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Cat. No. / ID: 969261
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El Ni-NTA Superflow 96 BioRobot Kit proporciona una purificación automatizada de hasta 300 µg de proteína recombinante a partir de 96 muestras en paralelo (protocolo normalizado, 5 ml de volumen de cultivo por muestra). Los lisados celulares bacterianos limpios fluyen a una placa de filtro precargada con Ni-NTA Superflow mediante la estación de trabajo BioRobot. Este módulo único de cromatografía de afinidad por quelación de metal de 96 pocillos une con fuerza y selectivamente las proteínas marcadas con His. Los protocolos listos para ejecutar se proporcionan para la purificación en condiciones nativas o desnaturalizantes.
En respuesta a las necesidades de los clientes’ de mayores cantidades de proteína de procedimientos automatizados, QIAGEN ha adaptado el protocolo Ni-NTA Superflow 96 BioRobot para permitir el proceso de mayores volúmenes de cultivos y la purificación de hasta 2 mg cantidades de proteína marcadas con His por pocillo. El aumento de la cantidad de la resina Ni-NTA Superflow utilizada en el procedimiento de 200 µl por pocillo y una formulación optimizada de tampones de lisis permite procesar hasta 25 ml (purificación en condiciones nativas) o 15 ml (purificación en condiciones desnaturalizantes) de cultivos (protocolos de alto rendimiento). Los cultivos celulares se transmiten a bloques de 24 pocillos para su procesamiento. El aumento correspondiente en la biomasa puede producir un aumento del rendimiento de la proteína pura marcada con His por pocillo (consulte la tabla y la figura Cantidad de miligramos de proteínas marcadas con His por pocillo), lo que permite que varios ensayos se lleven a cabo en el mismo lote de proteínas y que se reduzca el número total de preparaciones de proteínas requeridas; consulte también la figura Cribado automatizado de clones de expresión. La purificación en un único paso proporciona proteínas de gran pureza en una amplia gama de rendimientos y se puede realizar la purificación de grandes complejos proteicos.
Proteína marcada con His | Rendimiento total por pocillo (µg)* |
Concentración de proteína (mg/ml)† |
---|---|---|
Proteína verde fluorescente | 4000 | 6,0 |
Polimerasa de ARN T7 | 1000 | 1,4 |
GroES | 300 | 0,4 |
Cloranfenicol acetiltransferasa | 2400 | 4,4 |
GroEL | 740 | 1,0 |
Factor de necrosis tumoral α | 1600 | 2,5 |
GroES/GroEL | 1200 | 1,5 |
Cpn-10 | 170 | 0,3 |
El QIAexpress Ni-NTA Protein Purification System, incluyendo el Ni-NTA Superflow 96 BioRobot Kit, se basa en la notable selectividad de la resina patentada de Ni-NTA (ácido níquel-nitrilotriacético) para proteínas que contienen un marcador de afinidad de seis o más residuos de histidina: — el marcador His. Esta tecnología permite la purificación en un paso de casi cualquier proteína marcada con His a partir de cualquier sistema de expresión en condiciones nativas o desnaturalizantes. El NTA, que tiene cuatro lugares de quelación para los iones de níquel, une el níquel con mayor fuerza que los sistemas de purificación por quelación de metales que solo tienen tres lugares disponibles para la interacción con iones de metal. El lugar adicional de quelación impide la lixiviación iónica del níquel y da lugar a una mayor capacidad de unión y a preparaciones de proteína con una pureza más elevada que las obtenidas mediante otros sistemas de purificación por quelación de metales. El sistema QIAexpress se puede utilizar para purificar proteínas marcadas con His a partir de cualquier sistema de expresión, incluyendo baculovirus, células de mamíferos, levaduras y bacterias. (Consulte la figura Purificación de proteína con el sistema de purificación de proteína Ni-NTA).
El Ni-NTA Superflow 96 BioRobot Kit está diseñado para su uso con las estaciones de trabajo BioRobot 3000, 8000 o 9600. .
Desnaturalizantes | Detergentes | Agentes reductores | Otros | Sales | Para almacenamiento a largo plazo |
---|---|---|---|---|---|
6 M de Gu·HCl | 2 % de Triton X-100 | 20 mM de ME | 50 % de glicerol | 4 M de MgCl2 | Hasta un 30 % de etanol |
8 M de urea | 2 % de Tween 20 | 10 mM de DTT | 20 % de etanol | 5 mM de CaCl2 | o 100 mM de NaOH |
1 % de CHAPS | 20 mM de TCEP | 20 mM de imidazol | 2 M de NaCl |
El QIAexpress Ni-NTA Protein Purification System proporciona una purificación fiable en un paso de proteínas adecuadas para muchas aplicaciones, entre las que se incluyen:
Protein purification with the Ni-NTA protein purification system.
Features | Specifications |
---|---|
Applications | Proteómica |
Yield | 15 µg – 4 mg |
Start material | Lisado celular |
Tag | Etiqueta 6xHis |
Bead size | 60-160 µm |
Special feature | Sin contaminación cruzada |
Scale | Escala media |
Number of preps per run | 1-96 muestras por serie |
Processing | Automatizado |
Support/matrix | Superflow |
Binding capacity | 5-20 mg/ml |