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입증된 6xHis 태그와 짧은 Strep 태그 II를 기반으로 하는 Two-Step Affinity Purification System은 빠르고 표준화된 절차를 통해 초순수 단백질을 간단하고 매우 효율적으로 정제할 수 있습니다. 두 태그를 모두 포함하는 재조합 단백질은 Ni-NTA 기질과 Strep-Tactin 기질에서 순차적으로 정제됩니다(그림 2단계로 얻는 초순수 단백질 참조). 간단한 두 친화성 정제에서는 모든 다운스트림 응용 분야에 적합한 완전 활성, 전장, 초순수 단백질을 제공합니다.
작은 친화성 태그(6xHis 태그 및 Strep 태그 II) 2개가 있는 재조합 단백질은 pQE-TriSystem His·Strep 벡터를 사용하여 E. coli, 곤충 또는 포유류 세포에서 효율적으로 발현됩니다. 단백질은 세포 용해 및 용해물 제거 후 입증된 6xHis-tag-Ni-NTA 상호 작용을 기반으로 하는 고정 금속 친화성 크로마토그래피 절차를 사용하여 초기에 정제됩니다. 재조합 단백질(Strep-tag II epitope도 포함)은 이미다졸을 사용하여 Ni-NTA 기질에서 용출한 후 Strep-Tactin 기질에 직접 넣습니다. 완충액 교체가 필요하지 않습니다. 단백질은 비오틴 또는 데스티오비오틴을 사용하여 Strep-Tactin 기질에서 용출합니다. 이 2단계 친화성 정제에서는 초순수(순도 98% 초과) 단백질을 제공합니다(그림 2단계 친화성 정제 절차 참조). 정제 순서는 바꿀 수 있습니다(즉, Strep-Tactin 정제 후 Ni-NTA 정제). 단백질은 마우스 단일 클론 Strep-tag 또는 Anti·His 항체를 사용하여 높은 특이성과 민감도로 검출할 수 있습니다.
검출에 Strep-tag Antibody를 사용하는 2단계 친화성 정제 시스템은 고순도가 중요하거나 달성하기 어려운 응용 분야에 적합합니다. 또한 표준 정제 절차를 통해 단백질 고유의 정제 프로토콜을 개발하고 최적화할 필요가 없어 처리량이 증가합니다. 2단계 친화성 정제 시스템이 제공하는 초고순도와 편의성으로 인해 다음과 같은 경우 적합한 방법입니다.
Highly sensitive detection of proteins carrying a Strep-tag.
Features | Specifications |
---|---|
Applications | 웨스턴 블롯, 점 블롯, ELISA, 면역침전, 면역조직화학 |
Detection | 이차 항체 필요 |
Sensitivity in Western blots (chemiluminescent detection) | 1ng |
Substrate for blot detection | 이차 항체에 따라 다름 |
Substrates for assay procedure | 이차 항체에 따라 다름 |
Tag | Strep-tag |
Epitope detected | SAWSHPQFEK |