His-Strep pQE-TriSystem Vector Set

• Expresión paralela en tres sistemas con una única construcción
• Evita la necesidad de consumir tiempo con la subclonación
• Alto nivel de expresión
• Expresión estrictamente regulada
• Mayor estabilidad de las construcciones citotóxicas

His-Strep pQE-TriSystem Vector Set permite la expresión de proteínas tanto con una etiqueta 6xHis como con Strep-tag II. El doble marcador permite la purificación mediante un sistema de purificación por afinidad, lo que posibilita una purificación simple y muy eficaz de proteínas ultrapuras en un procedimiento estándar. El sistema también aumenta el rendimiento y elimina la necesidad de desarrollar y optimizar protocolos específicos para proteínas. Las proteínas recombinantes con ambas etiquetas son purificadas de manera secuencial en las matrices Ni-NTA y Strep-Tactin (consulte la figura “ Procedimiento por afinidad en dos pasos”). Las dos sencillas purificaciones por afinidad proporcionan una proteína completamente activa, de longitud completa y ultrapura que es idónea para cualquier aplicación posterior.

Las proteínas recombinantes que portan dos pequeñas etiquetas de afinidad (la etiqueta 6xHis y la etiqueta Strep-tag II) se expresan de manera eficaz en E. coli, células de insecto o mamífero que usan pQE-TriSystem His-Strep Vectors. Tras el lisado celular y el aclaramiento del lisado, las proteínas se purifican inicialmente mediante un procedimiento de cromatografía de afinidad con iones metálicos inmovilizados (IMAC) que se basa en la interacción probada entre la etiqueta 6xHis y Ni-NTA. Tras la elución de la matriz Ni-NTA con imidazol, las proteínas recombinantes (que también portan el epítopo con Strep-tag II) se cargan directamente en una matriz Strep-Tactin (consulte la figura “Procedimiento de purificación por afinidad en dos pasos”). No se exige intercambio de tampón. La proteína se eluye de la matriz Strep-Tactin con biotina o destiobiotina. Se pueden detectar proteínas con alta especificidad y sensibilidad mediante anticuerpos monoclonales de ratón Strep-tag o Anti·His (véase la figura “ Detección altamente sensible de proteínas portadoras de un Strep-tag”).

El Sistema de Purificación por Afinidad en Dos Pasos es muy adecuado para aplicaciones en las que es esencial una alta pureza y es difícil conseguirla sólo con His-tag, por ejemplo, para proteínas expresadas en células eucariotas. La pureza ultra alta y la comodidad que ofrece el sistema de purificación por afinidad en dos pasos lo convierten en el método de elección para:

• Purificación de proteínas de alta pureza
• Análisis estructurales y funcionales
• Expresión en sistemas eucarióticos