Certal Residual DNA Detection Kits

残留するCHO宿主細胞DNAをプローブベースで高感度に検出、インターナルコントロールを含む

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Certal CHO Detection Kit (100)

Cat. No. / ID:  211822

For 100 x 25 µl reactions: 1.25 ml Certal Residual DNA PCR Master Mix, Certal Internal Control DNA and Assay, CHO DNA Positive control and CHO-Assay, 100 µl Uracil-N-Glycosylase, 210 µl High-ROX Dye Solution, 210 µl ROX Dye Solution, Nucleic Acid Dilution Buffer, TE Buffer
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$2,048.00
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The Certal Residual DNA Detection Kits are intended for molecular biology applications in pharmaceutical product testing. These products are not intended for the diagnosis, prevention, or treatment of a disease. See trademarks.

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Features

  • 優れた再現性で低い定量限界
  • 広い直線性領域
  • 信頼性と精度の高いインターナルコントロール
  • 様々なリアルタイムサイクラーに最適化されたプロトコール
  • インターナルコントロールとポジティブコントロールを含む完全キット

Product Details

バイオ医薬品を扱う際に、宿主細胞からの残留DNAなどの夾雑物が混在していないことを保証するために、最終的な治療材料を評価することが不可欠です。Certal Residual DNA Detection Kitは、二重標識された加水分解(またたTaqManとしても知られる)用プローブを用いて、残留した宿主細胞ゲノムDNAの高感度で迅速なリアルタイム定量PCR用に設計されています。Certal CHO Detection Kitには、残留したCHO宿主細胞DNAとさらにCertal Internal ControlのduplexリアルタイムPCR検出のための試薬が含まれています。キットはまた、CHO宿主細胞DNAからのシグナルがない状態でPCRアッセイの機能性を検証するCertal Residual DNA Positive Control、またほとんどののリアルタイムPCR装置での使用を可能にするROX passive reference dyeが2種類の異なる濃度で入っています。

Performance

Certal Residual DNA Detection Kitは、安全かつ信頼性の高いバイオ医薬品の生産のために不可欠である残留ゲノムDNA(gDNA)を高い感度と信頼性で検出・定量できます(図 “  高感度で信頼性の検出"を参照”)。Certal CHO Detection Kitは、CHO(Chinese Hamster Ovary)細胞からの残留gDNAを低い検出限度と高い直線性で検出し、微量の残留gDNAでさえ高い信頼性で検出できます。(図 “ 低い検出限界”)。Certal Residual DNA Detection Kitは広範なサイクラーで使用でき、感度と信頼性の高いデータを提供します(“ 様々なサイクラーで感度と信頼性の高い検出”および“ Rotor-Gene QでCHOゲノムDNAの感度と信頼性の高い検出”)。

プロセスの高い安全性を確保するため、Certal Residual DNA Detection Kitは、特に陰性結果を正確に解析し、ターゲットアッセイを妨害しないように設計されたQIAGEN Internal Controlが含まれています。QIAGEN Internal ControlがゲノムDNAと一緒に増幅されると高い信頼性で検出されます(図“  QIAGEN Internal Controlの信頼性の高い検出”)。

See figures

Principle

バイオ医薬品を製造するために使用される宿主細胞株から混入物質がないことを最終的な治療材料で確認するために、Certal Residual DNA Detection Kitは、特にCHO宿主細胞DNAを検出するようにあらかじめデザインされたアッセイを提供します。各Certal Residual DNA Assayは最適化されたプライマーペア及びFAM標識加水分解プローブで構成され、残留CHOゲノムDNAの信頼できる検出を実現します。ヒトのバックグランドDNAおよびCertal Internal Control DNAはCertal Residual DNA Assayを妨害しません。

混和済みCertal Internal Control Assayは、Certal Internal Control DNA検出のためのforwardおよびreverseプライマーとMAX標識加水分解プローブを含んでいます。これは特に、Certal Residual DNA Assayを妨害しないように最適化されています。Certal Residual DNA Positive Control は、増幅反応自体の機能をテストすることによって、陰性結果を正しく解釈することができます。

Certal ResDNA PCR Bufferは感度と信頼性の高いduplex リアルタイム定量PCR結果を提供するために最適化されています。マスターミックスはまたdUTPを含み、PCR 開始前にUNG(uracil-N-glycosylase) で前処理することにより、PCR 増幅産物のコンタミは分解され、続いて行なうPCR に影響を与えません。

Certal Residual DNA Detection Kit成分
成分 特長 利点
Certal Residual DNA Assays およびコントロールDNA
50x Certal Residual DNA Assay デザイン済み、至適化済み、検証済みのプライマープローブセット(FAM標識) 残留したCHO宿主細胞DNAの信頼できる検出
Certal Residual DNA Positive Control Certal Residual DNA Assayにより増幅されるポジティブコントロールDNA サンプル中に残留した宿主細胞DNAが検出されない場合に、Certal Residual DNA Assayが正しく作動していることを検証
50x Certal Internal Control Assay Certal Internal Control DNA検出用にデザイン済み、至適化済み、検証済みのプライマー・プローブセット(MAX 標識) Certal Internal Control DNAのみの特異的な検出。Certal Residual DNA Assayを妨害しないように最適化
Certal Internal Control DNA Certal Internal Control Assayにより増幅されるInternal Control DNA PCR阻害物質の存在を排除または精製ステップ中に添加された場合は精製および増幅のコントロールに使用可能
Certal ResDNA PCR Master Mix
HotStarTaq DNA Polymerase    95℃、15分の活性化 室温での定量PCRのセットアップ
Certal ResDNA PCR Buffer KClおよび(NH42SO4 イオンのバランスのとれた組み合わせ 特異性の高いプライマーのアニーリングで信頼性の高いPCR結果
合成添加剤Factor MP 同一チューブ中の最高4遺伝子を高い信頼性でマルチプレックス解析
dNTPミックス 一部dTTPの代わりにdUTPを含むので、オプションのUNG処理が可能 Uracil-N-glycosylase(UNG) で前処理することにより、PCR 産物の混入を効率的に排除
追加の成分
50x ROX Dye Solution Applied Biosystems 7500リアルタイムPCR装置での蛍光補正用にpassive reference dye が別途包装。オプション:AgilentのStratagene 装置で使用可能 ROX色素が必要なサイクラーで正確な定量。どのリアルタイムサイクラーでのPCRを妨害しない
50x High-ROX Dye Solution Applied Biosystems 7900およびStepOneリアルタイムPCR装置での蛍光補正用にpassive reference dye が別途包装
Uracil-N-Glycosylase(UNG) 高純度なヌクレアーゼフリーの組み換え酵素(別チューブ) PCR 産物の混入を効率的に排除
QuantiTect Nucleic Acid Dilution Buffer 核酸スタンダードの希釈および保存に最適な独自のバッファー組成 希釈や反応セットアップ中のRNAやDNAスタンダードを安定化し、チューブやピペットチップのようなプラスチック表面への核酸の吸着を防止
Certal Residual DNA Detection Kitには、凍結乾燥されたアッセイの溶解用にBuffer TEとRNaseフリー水 が入っています。

Procedure

Certal Residual DNA Detection Kitは、宿主細胞のDNA、Certal Internal Control、及びCertal Residual DNA Positive Controlを検出するための簡単な操作を提供します(図“  Certal Residual DNA Detection Kit 操作手順”)。Certal Residual DNA Assay、Certal Internal Control Assay、およびCertal Internal Control DNAをマスターミックスと混和し、その後、DNAサンプルまたはCertal Residual DNA Positive Controlを追加混和します。本キットのハンドブックには様々なサイクラーで使用可能な至適化ずみプロトコールが入っています。ROXは2種類の濃度でお届けし、ほとんどのリアルタイム装置で使用可能です(表“適切なROXの濃度の選択”)。

適切なROX濃度の選択
ROX Dye Solution
装置 不要 ROX Dye Solution High-ROX Dye Solution
Rotor-Gene Q X
Rotor-Gene 6000およびRotor-Gene 3000 X
Applied Biosystems 7500, ABI ViiA7 X
Applied Biosystems 7900HT, StepOne and StepOne Plus, ABI PRISM 7700, 7000 and 7300 X
Mx3000P, Mx3005P, Mx4000 X オプション
iCycler iQ System X
LightCycler 480 X
See figures

Applications

Certal Residual DNA Detection Kitは、配列特異的なプローブを使用した高感度リアルタイムPCRにより、インターナルコントロールを含む宿主細胞DNAの検出を実現します。本キットはQIAGEN、Applied Biosystems、Bio-Rad、Roche、Agilentなど様々なリアルタイム用サーマルサイクラー上で使用できます。

Supporting data and figures

Resources

クイックスタートプロトコール (1)
MSDS (1)
Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
キットハンドブック (1)
For sensitive real-time PCR detection of residual host cell DNA and an internal control using sequence-specific probes
Safety Data Sheets (1)
Certificates of Analysis (1)
Kit Handbooks (1)
For sensitive real-time PCR detection of residual host cell DNA and an internal control using sequence-specific probes
Quick-Start Protocols (1)

FAQ

Can the Certal CHO Positive Control DNA be used to create a qPCR standard for relative quantification?
For quantification, it is recommended that a gDNA standard from your production cell be prepared using, for example, the QIAamp DNA Mini Kit. The positive control provided with Certal Residual DNA Detection Kits is not suitable for use as a qPCR standard for relative quantification.
FAQ ID -2979
How many freeze-thaw cycles can the Internal Control supplied with Certal Residual DNA Detection Kits tolerate?

The Internal Control supplied with Certal Residual DNA Detection Kits can be freeze-thawed up to 6 times without a decrease in performance. However, great care should be taken to avoid inadvertently introducing RNases or DNases into the Internal Control template solutions. In general, in order to avoid repeated freeze-thaw cycles, we recommend preparing aliquots of the Internal Control template.

Note:  The Internal Control supplied with Certal Residual DNA Detection Kits cannot be ordered separately

FAQ ID -2975
On which cyclers can Certal Residual Detection Kits be used?
Certal Residual Detection Kits can be used on virtually any real-time cycler. The master mix supplied with the Kits does not contain ROX. Instead, 2 different ROX concentrations are supplied in separate tubes. “High-ROX Dye Solution” is for use with all Applied Biosystems cyclers except the Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR Systems and the ViiA7 System, and “ROX Dye Solution” is for use with the Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR Systems, the ViiA7 System, and, optionally, instruments from Agilent. Recommendations are provided in the handbook (page 11).
FAQ ID -2973
What is the label of the probe that is used in the Internal Control Assay to detect the Internal Control supplied with Certal Residual DNA Detection Kits?
The probe is labeled with the MAX-NHS ester (MAX) reporter dye, which has a spectrum equivalent to HEX, JOE, or VIC dyes. IowaBlack is used as the quencher dye. IowaBlack is a non-fluorescent quencher (dark quencher).
FAQ ID -2976
If a cycler from Applied Biosystems is used in combination with the Certal Residual DNA Detection Kit, should dye calibration for MAX be performed?

No, calibration is required if the instrument is already calibrated for VIC (which is normally the case). Simply create a new detector, for example, “MAX/IowaBlack”, and assign VIC as the reporter dye and “none” as the quencher (Table 3, page 17 of the Certal Residual DNA Detection Kit handbook describes the procedure in the footnote). 

MAX spectrum is nearly identical to VIC and the requirement for calibration has been thoroughly tested. There is no risk of crosstalk from the VIC channel to the FAM channel. However, crosstalk may occur from the FAM channel to the VIC channel if the pathogen target is present in very high copy numbers. Although this may slightly change the signal for the Internal Control, if a positive signal is detected in the FAM channel, then the Internal Control signal is no longer required.

FAQ ID -2977
On what cyclers have Certal Residual DNA Detection Kits been validated?
Certal Residual DNA Detection Kits have been validated on the Rotor-Gene Q and the Applied Biosystems 7900HT Fast Real-Time System.
FAQ ID -2978
Is there a risk of crosstalk from the FAM channel to the VIC channel if the residual DNA target is present in very high copy numbers?
Usually the amount of gDNA in process samples is low, for example, in the ng range or even lower. Therefore, no crosstalk is expected.
FAQ ID -2980
What is the nature and target of the Internal Control supplied with Certal Residual DNA Detection Kits?

The Internal Control supplied with Certal Residual DNA Detection Kits is a non-linearized plasmid (naked nucleic acid).

The Internal Control supplied with Certal Residual DNA Detection Kits has an artificial sequence that is not present in biological sample material.

FAQ ID -2974