QIAGEN Plasmid Plus 96 Kits

Für die Aufreinigung von bis zu 50 µg transfektionsfähiger Plasmid-DNA im 96-Well-Format

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QIAGEN Plasmid Plus 96 Miniprep Kit (4)

Cat. No. / ID:  16181

Für 4 × 96 Plasmid-Minipräps: TurboFilter 96-Platten, Plasmid Plus 96-Platten, Puffer, Reagenzien, S-Blocks und Elutions-Mikroröhrchen; erfordert den Einsatz von QIAvac 96 und Elutions-Mikroröhrchen-Adapter (erhältlich beim Technischen Service von QIAGEN) oder ein für 96-Well-Blöcke geeignetes Zentrifugationssystem.
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QIAvac 96
BioRobot Universal
QIAGEN Plasmid Plus 96 Kits sind für molekularbiologische Anwendungen vorgesehen. Diese Produkte sind nicht zur Diagnose, Prävention oder Behandlung einer Erkrankung vorgesehen.

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Features

  • Plasmid-DNA in Transfektionsqualität mit Endotoxingehalt <1 EU/µg DNA
  • DNA-Reinheit vergleichbar mit der Anionenaustauschtechnologie
  • Hohe Ausbeute (bis zu 50 µg)
  • Bequeme Handhabung und einfaches Verfahren
  • Vakuum-, Zentrifugations- und automatische Verarbeitungsoptionen

Product Details

QIAGEN Plasmid Plus 96 Kits ermöglichen eine innovative Vorgehensweise für Plasmidpräparationen im 96-Well-Format. Die Proben können komfortabel mit dem QIAvac 96 und/oder einer Zentrifuge oder automatisiert mit dem BioRobot Universal System aufbereitet werden. Die proprietäre Bindungschemie ermöglicht die Gewinnung von bis zu 50 µg transfektionsfähiger Plasmid-DNA pro Vertiefung aus bis zu 5 ml einer E.-coli-Kultur. Die Endotoxinspiegel werden durch einen speziellen Puffer zur Endotoxinreduktion auf Werte unter 1 EU/µg DNA gesenkt.
Für optimale Ergebnisse wird empfohlen, dieses Produkt zusammen mit dem QIAvac 96 zu verwenden.

Performance

Gleichbleibend hohe Ausbeute an einsatzbereiter Plasmid-DNA

Die QIAGEN Plasmid Plus Technologie zeichnet sich durch die gleiche Leistung und Qualität aus wie die Anionenaustauschtechnologie. Es können hohe Ausbeuten von bis zu 50 µg transfektionsfähiger Plasmid-DNA erzielt werden (siehe Abbildung „ Hohe Ausbeute an Plasmid-DNA“).

Sehr niedrige Endotoxinspiegel

Die Kits enthalten einen Puffer zur Endotoxinreduktion, der bakterielle Endotoxine effektiv auf Spiegel von typischerweise unter 1 EU/µg DNA verringert und eine Plasmid-DNA-Qualität liefert, die sich für die Transfektion sensitiver Zelllinien eignet (siehe Abbildungen „ Sehr geringe Endotoxinspiegel“ und „ Hocheffiziente Transfektion in eine sensitive Zelllinie“).

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Principle

Die QIAGEN Plasmid Plus 96 Kits basieren auf der QIAGEN Plasmid Plus Technologie, einem einmaligen Verfahren zur Plasmidpräparation. Das Verfahren basiert auf einer nichtchaotropen Bindungschemie, die eine mit Anionenaustauschpräparationen vergleichbare Selektivität und DNA-Qualität gewährleistet. Nach der Lysatreinigung wird durch ein einfaches Binden-Waschen-Eluieren-Verfahren hochkonzentrierte Plasmid-DNA gewonnen, die direkt in nachfolgenden Anwendungen eingesetzt werden kann. Die einzigartige Kit-Chemie und der Aufbau der Plasmid Plus 96-Platten ermöglichen hohe Bindungskapazitäten.

Procedure

Dieses einzigartige Verfahren zur Plasmidpräparation im 96-Well-Format liefert hochreine transfektionsfähige Plasmid-DNA in einem einfachen Bind-Wash-Eluieren-Verfahren (siehe Flussdiagramm „ QIAGEN PlasmidPlus 96 Verfahren“).

Das QIAGEN Plasmid Plus 96 Miniprep-Protokoll beginnt mit einem modifizierten alkalischen Lyseverfahren. Nach der Neutralisierung werden die Lysate mit einer TurboFilter 96-Platte bereinigt. Zur Optimierung der Plasmid-DNA-Bindung an die Membran der Plasmid Plus 96-Platte wird dem bereinigten Lysat ein nichtchaotroper Bindungspuffer zugesetzt. Der einmalige Bindungspuffer bietet sehr spezifische Bindungsbedingungen, die zu einer mit Anionenaustauschpräparationen vergleichbaren DNA-Qualität führen. Ein Waschschritt mit einem Puffer zur Endotoxinreduktion führt zu transfektionsfähiger Plasmid-DNA, die sich für die Transfektion der meisten Zelllinien eignet (siehe Abbildung „ Hocheffiziente Transfektion einer sensitiven Zelllinie“). Die proprietäre Bindungschemie ermöglicht die Aufreinigung von bis zu 50 µg Plasmid-DNA pro Vertiefung aus einer E.-coli-Kultur von 5 ml (siehe Abbildung „ Hohe Ausbeute an Plasmid-DNA“).

Komfortable und flexible Handhabungsoptionen

Mit dem QIAGEN Plasmid Plus 96 BioRobot Kit auf dem BioRobot Universal System kann das Verfahren vollständig automatisiert werden. Wahlweise wird QIAvac 96 für die Lysatbereinigung mit der TurboFilter 96 Platte verwendet, und die DNA-Bindungs- und Waschschritte erfolgen mit der Plasmid Plus 96-Platte. Die Trocknungs- und Elutionsschritte können entweder mit QIAvac 96 oder mit einer kompatiblen Zentrifuge durchgeführt werden. Darüber hinaus lässt sich das gesamte Verfahren mit einer kompatiblen Zentrifuge abwickeln.

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Applications

Die mit den QIAGEN Plasmid Plus 96 Kits aufgereinigte Plasmid-DNA eignet sich hervorragend für eine Vielzahl von Anwendungen, darunter:

  • Transfektion, auch in sensitive Zelllinien
  • Präparation von Short-Hairpin-Vektoren (sh-Vektoren)
  • Enzymatische Modifikationen
  • Klonierung
  • Restriktionsaufschluss

Supporting data and figures

Specifications

FeaturesSpecifications
ApplicationsTransfektion in sensitive Zelllinien, Herstellung von Short-Hairpin-Vektoren (sh-Vektoren), enzymatische Modifikationen, Klonierung, Restriktionsaufschluss, Sequenzierung usw.
Time per run or prep per run50 Minuten
ProcessingQIAvac 96, Zentrifuge, automatisiert
Culture volume/starting material1,25–5 ml Kulturvolumen
TechnologyQIAGEN Plasmid Plus Technologie
Yield15–50 µg
Samples per run (throughput)48–96 Proben pro Lauf
Plasmid typeHigh-Copy, Low-Copy, Cosmid-DNA

Resources

Kit Handbooks (1)
Quick-Start Protocols (1)
Certificates of Analysis (1)

FAQ

3313 - What is the endotoxin level for the QIAGEN Plasmid Plus kits?

Endotoxin level of QIAGEN Plasmid Plus kits is in the range of 1 EU/µg DNA.

 

For the the QIAprep 96 Plus Miniprep Kit or the QIAGEN Plasmid Plus 96 Miniprep Kit, can plates be partially used?

For the manual procedure, the plates can be partially used. Any unused wells should be sealed with tape. For the BioRobot Universal procedure, the entire 96 sample plate must be used. However, different sized plates may be available from our applications lab.  Please contact QIAGEN Technical Service for more details. 

https://www.qiagen.com/contact/contacttechnicalservice.aspx?WT.svl=m

FAQ ID -2319
Which kit, the QIAprep 96 Plus Miniprep Kit or the QIAGEN Plasmid Plus 96 Miniprep Kit, do you recommend for transfection?
For sensitive cell lines and downstream assays, we recommend QIAGEN Plasmid Plus 96 Miniprep Kit, because the endotoxin value is below 1 EU/µg DNA.  The QIAGEN Plasmid Plus 96 MiniPrep kit contains a special protocol for endotoxin removal.  Combination of other chemistries (such as Buffer ER) is not possible with this kit.  For robust cell lines, the QIAprep 96 Plus Miniprep Kit may be okay, as the endotoxin values are below 10 EU/µg DNA.
FAQ ID -2320
3299-Can Buffer ER from the Endofree Plasmid kits be used instead of the Buffer ETR in QIAGEN Plasmid Plus kits?

No, the two buffers cannot be interchanged.  The QIAGEN Plasmid Plus chemistry is not compatible with Buffer ER from the Endofree Plasmid kits.

What is the maximum plasmid size which I can use with the QIAprep 96 Plus Miniprep Kit or the QIAGEN Plasmid Plus 96 Miniprep Kit?
The QIAprep 96 Plus Miniprep Kit and the QIAGEN Plasmid Plus 96 Miniprep Kit can be used for the purification of plasmids up to 40 kb.
FAQ ID -2316
Can the QIAprep 96 Plus Miniprep Kit or the QIAGEN Plasmid Plus 96 Miniprep Kit be used for low-copy number plasmids?
The QIAprep 96 Plus Miniprep Kit and the QIAGEN Plasmid Plus 96 Miniprep Kit can be used for the purification of low-copy plasmids.
FAQ ID -2317
Are the QIAprep 96 Plus Miniprep Kit or the QIAGEN Plasmid Plus 96 Miniprep Kit suited for short hairpin vectors?
Yes, the QIAprep 96 Plus Miniprep Kit or the QIAGEN Plasmid Plus 96 Miniprep Kit are suited for the plasmid purification of short hairpin vectors?
FAQ ID -2318