Ni-NTA Superflow Cartridges
액체 크로마토그래피 시스템을 사용한 His 태그 단백질 정제에 사용
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Cat. No. / ID: 30761
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His 태그 단백질 정제에 가장 많이 사용되는 수지인 Ni-NTA Superflow는 FPLC, ÄkTA, BioLogic 시스템과 같은 액체 크로마토그래피 시스템의 자동 정제 또는 주사기를 사용한 수동 정제를 위해 미리 채워진 1ml 및 5ml 카트리지로 제공됩니다.
Ni-NTA는 다른 수지와 비교하여 고순도 단백질을 높은 수율로 제공하는 성능이 탁월합니다(그림 다른 수지보다 뛰어난 성능으로 고순도 단백질을 높은 수율로 제공하는 Ni-NTA 참조). 판매 중인 다른 니켈 수지와 독립적으로 비교한 결과 Ni-NTA Superflow의 니켈 침출 수준이 가장 낮은 것으로 나타났습니다(그림 참조 독립적인 연구에 따르면 Ni-NTA는 테스트된 다른 수지보다 니켈 손실이 적음을 보여줍니다. ). 여기에서 중요한 점은 수지에서 니켈이 침출되면 남은 하전 리간드가 이온 교환기 역할을 하고 태그 없는 단백질과 결합하여 용출 분획이 오염된다는 것입니다. Ni-NTA의 안정성이 향상되면 10mM DTT가 있어도 완전 활성인 고순도 단백질을 얻는 데 사용할 수 있습니다(그림 Ni-NTA의 추가 배위 부위는 IDA보다 니켈을 더 단단히 결합합니다. 참조).
표에서 볼 수 있듯이 모든 정제 규모에서 순도가 일관되게 높습니다. Ni-NTA Superflow Cartridges는 QIAGEN에서 제공하는 His 태그 단백질을 위한 종합적이고 보완적인 솔루션의 일부입니다(그림 His 태그 단백질의 양을 나노그램에서 그램 단위의 양으로 확장 가능한 정제 참조).
기질 | 기질 용량 |
배양액 용량 |
수율 | 회수율(%) | 순도* |
---|---|---|---|---|---|
Ni-NTA Magnetic Agarose Beads(미량) | 100μl | 1 ml | 33μg | ~90% | ~97% |
Ni-NTA Superflow(소량) | 500μl | 320ml | 6 mg | ~80% | ~96% |
Ni-NTA Superflow(중간 용량) | 10 ml | 1.7 l | 109 mg | ~80% | ~98% |
Ni-NTA Superflow(대용량) | 100 ml | 18 l | 2 g | >88% | ~97% |
Ni-NTA 기질은 His 태그 단백질을 정제하기 위해 선택하는 친화성 크로마토그래피 용액입니다(그림 효율적인 단일 단계를 통한 His 태그 단백질 정제 참조). 안정성이 높으면 강력한 변성제, 세제, 심지어 환원제까지 포함하여 광범위한 완충액 성분과 호환됩니다(표 'His/Ni-NTA 상호 작용과 호환되는 시약' 참조). 이러한 유연성 덕분에 연구자는 Ni-NTA가 제공하는 우수한 분리 특성의 이점을 유지하면서 최적의 정제 체계를 개발할 수 있어 두 번째 크로마토그래피 단계가 필요하지 않을 때가 많습니다.
변성제 | 세제 | 환원제 | 기타 | 염 | 장기 보관 |
---|---|---|---|---|---|
6 M Gu·HCl | 2% Triton X-100 | 20mM β-ME | 50% 글리세롤 | 4M MgCl2 | 최대 30% 에탄올 |
8M urea | 2% Tween 20 | 10mM DTT | 20% 에탄올 | 5mM CaCl2 | 또는 100mM NaOH |
1% CHAPS | 20mM TCEP | 20mM TCEP | 20mM 이미다졸 | 2M NaCl |
Ni-NTA 기질을 사용하면 구조 연구(예: 단백질 결정학 또는 NMR 사용)를 위해 His 태그 단백질 정제 규모를 확장하거나 바이오 의약품 생산을 위해 그램 단위의 양을 생산할 수 있습니다.
Features | Specifications |
---|---|
Applications | 단백질체학 |
Gravity flow or spin column | FPLC 또는 주사기 |
Binding capacity | 최대 50mg/ml |
FPLC | 예 |
N- or C-terminal tag | 둘 다 |
Bead size | 60~160µm |
Processing | 수동/자동 |
Scale | 대용량 |
Start material | 세포 용해물 |
Support/matrix | Superflow |
Tag | 6xHis tag |
Yield | 최대 50mg(1ml 카트리지), 최대 250mg(5ml 카트리지) |