S_1125_9_TAGZyme_DAPase_Enzyme
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TAGZyme DAPase Enzyme (2.5 U)

Cat. No. / ID:  34362

およそ50 mgのタグタンパク質の処理では:2.5単位のDAPase Enzyme、20 mM Cysteamine-HCl (1 mL)
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$645.00
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EnzymeVector
TAGZyme Enzyme
TAGZyme pQE Vector
Quantity
2.5 U (1 mL)
50 U (25 mL)
TAGZyme Systemは分子生物学的アプリケーション用であり、疾病の診断、予防、あるいは治療に使用することはできません。
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Features

  • TAGZyme酵素による除去のために最適化された発現Hisタグ
  • 37°Cでわずか30分で95%を超える効率的なHisタグ除去
  • N末端Hisタグ付加タンパク質が高レベルで発現
  • 高純度の最終産物
  • Ni-NTA法による混入物質の完全な除去

Product Details

TAGZyme Enzyme DAPaseには、最大10 mgのHisタグタンパク質から特異性が高い効率的な方法でHisタグを除去するための十分な酵素が含まれます。TAGZymeシステムは、TAGZyme pQE-2ベクターを使用して、発現する固有のDAPaseストップポイントを含むタンパク質からHisタグを除去するために使用できます。

Performance

TAGZyme DAPase Enzymeは、TAGZyme pQE-2ベクターを使用して、発現するN末端のHisタグから、「ストップポイント」まで連続して効率的にジペプチドを除去します。

Principle

Hisタグ遺伝子組換えタンパク質は、タンパク質の構造や機能の研究において重要なツールとなっています。Hisタグのサイズが小さく、免疫性が低いことは、その除去が通常は必要ないことを意味します。しかし、X線またはNMRによる構造決定研究、または治療薬の生産など、いくつかのアプリケーションには、ベクター由来のアミノ酸のないタンパク質産物が好まれます。

TAGZyme pQE-2ベクターは、固有のDAPaseストップポイントを含むタンパク質に適しています。 

TAGZymeシステムは、遺伝子組み換えタンパク質から、高特異的で効率的な方法でN末端のHisタグを除去します。DAPase酵素を使用して、精製されたHisタグタンパク質のN末端からジペプチドを連続して切り離します(図  「Hisタグの除去」”を参照)。酵素が“ストップポイント”、すなわち基質として機能できないアミノ酸モチーフに達したとき、消化は停止します(表 「DAPaseのストップポイント」を参照)。

DAPaseストップポイント

アミノ酸 DAPaseストップポイント(↓)配列*
リシン(Lys、K) Xaa-Xaa...Xaa-Xaa ↓ Lys-Xaa...
アルギニン(Arg、R) Xaa-Xaa...Xaa-Xaa ↓ Arg-Xaa...
プロリン(Pro、P) Xaa-Xaa...Xaa-Xaa ↓ Xaa-Xaa-Pro-Xaa...
プロリン(Pro、P) Xaa-Xaa...Xaa-Xaa ↓ Xaa-Pro-Xaa-Xaa...
グルタミン(Gln、Q)† Xaa-Xaa...Xaa-Xaa ↓ Gln-Xaa...
イソロイシン(Ile、I) Xaa-Xaa...Xaa-Xaa ↓ Xaa-Ile-Xaa-Xaa...
See figures

Procedure

固有のストップポイントを含む遺伝子組み換えタンパク質では、TAGZyme pQE-2 vectorベクターを使用した発現により、DNAインサートのクローン化した部位に関係なく、N末端のHisタグを完全にかつ効率的に除去することができます(図  「Hisタグの除去」を参照)。DAPase酵素と共にインキュベートした後、反応混合物は、Ni-NTAマトリックスを使用した減法固定化金属アフィニティクロマトグラフィー(IMAC)で処理します(図  「タグ除去されたタンパク質の精製」を参照)。HisタグフラグメントとTAGZyme DAPase Enzyme(C末端に6xHisタグのある)はマトリックスに結合し、純粋なタグ除去済みの標的タンパク質がフロースルー分画に回収されます。

See figures

Applications

TAGZymeシステムは、特異的な開裂を生じさせ、遺伝子組み換え試薬を使用し、混入物質全てを完全に除去するため、以下を含むアプリケーションのためのHisタグフリータンパク質を産生するのに最適な方法です。

  • NMRまたはX線結晶構造解析によるタンパク質の構造決定
  • 治療用タンパク質の産生

Supporting data and figures

Resources

セレクションガイド (1)
Vector Sequences & Maps (2)
For the pQE-1 vector
For the pQE-2 vector
Package Insert (1)
MSDS (1)
Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
キットハンドブック (1)
TAGZyme Handbook
PDF (2MB)
For exoproteolytic cleavage of N-terminal His tags
Certificates of Analysis (1)
Kit Handbooks (1)
TAGZyme Handbook
PDF (2MB)
For exoproteolytic cleavage of N-terminal His tags
Selection Guides (1)

Publications

Production and comprehensive quality control of recombinant human Interleukin-1beta: a case study for a process development strategy.
Block H; Kubicek J; Labahn J; Roth U; Schäfer F;
Protein Expr Purif; 2007; 57 (2):244-54 2007 Oct 17 PMID:18053740

FAQ

Is it possible to cleave the 6xHis-tag from an expressed protein?

Yes. In order to cleave off an N-terminal 6xHis tag, a protease cleavage site must be inserted between the coding sequences of the tag and the N-terminus of the protein. Factor Xa Protease recognizes the amino acid sequence Ile-Glu-Gly-Arg and cleaves the peptide bond C-terminal of the arginine residue. The expression vector pQE-30 Xa encodes a Factor Xa Protease recognition site between the N-terminal 6xHis-tag sequence and the multiple cloning site.

If the gene of interest is cloned blunt ended at the 5´-end using the StuI restriction site of the vector, Factor Xa Protease cleavage of the purified recombinant protein results in a protein product without any vector-derived amino acids at the N-terminus.

Tags can also be removed exoproteolytically using the TAGZyme System. This system is an efficient and specific solution for the complete removal of small N-terminal His tags and other amino acid tags by the use of exopeptidases. For detailed information on the procedure please review the TAGZyme handbook.

Please note that both tag removal options work on N-terminal 6xHis tags only.

 

 

FAQ ID -140
Does endogenously expressed DAPase in human cells degrade proteins that are expressed in cell culture?
DAPase (dipeptidyl aminopeptidase I = Cathepsin C), even though endogenously expressed in human tissues and cells, will have only a negligible effect on the degradation of proteins expressed in cell culture. The reason for this is the low level of endogenous DAPase compared to the much higher level of typically overexpressed recombinant protein. However, it is always worthwhile to run a time-course expression experiment to check for possible protein degradation, since proteases and peptidases tend to degrade proteins over time.
FAQ ID -527
How complete is the removal of DAPase in the TAGZyme process?
The removal of DAPase is >99%.
FAQ ID -319
What are the calculated molecular weights of the TAGZyme enzymes?
DAPase: heterodimer, 24 kDa and 6 kDa subunit; Qcyclase: 35 kDa; pGAPase: 28 kDa
FAQ ID -329
Is it possible to store TAGzyme enzymes at°C?
Yes. The TAGzyme enzymes do not experience any loss in function after several freeze and thaw cycles. However, storage at -80°C is not necessary as storage at -20°C is adequate.
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