TAGZyme System

• Expresión de marcadores His optimizada para su eliminación mediante la enzima TAGZyme
• Eliminación eficiente de marcadores His: >95 % en solo 30 minutos a 37 °C
• Expresión de alto nivel de proteínas con marcador His en el extremo N
• Productos finales de pureza elevada
• Eliminación completa de contaminantes mediante el método Ni-NTA

La TAGZyme Enzyme DAPase incluye suficiente enzima para la eliminación altamente específica y eficiente de marcadores His de hasta 10 mg de proteína con marcador His. El TAGZyme System se puede usar para la eliminación de marcadores His de proteínas que contienen un punto de parada DAPase intrínseco expresado usando el vector TAGZyme pQE-2.

La TAGZyme DAPase Enzyme elimina de manera eficiente dipéptidos secuencialmente de marcadores His en el extremo N hasta el “punto de parada” expresado usando el vector TAGZyme pQE-2.

Las proteínas recombinantes con marcador His se han convertido en herramientas valiosas para estudiar la estructura y la función de las proteínas. El pequeño tamaño y la baja inmunogenicidad del marcador His hacen que, por lo general, no sea necesario eliminarla. Sin embargo, para algunas aplicaciones, como los estudios de determinación de la estructura mediante rayos X o RMN, o la producción de productos terapéuticos, se prefiere un producto proteínico libre de aminoácidos derivados del vector.

El TAGZyme pQE-2 Vector es idóneo para proteínas que contienen un punto de parada DAPase intrínseco. 

El TAGZyme System elimina marcadores His del extremo N de las proteínas recombinantes con alta especificidad y eficiencia. La enzima DAPase se utiliza para escindir secuencialmente dipéptidos procedentes del extremo N de la proteína purificada con marcador His (consulte la figura  “Eliminación de marcadores His”). La digestión se interrumpe cuando la enzima alcanza un “punto de parada”, un motivo aminoácido no puede servir como sustrato (consulte la tabla “Puntos de parada DAPase”).

Puntos de parada DAPase

Con proteínas recombinantes que contienen puntos de parada intrínsecos, la expresión con el TAGZyme pQE-2 Vector permite la eliminación completa y eficiente del marcador His del extremo N independientemente del sitio de clonación del inserto de ADN (consulte la figura  “Eliminación de marcadores His”). Después de la incubación con la enzima DAPase, la mezcla de reacción se somete a cromatografía sustractiva de afinidad con iones metálicos inmovilizados (IMAC) utilizando una matriz de Ni-NTA (consulte la figura  “Purificación de proteínas sin marcadores”). Los fragmentos con marcadores His y la TAGZyme DAPase Enzyme (que porta un marcador 6xHis en el extremo C) se unen a la matriz, y la proteína diana pura y sin marcadores se recupera en la fracción de elución.

El TAGZyme System ofrece escisión específica, el uso de reactivos recombinantes y la eliminación completa de todos los contaminantes, lo que lo convierte en el método de referencia para la producción de proteínas sin marcadores His para aplicaciones como:

• Determinación de la estructura de la proteína mediante RMN o cristalografía de rayos X
• Producción de proteínas terapéuticas