His-Strep pQE-TriSystem Vector Set

• 단일 구조체를 사용하는 세 가지 시스템의 병렬 발현
• 시간이 많이 걸리는 서브클로닝이 필요 없음
• 고수준 발현
• 엄격하게 제어되는 발현
• 향상된 세포 독성 구조체의 안정성

His-Strep pQE-TriSystem Vector Set는 6xHis tag와 Strep-tag II가 모두 포함된 단백질의 발현을 허용합니다. 이중 태그를 사용하면 2단계 친화성 정제 시스템으로 정제할 수 있어 표준화된 절차로 초순수 단백질을 간단하고 효율적으로 정제할 수 있습니다. 또한 이 시스템은 단백질별 프로토콜을 개발 및 최적화할 필요가 없어 처리량을 증가시킵니다. 두 태그를 모두 포함하는 재조합 단백질은 Ni-NTA 및 Strep-Tactin 매트릭스에서 순차적으로 정제됩니다(그림 ' 2단계 친화성 절차' 참조). 이 두 가지의 간단한 친화성 정제는 모든 다운스트림 애플리케이션에 사용할 수 있는 완전 활성화된 전장 및 초순수 단백질을 제공합니다.

두 개의 작은 친화성 태그(6xHis tag 및 Strep-tag II)를 포함하는 재조합 E. coli는 대장균, 곤충 또는 포유류 세포에서 pQE-TriSystem His-Strep 벡터를 사용하여 효율적으로 발현됩니다. 세포를 용해하고 용해물을 제거한 후, 단백질은 먼저 입증된 6xHis-tag-Ni-NTA 상호작용을 기반으로 하는 고정화 금속 친화성 크로마토그래피(Immobilized-Metal Affinity Chromatography, IMAC) 절차를 사용하여 정제됩니다. 이미다졸(imidazole)을 사용하여 Ni-NTA 매트릭스에서 용출한 후, 재조합 단백질(Strep-tag II 에피토프도 포함)을 Strep-Tactin 매트릭스에 직접 로드합니다(그림 '2단계 친밀도 정제 절차' 참조). 완충액 교환이 필요하지 않습니다. 비오틴 또는 데스티오비오틴을 사용하여 Strep-Tactin 매트릭스에서 단백질을 용출합니다. 단백질은 마우스 단일클론성 Strep-tag 또는 Anti His 항체를 사용하여 높은 특이성과 민감도로 검출할 수 있습니다(그림 ' Strep-tag가 포함된 단백질의 고감도 검출' 참조).

2단계 친화성 정제 시스템은 진핵 세포에서 발현되는 단백질과 같이 고순도가 필수적이고 His-tag만으로는 달성하기 어려운 애플리케이션에 매우 적합합니다. 2단계 친화성 정제 시스템이 제공하는 초고순도 및 편의성으로 인해 이 방법은 다음과 같은 경우에 선택됩니다.

• 고순도 단백질 정제
• 구조적 및 기능적 분석
• 진핵생물 시스템에서의 발현