Ni-NTA Superflow Cartridges

액체 크로마토그래피 시스템을 사용한 His 태그 단백질 정제에 사용

S_0295_PROT_NiNTA

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Ni-NTA Superflow Cartridges (5 x 5 ml)

Cat. No. / ID:  30761

Ni-NTA Superflow 5ml가 사전 충전된 카트리지 5개: 액체 크로마토그래피 시스템을 사용하여 His 태그 단백질 자동 정제에 사용
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₩1,067,000.00
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Ni-NTA Superflow Cartridges은/는 분자생물학 분야에 사용하기 위한 것입니다. 이 제품들은 질병의 진단, 예방, 또는 치료 목적으로 사용할 수 없습니다.

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Features

  • 가장 광범위한 조건에 걸친 가장 강력한 단일 단계 정제
  • 최대 50mg/ml의 높은 고순도 단백질 수율
  • 모든 LC 시스템에서 빠르고 쉽고 재현 가능한 처리

Product Details

His 태그 단백질 정제에 가장 많이 사용되는 수지인 Ni-NTA Superflow는 FPLC, ÄkTA, BioLogic 시스템과 같은 액체 크로마토그래피 시스템의 자동 정제 또는 주사기를 사용한 수동 정제를 위해 미리 채워진 1ml 및 5ml 카트리지로 제공됩니다.

Performance

Ni-NTA는 다른 수지와 비교하여 고순도 단백질을 높은 수율로 제공하는 성능이 탁월합니다(그림  다른 수지보다 뛰어난 성능으로 고순도 단백질을 높은 수율로 제공하는 Ni-NTA 참조). 판매 중인 다른 니켈 수지와 독립적으로 비교한 결과 Ni-NTA Superflow의 니켈 침출 수준이 가장 낮은 것으로 나타났습니다(그림 참조  독립적인 연구에 따르면 Ni-NTA는 테스트된 다른 수지보다 니켈 손실이 적음을 보여줍니다. ). 여기에서 중요한 점은 수지에서 니켈이 침출되면 남은 하전 리간드가 이온 교환기 역할을 하고 태그 없는 단백질과 결합하여 용출 분획이 오염된다는 것입니다. Ni-NTA의 안정성이 향상되면 10mM DTT가 있어도 완전 활성인 고순도 단백질을 얻는 데 사용할 수 있습니다(그림  Ni-NTA의 추가 배위 부위는 IDA보다 니켈을 더 단단히 결합합니다. 참조).

표에서 볼 수 있듯이 모든 정제 규모에서 순도가 일관되게 높습니다. Ni-NTA Superflow Cartridges는 QIAGEN에서 제공하는 His 태그 단백질을 위한 종합적이고 보완적인 솔루션의 일부입니다(그림  His 태그 단백질의 양을 나노그램에서 그램 단위의 양으로 확장 가능한 정제 참조).

 

바이오 의약품 프로젝트를 위한 미량에서 대용량의 IL-1β 정제
기질 기질
용량
배양액
용량
수율 회수율(%) 순도*
Ni-NTA Magnetic Agarose Beads(미량) 100μl 1 ml 33μg ~90% ~97%
Ni-NTA Superflow(소량) 500μl 320ml 6 mg ~80% ~96%
Ni-NTA Superflow(중간 용량) 10 ml 1.7 l 109 mg ~80% ~98%
Ni-NTA Superflow(대용량) 100 ml 18 l 2 g >88% ~97%
See figures

Principle

Ni-NTA 기질은 His 태그 단백질을 정제하기 위해 선택하는 친화성 크로마토그래피 용액입니다(그림  효율적인 단일 단계를 통한 His 태그 단백질 정제 참조). 안정성이 높으면 강력한 변성제, 세제, 심지어 환원제까지 포함하여 광범위한 완충액 성분과 호환됩니다(표 'His/Ni-NTA 상호 작용과 호환되는 시약' 참조). 이러한 유연성 덕분에 연구자는 Ni-NTA가 제공하는 우수한 분리 특성의 이점을 유지하면서 최적의 정제 체계를 개발할 수 있어 두 번째 크로마토그래피 단계가 필요하지 않을 때가 많습니다.

His/Ni-NTA 상호 작용과 호환되는 시약
변성제세제환원제기타장기 보관
6 M Gu·HCl2% Triton X-10020mM β-ME50% 글리세롤4M MgCl2최대 30% 에탄올
8M urea2% Tween 2010mM DTT20% 에탄올5mM CaCl2또는 100mM NaOH
1% CHAPS20mM TCEP20mM TCEP20mM 이미다졸2M NaCl
See figures

Procedure

강력한 Superflow 기질은 최대 10ml/min(1ml 카트리지) 및 40ml/min(5ml 카트리지)의 유속이 가능하여 정제 절차 속도가 빠르고 처리량이 향상됩니다. 카트리지는 액체 크로마토그래피 시스템이나 수동 정제용 주사기에 쉽고 빠르게 연결할 수 있습니다. 정제 과정은 재현성이 매우 높기 때문에 시간이 지나도 단백질 제제의 높은 품질이 유지됩니다(그림  재현성이 높고 신뢰할 수 있는 정제 참조).
See figures

Applications

Ni-NTA 기질을 사용하면 구조 연구(예: 단백질 결정학 또는 NMR 사용)를 위해 His 태그 단백질 정제 규모를 확장하거나 바이오 의약품 생산을 위해 그램 단위의 양을 생산할 수 있습니다.

Supporting data and figures

Specifications

FeaturesSpecifications
Applications단백질체학
Gravity flow or spin columnFPLC 또는 주사기
Binding capacity최대 50mg/ml
FPLC
N- or C-terminal tag둘 다
Bead size60~160µm
Processing수동/자동
Scale대용량
Start material세포 용해물
Support/matrixSuperflow
Tag6xHis tag
Yield최대 50mg(1ml 카트리지), 최대 250mg(5ml 카트리지)

Publications

A highly specific system for efficient enzymatic removal of tags from recombinant proteins.
Schäfer F; Schäfer A; Steinert K;
J Biomol Tech; 2002; 13 (3):158-71 2002 Sep PMID:19498979
Use of dual affinity tags for expression and purification of functional peripheral cannabinoid receptor.
Yeliseev A; Zoubak L; Gawrisch K;
Protein Expr Purif; 2006; 53 (1):153-63 2006 Dec 12 PMID:17223358

FAQ

Can the Ni-NTA Superflow Cartridges and/or Strep-Tactin Cartridges be connected in series?

Yes, Ni-NTA and Strep-Tactin Superflow Cartridges can be connected in series.

The Union M6 female/1/16’’ male connector from GE (Code No. 18-3858-01) can be used for this, for example.

 

FAQ ID -1606
How fast is the 6xHis-tagged protein purification process using Ni-NTA Superflow Cartridges?

A maximum of 1 hour is needed for the complete purification process with Ni-NTA Superflow Cartridges when recommended flow rates are applied. This is true for 1 ml and 5 ml cartridges.

Details for a typical 1 ml column run:

  • Equilibration (5 column volumes (cv)): 5 min
  • Load (10 ml Cleared Lysate): 10 min
  • Wash (10 cv): 10 min
  • Elution (10 cv): 10 min
  • optional: Cleaning-in-place (0.5 M NaOH, 0.5 ml/min, 7.5 cv): 15 min  
FAQ ID -1605
What is the binding capacity of the Ni-NTA Superflow Cartridges?

The binding capacity of Ni-NTA resins is protein dependent. We guarantee a binding capacity of up to 20 mg/ml of Ni-NTA Superflow for every 6xHis-tagged protein (up to 20 mg per 1 ml Ni-NTA Superflow Cartridge).

However, we have examples where the binding capacity is higher (e.g.: 6xHis-CAT: 30 mg/ml resin; 6xHis-GFP: 55 mg/ml resin).

  • Binding capacity for the 1 ml Ni-NTA Superflow Cartridge: 20 mg
  • Binding capacity for the 5 ml Ni-NTA Superflow Cartridge: 100 mg

 

FAQ ID -1603
Can the Ni-NTA and Strep-Tactin Superflow Cartridges be reused?

If the same protein is purified, the Ni-NTA and Strep-Tactin Superflow Cartridges can be used more than once. Cleaning in place (CIP) is recommended between purifications (0.5 M NaOH, 0.5 ml/min, 7.5 cv for 15 min).

However, for sequential purification of different proteins we recommend to use different cartridges. Please note that cartridges cannot be opened!

 

FAQ ID -1607