DNeasy mericon Food Kit

Für die Extraktion von hochwertiger DNA aus rohen oder verarbeiteten Lebensmitteln

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DNeasy mericon Food Kit (50)

Cat. No. / ID:  69514

50 QIAquick Spin Columns, Proteinase K, Puffer
227,00 €
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Das DNeasy mericon Food Kit ist für molekularbiologische Applikationen in der Testung von Lebens- und Futtermitteln sowie pharmazeutischen Produkten vorgesehen. Dieses Produkt ist nicht für die Diagnose, Prävention oder Behandlung einer Krankheit bestimmt.

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Eigenschaften

  • Modifiziertes CTAB-Verfahren ermöglicht schnellere Bearbeitung von Lebensmittelproben
  • Effiziente Aufreinigung sogar von fragmentierter DNA aus verarbeiteten Lebensmitteln
  • Keine Verschleppung von PCR-Inhibitoren aus komplexen Lebensmittelmatrizes
  • Protokolle für hochverarbeitete Lebensmittel

Angaben zum Produkt

Das DNeasy mericon Food Kit wurde für die Extraktion von hochwertigen Nukleinsäuren aus einer Vielzahl roher und verarbeiteter Lebensmittel entwickelt. Die Verschleppung von PCR-Inhibitoren aus diesen komplexen Lebensmittelmatrizes wird minimiert. Das Kit ist Teil des umfassenden Lebensmittel-Testportfolios von QIAGEN, zu dem auch Assays zum Nachweis von Pathogenen und GVO‑DNA sowie zur Authentifizierung von Inhaltsstoffen zählen. Das Verfahren kann auf dem QIAcube Connect vollständig automatisiert werden.

Leistung

Bei der Produktion sind Lebensmittel Hitze, Strahlung, hohem Druck sowie Veränderungen des pH-Werts ausgesetzt, was zu DNA-Abbau und -Fragmentierung führt. Die optimierte Chemie des DNeasy mericon Food Kit wurde für die Wiederfindung selbst kurzer DNA-Fragmente (bis nur 100 bp) entwickelt, was sicherstellt, dass auch stark fragmentierte DNA effizient isoliert und anschließend in der PCR amplifiziert wird. Durch diese Eigenschaften ist die Extraktion mit dem DNeasy mericon Food Kit die erste universell anwendbare Extraktionsmethode, die selbst bei der Arbeit mit stark inhibitorischen, hochverarbeiteten, fettigen und sauren Lebensmitteln sowie Lebensmitteln mit hohem oder niedrigem DNA-Gehalt optimale und zuverlässige Ergebnisse generiert (siehe Abbildung „Hohe DNA-Ausbeuten und minimale Verschleppung von Inhibitoren“ und Abbildung „Erhöhte Resistenz gegenüber Inhibitoren“). Darüber hinaus ist es nicht mehr nötig, mehrere Lyseverfahren für verschiedene Lebensmittelmatrizes zu etablieren.

Prinzip

Das DNeasy mericon Food Kit nutzt eine verbesserte Cetyltrimethylammoniumbromid(CTAB)-Extraktion der gesamten zellulären Nukleinsäuren.

Das nichtionische Detergens CTAB wird häufig für die effiziente Extraktion der gesamten zellulären Nukleinsäuren aus einem breiten Spektrum an Gewebetypen eingesetzt. Abhängig von den Salzbedingungen kann CTAB einen Komplex mit zellulären Nukleinsäuren (salzarme Bedingungen) oder einen Komplex mit zellulären Inhibitoren wie Polysacchariden, Proteinen und Pflanzenmetaboliten bilden (salzreiche Bedingungen wie im Food Lysis Buffer).

Mit weniger Workflow-Schritten als bei herkömmlichen CTAB-Protokollen können in 2,5 Stunden bis zu 30 Proben bearbeitet werden (siehe Abbildung „Effiziente und schnelle DNA-Extraktion“). Die DNA-Wiederfindung mit diesen Kits ist nachweislich hoch und effizient.

Verfahren

Die optimierten Protokolle für das DNeasy mericon Food Kit nutzen CTAB in Kombination mit Proteinase K, um zunächst das kompakte Gewebe zu verdauen und anschließend Proteine auszufällen, wobei gleichzeitig andere zelluläre und aus Lebensmitteln stammende Inhibitoren ausgefällt werden.

Inhibitoren werden durch Zentrifugation abgetrennt, während die extrahierte DNA in Lösung verbleibt. Bei der anschließenden Chloroform-Extraktion werden alle noch verbleibenden CTAB-Protein-, CTAB-Zelltrümmer- oder CTAB-Polysaccharid-Komplexe, die nicht ausgefällt wurden, zusammen mit anderen lipophilen Inhibitoren durch Extraktion in die organische Chloroform-Phase entfernt. Nur die wässrige Phase, die DNA und eine signifikant depletierte Inhibitorfraktion enthält, wird weiter verarbeitet. Diese Phase wird mit Bindungspuffer gemischt (zur Einstellung der Bindungsbedingungen) und auf QIAquick Spin Columns aufgetragen. Die resultierende DNA ist sofort einsatzbereit für einen nachgelagerten mericon Real-time PCR-Assay.

Anwendungen

Das DNeasy mericon Food Kit wurde für die schnelle (bis zu 30 Extraktionen in 2,5 Stunden) Aufreinigung von DNA aus einer Vielzahl von rohen und verarbeiteten Lebensmittelmatrizes bei Minimierung der Verschleppung von in komplexen Lebensmittelproben enthaltenen PCR-Inhibitoren entwickelt.

Ergänzende Daten und Abbildungen

Ressourcen

Kit Handbooks (1)
Safety Data Sheets (1)
Certificates of Analysis (1)

FAQ

Why is my 260/280 ratio low after using the DNeasy mericon Food Kit?
With complex food samples, a classical evaluation of DNA purity and protein content by A260/A280 ratio is not a significant criterion. Due to inevitable traces of food matrix in the sample background, a spectroscopic evaluation of DNA or protein absorptions is highly unreliable, and we have found that there is not a correlation between 260/280 and 260/230 ratios and PCR performance. Even DNA with Low 260/280 and 260/230 can produce good PCR results.

FAQ ID - 3349
Does salt concentration in the food matter when using the DNeasy mericon Food Kit?
We have not observed any effect of NaCl concentration in the food on the effectiveness of the DNeasy mericon Food Kit.
FAQ ID - 3346
CAn I use milk or other liquids with the DNeasy mericon Food kit? What volume would I use?
Liquids can be used. Use 2 ml (for 2 g protocol) or 200 ul (for 200 mg protocol) and mix it with the Food Lysis Buffer and Proteinase K solution as in the normal protocol.
FAQ ID - 3350
Why does the DNeasy mericon Food Kit use a QIAquick column and Buffer PB rather than a DNeasy column and Buffer AL, which might be expected since the kit isolates genomic DNA?
During kit development, we determined that with the chemistry used in the kit and the tested sample material, the QIAquick column together with the buffer PB had the best performance.
FAQ ID - 3347