Ni-NTA Superflow Cartridges
Para la purificación de proteína marcada con His utilizando sistemas de cromatografía líquida
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Cat. No. / ID: 30761
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Ni-NTA Superflow, la resina más citada utilizada para la purificación de proteínas marcadas por His, está disponible en cartuchos precargados de 1 ml y 5 ml para la purificación automatizada en sistemas de cromatografía líquida, como los sistemas FPLC, ÄkTA y BioLogic, o la purificación manual por medio de jeringa.
Ni-NTA ofrece un desempeño superior al proporcionar altos rendimientos de proteínas de gran pureza, en comparación con otras resinas (consulte la figura Ni-NTA supera a otras resinas para proporcionar altos rendimientos de proteínas de gran pureza). Una comparación independiente con otras resinas de níquel disponibles en el mercado demostró que NTA Superflow muestra el nivel más bajo de lixiviación del níquel (consulte la figura Un estudio independiente muestra que Ni-NTA pierde menos níquel que ninguna otra resina probada). La importancia aquí es que si el níquel se lixivia de la resina, los ligandos cargados restantes actúan como un intercambiador de iones y unen proteínas sin marcador que contaminarán fracciones de elución. La mayor estabilidad de Ni-NTA implica que incluso en la presencia de 10 mM de DTT se puede utilizar para obtener proteínas totalmente activas y de gran pureza (consulte la figura El lugar de coordinación adicional en Ni-NTA une al ion níquel con más fuerza que la IDA).
Como se muestra en la tabla, las purezas son consistentemente altas en todas las escalas de purificación. Los Ni-NTA Superflow Cartridges forman parte de las soluciones integrales y complementarias para la proteína marcada con His que ofrece QIAGEN (consulte la figura Purificación escalable de cantidades de nanogramos a gramos de proteínas marcadas con His).
Matriz | Volumen de la matriz |
Volumen del cultivo |
Rendimiento | Recuperación (%) | Pureza* |
---|---|---|---|---|---|
Ni-NTA Magnetic Agarose Beads (microescala) | 100 μl | 1 ml | 33 μg | ~90 % | ~97 % |
Ni-NTA Superflow (pequeña escala) | 500 μl | 320 ml | 6 mg | ~80 % | ~96 % |
Ni-NTA Superflow (escala media) | 10 ml | 1,7 l | 109 mg | ~80 % | ~98 % |
Ni-NTA Superflow (gran escala) | 100 ml | 18 l | 2 g | > 88% | ~97 % |
Las matrices de Ni-NTA son la solución de elección de la cromatografía de afinidad para purificar las proteínas marcadas con His (consulte la figura Purificación eficiente en un paso de las proteínas marcadas con His). Su alta estabilidad implica que son compatibles con una amplia gama de componentes de tampones, incluyendo los desnaturalizantes y detergentes potentes e incluso los agentes reductores (consulte la tabla Reactivos compatibles con la interacción His/Ni-NTA). Esta flexibilidad permite a los investigadores desarrollar esquemas óptimos de purificación a la vez que se siguen beneficiando de las excelentes características de separación proporcionadas por Ni-NTA, lo que a menudo hace que un segundo paso cromatográfico sea innecesario.
Desnaturalizantes | Detergentes | Agentes reductores | Otros | Sales | Almacenamiento a largo plazo |
---|---|---|---|---|---|
6 M de Gu·HCl | 2 % de Triton X-100 | 20 mM de ME | 50 % de glicerol | 4 M de MgCl2 | Hasta un 30 % de etanol |
8 M de urea | 2 % de Tween 20 | 10 mM de DTT | 20 % de etanol | 5 mM de CaCl2 | o 100 mM de NaOH |
1 % de CHAPS | 20 mM de TCEP 20 mM | 20 mM de TCEP | 20 mM de imidazol | 2 M de NaCl |
Las matrices Ni-NTA se pueden utilizar para aumentar la purificación de las proteínas marcadas con His para estudios estructurales (por ejemplo, utilizando la cristalografía de proteína o NMR), o para producir cantidades de gramos para la producción biofarmacéutica.
Features | Specifications |
---|---|
Applications | Proteómica |
Gravity flow or spin column | FPLC o jeringa |
Binding capacity | Hasta 50 mg/ml |
FPLC | Sí |
N- or C-terminal tag | Ambos |
Bead size | 60-160 µm |
Processing | Manual/Automatizado |
Scale | Gran escala |
Start material | Lisado celular |
Support/matrix | Superflow |
Tag | Etiqueta 6xHis |
Yield | Hasta 50 mg (cartucho de 1 ml), hasta 250 mg (cartucho de 5 ml) |