch mit Adenoviren kompatibel.

Performance

Wir bieten einen vollständigen Workflow von der Durchführung der AAV-Lyse bis hin zur Quantifizierung des Virustiters aus Zelllysaten. Das CGT Viral Vector Lysis Kit mit seiner verbesserten Formel ermöglicht eine konsistente, robuste und genaue Bestimmung des finalen Titers. Es wird zusammen mit QIAcuity Cell and Gene Therapy dPCR Assays, QIAcuity Digital PCR System, QIAcuity Probe PCR Kit und QIAcuity Nanoplate 8.5K verwendet und bietet einen lückenlosen dPCR-Workflow, der mit der qPCR vergleichbar ist, aber eine absolute Quantifizierung der AAV-Vektorgenomkopien in Ihrer Probe ermöglicht.

Principle

Die Komplettlösung für die AAV-Lyse bietet:

  • Standardisierung der AAV-Lyse mit deutlich einfacherer Implementierung von Standardarbeitsanweisungen (Standard Operating Procedure, SOPs) und QK
  • Konsistente Quantifizierung von Titern
  • Breiter Nachweisbereich zwischen 2,5 Kopien/µl und 15.000 Kopien/µl in der QIAcuity Nanoplate 8.5k
  • Robustheit von < 10 % VK zwischen Bedienern und Assays

Das CGT Viral Vector Lysis Kit bietet nun in Verbindung mit den QIAcuity Cell and Gene Therapy dPCR Assays und dem QIAcuity Probe PCR Kit zur Durchführung von entweder Singleplex- oder Multiplex-Reaktionen auf den QIAcuity Geräten einen vollständigen Virustiter-Workflow.

Das Prinzip der dPCR-Reaktion in Nanoplatten finden Sie hier beschrieben.

 

Procedure

Das CGT Viral Vector Lysis Kit wird mit Reagenzien für 100 oder 1000 Reaktionen in zwei Packungen für AAV-Vektoren angeboten. Das Kit eignet sich für die Lyse von AAV2, AAV5, AAV6, AAV8 und AAV9. Die Lysate sind für QIAcuity Cell and Gene Therapy dPCR Assays in Kombination mit dem QIAcuity Probe PCR Kit optimiert. Diese Assays ermöglichen sowohl Singleplex- als auch Multiplex-Zell- und Gentherapie-Anwendungen, einschließlich Messung des Virustiters und der Vektorkopienzahl. Das Kit enthält nicht die im Protokoll (im Abschnitt „Ressourcen“ unten zu finden) angegebenen Restriktionsenzyme (z. B. Hpall).

Applications

Das CGT Viral Vector Lysis Kit wird für die Lyse von AAV und Adenoviren für eine Reihe von Anwendungen einschließlich der Messung der Genomtiter viraler Vektoren und der Vektorkopienzahl verwendet.

Supporting data and figures

Resources

Brochures & Guides (1)
Quick-Start Protocols (2)
This protocol is optimized for the processing of viral vectors for genome titer quantification on the QIAcuity® digital PCR instrument using the dPCR CGT Viral Vector Lysis Kits (cat. nos. 250272, 250273). The kits are optimized for usage with the QIAcuity Probe PCR Kit (cat. nos. 250101, 250102, 250103) and the QIAcuity Cell and Gene Therapy (CGT) dPCR Assays.
This protocol is optimized for the processing of viral vectors for genome titer quantification on the QIAcuity® digital PCR instrument using the dPCR CGT Viral Vector Lysis Kits (cat. no. 250272, 250273). The kits are optimized for usage with the QIAcuity Probe PCR Kit (cat. no. 250101, 250102, 250103) and the QIAcuity Cell and Gene Therapy (CGT) dPCR Assays
Safety Data Sheets (1)
Certificates of Analysis (1)

FAQ

Do you have to use a restriction enzyme to relieve ITR secondary structures and increase target accessibility?
It is highly recommended and an important step in the protocol. ITR secondary structures reduce target accessibility and negatively affect quantification of ITR targets and non-ITR targets.
We recommend using the following HpaII restriction enzymes: Thermo Scientific™ HpaII (10 U/µL, cat. nos. ER0511, ER0512) or Invitrogen™ Anza™ 93 HpaII (cat. no. IVGN0936).
FAQ ID - 3974
Do you need to dilute the lysates before setting up the PCR mix?
The lysates must be diluted in total of at least 1:100 taking together the dilution after capsid lysis and the dilution in the PCR reaction. A total of 200x dilution is recommended.
FAQ ID - 3978

Do I need to use Proteinase K in the CGT Viral Vector Lysis Kit? What is the recommended concentration?
No, Proteinase K use is optional and does not interfere with the kit performance. It is recommended to use 2 µL of Proteinase K (RP107B) in a 50 µL reaction. The Proteinase K has a concentration of 20mg/mL with 800 U/mL.
FAQ ID - 3971
Is the kit compatible with unpurified in-process samples?
Yes, it is.
FAQ ID - 3965
Can I use the lysate from the CGT Viral Vector Lysis kit and combine it with another PCR system?
Yes, however, the complete workflow has been optimized with the QIAcuity Cell and Gene Therapy (CGT) dPCR Assays on the QIAcuity Digital PCR System to ensure standardization and reproducibility of viral vector titer determinations.
FAQ ID - 3979

How do I know if the CGT dPCR assays are compatible with the sample DNA of interest?
An extended sequence context for each assay is provided in the corresponding data sheets. 
FAQ ID - 3980

Are the CGT dPCR assays also compatible with qPCR?
Yes, the assays can also be used for vector genome titration in a qPCR setup.
FAQ ID - 3981

Is it possible to store the lysates? How can the lysates be stored?
Long-term storage of lysates is not recommended. If lysates must be stored, it is recommended to store them at 4°C. Do not freeze.
FAQ ID - 3973
Can I use MspI or HpaII restriction enzymes from other suppliers?
The HpaII enzymes from Thermo Fisher Scientific ER0511, ER0512 and IVGN0936 have been extensively tested and show high compatibility with the QIAcuity Probe PCR chemistry. Use of MspI enzymes is not recommended. Compatibility of alternative enzymes must be individually tested and may need additional optimization.
FAQ ID - 3975
How many AAV genome copies can I load into the QIAcuity?
Recommended detection range in the dPCR using a 8.5k nanoplate is between 2.5 cop/μL to 15,000 copies/μL.
FAQ ID - 3977
Can the CGT Viral Vector Lysis kit be used with assays of other suppliers or custom designed assays?
Yes. Optimization of the cycling and imaging conditions might be needed.
FAQ ID - 3982

What is the recommended HpaII concentration?
Enzyme concentration depends on sample input and incubation time. When following our protocol described in the handbook HpaII enzymes work in the following range:
  • IVGN0936: 0.025 – 0.125 U/µL
  • ER0511/ER0512: 0.25 – 0.5 U/µL
FAQ ID - 3976
Do you recommend storage of highly diluted AAV samples?
No, it is not recommended to store AAV samples in a highly diluted state.
FAQ ID - 3972