REPLI-g Cell WGA & WTA Kit

• ゲノムDNAおよびRNA（トータルあるいはmRNA濃縮）の同時増幅
• ゲノム状態と転写パターンの関連付けを容易に実現
• MDA テクノロジーによるバイアスの無い増幅
• 細胞あるいは組織からgDNAおよびRNAを直接増幅
• NGSを含む様々なダウンストリームアプリケーションに使用可能

REPLI-g Cell WGA & WTA Kitは均一な全ゲノム増幅（WGA）および全トランスクリプトーム増幅（WTA）を同時に実現し、微量サンプル（25～1000個の細胞）を用いてゲノムとトランスクリプトームを直接関連づけることができます。専用のバッファーおよび試薬は、混入核酸の制御された除去を行ない、REPLI-g法による混入核酸の増幅をブロックします。革新的な溶解バッファーは効果的に細胞核酸を安定化し、ゲノムDNAおよびRNAレベルの両方を正確に提示します。ゲノムDNAおよびトータルRNAあるいはmRNA（poly A+）のバイアスのない増幅は、画期的なMultiple Displacement Amplification（MDA）テクノロジーと斬新なREPLI-g SensiPhi DNA Polymeraseにより行なわれます。PCRベースの増幅テクノロジーとは対照的に、ハイフィデリティー率は1000倍にまで増大し、コストのかかる偽陽性あるいは偽陰性結果を回避できます。

実験によるばらつきが低く、全トランスクリプトームをカバー

微量サンプルのゲノムおよびトランスクリプトームプロファイルの解析に最適

様々な研究分野で使用可能

REPLI-g Cell WGA & WTA Kitのユニークな成分

• キットに含まれる全ての酵素および増幅用成分は、ユニークで制御された混入核酸除去操作を行ない、REPLI‑gで増幅可能なDNAまたはRNAのコンタミを排除します。このプロセスに続いて、キットの完全な機能性を確実にするために厳格な品質管理が実施されます。
• ユニークな溶解バッファーは、細胞RNAおよびDNAを効果的に安定化させます。これにより、得られたRNAがin vivoでの遺伝子発現プロフィールを正確に反映し、RNAおよびDNAはインタクトのままで、続く解析のためのゲノムカバレッジを最大にします。
• すべての酵素反応工程は、正確な増幅のためにRNAあるいはDNAを効率的に処理できるように特別に開発されました。たとえば、これらのプロセスにはRNA増幅のためにcDNA合成前の効率的なgDNA除去および効率的なDNA増幅を確保する酵素によるDNA調製が含まれます。
• 画期的なREPLI-g SensiPhi DNA PolymeraseがMultiple Displacement Amplification（MDA）に使用されています。これは新しく開発された高アフィニティー酵素であり、反応ミックスにおけるDNA濃度が低い時に特に効率的にDNAに結合します。さらに、PCRをベースにした方法とは対照的に、REPLI-g SensiPhi DNA Polymeraseは、高いプルーフリーディング活性を有しており、取り込みエラーが1/1000になります。この酵素は強力な鎖置換活性も有し、Taqを用いた全ゲノムおよび全トランスクリプトーム増幅方法では作用しない安定したヘアピン構造からもDNAの複製が可能です。

• 細胞溶解：シングルセルサンプル（25〜1000個の細胞を含む）は5分以内に効率的に溶解され、RNAあるいはDNAの完全性に影響を与えません。溶解した細胞を等量に二等分します。最初の溶液はWGAに、残りの溶液はトータルRNAあるいはmRNA—濃縮（poly A+）RNAのWTAに使用します。
• 全ゲノム増幅: 細胞溶解に続いて、分注した一つ溶液のDNAを、高効率のライゲーションのためにモディファイします。ライゲーション反応の特性により、DNAフラグメントは生体内で元々存在していた順序ではライゲートされていません。しかし、このことは、NGS、アレイ解析、qPCRなどのダウンストリームアプリケーションでの核酸配列の検出（例、多型）には影響しません。ライゲーションの後、MDAテクノロジーと斬新な高アフィニティーREPLI-g SensiPhi DNA Polymeraseにより増幅が行なわれます。
• 全トランスクリプトーム増幅：転写レベルの正確な測定は、gDNAコンタミによる偽陽性結果の排除にかかっているため、細胞溶解の後、WTAを開始する前に2番目の溶液からgDNAを除去します。高効率のライゲーションと増幅のためのcDNAを調製します。その後の逆転写反応用に選択したプライマーにより、トータルRNA濃縮では全転写産物、poly A+ mRNA濃縮ではポリアデニル化転写産物のみが増幅されます。

REPLI-g Cell WGA & WTA Kitは微量サンプルからの全転写産物とゲノム領域の均一な増幅を並行して行ないます。キットを用いて並行して増幅されたgDNAとcDNAは、次世代シークエンシング（DNA-Seqおよび RNA-Seqの両方*）、アレイ、ジェノタイピング・アプリケーション、または定量PCRを用いた解析に最適です。

REPLI-g Cell WGA & WTA Kitは以下の増幅に最適です：

トランスクリプトーム（RNA）：

• poly A+ tailをもつmRNA
• トータル RNA
• RNA転写全領域
• mRNAの3’ 末端
• Lncおよびlinc RNA

ゲノム（DNA）:

• ゲノムDNA
• ミトコンドリアDNA

小さい核酸には適していません（例）：

• tRNAおよびmiRNA
• 分解の激しいDNAあるいはRNA

* 次世代シークエンシングを行なう場合、90％以上のリードがrRNAに由来することに留意してください；したがってトータルRNAの増幅後、全トランスクリプトームシークエンシングを実施する際に充分なリードが得られなければなりません。mRNA濃縮（poly A+）RNAを増幅する際には、反応からランダムプライマーを排除することによりrRNAの増幅は起きません。