MinElute Reaction Cleanup Kit

酵素反応液から最高5 µgまでのDNA(70 bp~4 kb)クリーンアップ用

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MinElute Reaction Cleanup Kit (50)

Cat. No. / ID:  28204

50 MinElute Spin Columns, Buffers, Collection Tubes (2&nbsp:ml)
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¥18,000
Preparations
50
250
MinElute Reaction Cleanup Kitは分子生物学的アプリケーション用であり、疾病の診断、予防、あるいは治療に使用することはできません。

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Features

  • 最小限の溶出量
  • 迅速な操作と容易な取り扱い
  • 再現性のある高い回収率
  • ゲル解析をより簡便化するGelPilot Loading Dye付き

Product Details

MinElute Reaction Cleanup Kitは、スピンカラム、バッファー、コレクションチューブにより構成され、シリカメンブレンによりDNA(70 bp~4 kb)を酵素反応液から精製します。スピンカラムは微量(わずか10 µl)で溶出できるようにデザインされているので、高濃度のDNAが高収量で得られます。pH指示薬入りバッファーにより、DNAがスピンカラムに結合する最適なpHを簡単にチェックできます。本キットはQIAcubeで完全自動化が可能です。MinEluteシステムで精製したDNAフラグメントはシークエンシング、マイクロアレイ解析、ライゲーション、トランスフォーメーション、制限酵素解析、標識反応、マイクロインジェクション、PCR、in vitro転写反応のような幅広いアプリケーションに直接使用できます。

Performance

MinElute Reaction Cleanup Kitで、酵素反応液から最高5 µg のDNA(70 bp~4 kb)が確実にクリーンアップされますので、様々なアプリケーションに適したDNAが高収量で得られます。本キットは、酵素反応液のクリーンアップに使用するスピンカラムを備えています。マイクロ遠心機または吸引マニホールドを使用すれば、高濃度なDNAフラグメント(70 bp~4 kb)が迅速に得られます(4 kb以上のDNAフラグメントはQIAquick Systemを用いて精製)。

MinElute Reaction Cleanup Kit を用いて除去される酵素例
タンパク質 酵素サブユニットあたりの分子量(kDa)
DNA ポリメラーゼ I 109
クレノウフラグメント 62
仔ウシ腸アルカリ性ホスファターゼ 69
T4 DNAリガーゼ 55
T4ポリヌクレオチドキナーゼ 35
ターミナルトランスフェラーゼ 32
DNase I 31
各種制限酵素 酵素により異なる

Principle

MinElute Reaction Cleanup Kitでは、高塩濃度バッファーによりDNAを結合し、低塩濃度バッファーあるいは水によりDNAを溶出するシリカゲルメンブレン を利用しています。この精製法でDNAサンプルからプライマー、ヌクレオチド、酵素、ミネラルオイル、塩、アガロース、臭化エチジウム、およびその他の夾雑物が除去できます。シリカメンブレンテクノロジーにより樹脂漏れ、および懸濁液関連の問題や不便さが解消されます。幅広い用途に応じて至適化された結合バッファーにより、種々のサイズのDNAフラグメントを選択的に吸着します。

Gel Loading Dye

より迅速で簡便なサンプル処理と解析を実現するため、ゲル電気泳動用のローディング色素が付いています。GelPilot Loading Dye は3 種類のマーカー色素(xylene cyanol、bromophenol blueおよびorange G)が入っており、短いDNAフラグメントのゲルからの流出を回避でき、アガロースゲルの泳動時間の至適化が簡単に行なえます(図 " GelPilot Loading Dye")。

See figures

Procedure

MinEluteシステムでは結合-洗浄-溶出という簡単な操作だけでDNAのクリーンアップが可能です(フローチャート" MinElute操作手順"参照)。結合バッファーをPCRサンプルあるいは他の酵素反応液に直接添加し、混合液をMinElute Spin Column にアプライします。ゲル切片をpH指示薬を含んだバッファーに溶解させると、DNA 結合の至適pH を容易に決めることができます(図  “pH指示薬”)。DNAは添付のバッファー中の高塩濃度の条件下でシリカゲルメンブレンに吸着します。不純物は洗い流され、純粋なDNAを添付の低塩濃度溶出バッファー、あるいは水で溶出します。得られたDNAは、その後のアプリケーションに即使用可能です。

操作法

MinElute Spin Column は2つの簡便な操作法オプションのためにデザインされました(フローチャート" MinElute操作手順")。スピンカラムは簡便な卓上型マイクロ遠心機あるいはQIAvac 24 Plus や QIAvac 6S のようなルアーコネクター付き吸引装置で使用できます。MinElute Reaction Cleanup Kitは他のQIAGENスピンカラムを利用したキット同様にQIAcubeでの完全自動化が可能で、標準化された再現性の高い結果が得られます(図 "Spin Column操作オプション A B C D、および E")。

See figures

Applications

MinEluteシステムで精製したDNAフラグメントは以下のようなアプリケーションに即使用可能です。

  • シークエンシング
  • マイクロアレイ解析
  • ライゲーションやトランスフォーメーション
  • 制限酵素分解
  • 標識反応

Supporting data and figures

Resources

MSDS (1)
Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
クイックスタートプロトコール (1)
Certificates of Analysis (1)

Publications

Oncocytic change in pleomorphic adenoma: molecular evidence in support of an origin in neoplastic cells.
Di Palma S; Lambros MB; Savage K; Jones C; Mackay A; Dexter T; Iravani M; Fenwick K; Ashworth A; Reis-Filho JS;
J Clin Pathol; 2006; 60 (5):492-9 2006 Feb 7 PMID:16467165
Similarity and differences in the Lactobacillus acidophilus group identified by polyphasic analysis and comparative genomics.
Berger B; Pridmore RD; Barretto C; Delmas-Julien F; Schreiber K; Arigoni F; Brüssow H;
J Bacteriol; 2006; 189 (4):1311-21 2006 Dec 1 PMID:17142402
Chromosome Conformation Capture Carbon Copy (5C): a massively parallel solution for mapping interactions between genomic elements.
Dostie J; Richmond TA; Arnaout RA; Selzer RR; Lee WL; Honan TA; Rubio ED; Krumm A; Lamb J; Nusbaum C; Green RD; Dekker J;
Genome Res; 2006; 16 (10):1299-309 2006 Sep 5 PMID:16954542
Quantitative proteomics of the archaeon Methanococcus maripaludis validated by microarray analysis and real time PCR.
Xia Q; Hendrickson EL; Zhang Y; Wang T; Taub F; Moore BC; Porat I; Whitman WB; Hackett M; Leigh JA;
Mol Cell Proteomics; 2006; 5 (5):868-81 2006 Feb 17 PMID:16489187
RAISE: a simple and novel method of generating random insertion and deletion mutations.
Fujii R; Kitaoka M; Hayashi K;
Nucleic Acids Res; 2006; 34 (4):e30 2006 Feb 21 PMID:16493137

FAQ

Are Buffer PB of the QIAquick PCR Purification Kit and Buffer QG of the QIAquick Gel Extraction Kit interchangeable?

Buffer PB of the QIAquick PCR Purification Kit cannot be used to extract DNA from agarose gels. However, Buffer QG of the QIAquick Gel Extraction Kit can be used to remove salt and proteins from enzymatic reactions by adding 3 volumes of Buffer QG and 1 volume of isopropanol to the reaction and proceeding with step 6 of the Gel Extraction Spin Protocol in the QIAquick Spin Handbook. See the QIAquick Spin Handbook for a list of reactions which can be cleaned up with the various QIAquick kits.

FAQ ID -786
I received a kit containing the MinElute columns; however, they were left out for a while and not stored at 2–8°C upon receipt. Can I still use them?

The MinElute spin columns included in the following kits should be stored at 2–8°C upon arrival: AllPrep DNA/RNA Micro, EpiTect Fast DNA Bisulfite, EpiTect Fast FFPE Bisulfite, EpiTect Fast LyseAll Bisulfite, EpiTect Plus DNA Bisulfite, EpiTect Plus FFPE Bisulfite, EpiTect Plus LyseAll Bisulfite, exoRNeasy Serum/plasma Maxi, exoRNeasy Serum/Plasma Midi, GeneRead DNA FFPE, GeneRead rRNA Depletion, GeneRead Size Selection, MinElute Gel Extraction, MinElute PCR Purification, MinElute Reaction Cleanup, miRNeasy FFPE, miRNeasy Micro, miRNeasy Serum/Plasma, QIAamp DNA FFPE, QIAamp DNA Investigator, QIAamp DNA Micro, QIAamp MinElute Media, QIAamp MinElute Virus Spin, QIAamp MinElute Virus Vacuum, RNeasy FFPE, RNeasy Micro, RNeasy Plus Micro.

Short-term storage (up to 4 weeks) at room temperature (15–25°C) does not affect the performance. However, for optimal performance and quality, storage temperature should not exceed 25°C.

FAQ ID - 3560
Are the columns of the MinElute Reaction Cleanup-, Gel Extraction-, and PCR Purification Kit identical?
Yes, and therefore they are interchangeable.
FAQ ID -581
Why does my DNA sample float out of the slot when loading it onto an agarose gel?

DNA fragments purified with the QIAGEN DNA Cleanup Systems, i.e., the QIAquick PCR Purification Kit, the MinElute Reaction Cleanup Kit, the QIAEX II Gel Extraction Kit etc. may float out of the loading wells of agarose gels due to residual ethanol carried over from the wash step with Buffer PE (despite the addtition of glycerol-containing loading buffer).

Use either of the following options to remove residual ethanol from the eluate:

  • re-purify the sample using a QIAquick-, or MinElute column, or QIAEX II resin
  • incubate the eluate at 56°C for 10 min to evaporate the ethanol
  • dry down the sample in a vacuum centrifuge, and resuspend the pellet in a small volume of sterile water
FAQ ID -205
Do you have information about the cleanup of single-stranded DNA (ssDNA) with QIAquick columns?

As a rule of thumb, single-stranded DNA binds to silica with approximately half the affinity of a double-stranded DNA fragment of the same length under the buffer conditions used in the QIAquick and MinElute Kits. Even though no systematic experimental data exists, we expect that recovery of ssDNA fragments of approximately 200 nucleotides and below will not be very efficient after cleanup using the QIAquick PCR Purification Kit or MinElute PCR Purification Kit. By comparison, it should be possible to purify fragments longer than 140 nucleotides using the QIAquick Gel Extraction Kit.

Note that recovery of single strand DNA is influenced to some degree also by factors such as base composition and secondary structure. It has to be determined empirically by the researcher if cleanup of single-stranded DNA with QIAquick columns yields satisfactory results.

FAQ ID -759
What is the composition of Buffer EB?

The composition of Buffer EB is:

  • 10 mM Tris-Cl, pH 8.5

Buffer EB is the elution buffer used in the QIAquick PCR, Gel Extraction, Nucleotide Removal Kits, and MinElute Kits for DNA cleanup, and the QIAprep Miniprep Kits for small-scale plasmid purification. The purified DNA can also be eluted in TE (10 mM Tris-Cl, 1 mM EDTA, pH 8.0), but the EDTA may inhibit subsequent enzymatic reactions.

FAQ ID -199
What is the small band below my fragment of interest on an agarose gel after DNA cleanup using QIAquick?

Occasionally, DNA fragments eluted from the silica matrix of QIAquick, MinElute or QIAEX II Kits will contain denatured single-stranded DNA (ssDNA), appearing as a smaller band on an analytical gel. Under certain conditions, chaotropic agents (present in all silica-based DNA purification methods) can denature DNA fragments. This is a rare event that may be influenced by sequence characteristics such as the presence of inverted repeats or A–T-rich stretches.

Because salt and buffering agents promote renaturation of DNA strands, the following tips are recommended:

  • use the eluted DNA to prepare your downstream enzymatic reaction, but omit the enzyme. Incubate the reaction mix at 95°C for 2 minutes to reanneal the ssDNA, and allow the tube to cool slowly to room temperature before adding the enzyme and proceeding
  • alternatively, the DNA can be eluted from the silica-gel membrane or resin in 10 mM Tris buffer containing 10 mM NaCl. However, the salt concentration of the eluate must then be taken into consideration in downstream applications.
FAQ ID -148
Can I buy QIAquick and MinElute columns separately?

The QIAquick Spin Columns (100) (cat. no. 28115) in the QIAquick PCR Purification, Gel Extraction, Nucleotide Removal and PCR & Gel Cleanup kits are also sold separately from the kits.

The MinElute columns in the MinElute PCR Purification, Gel Extraction and Reaction Cleanup kits are not sold separately.

We always provide extra buffers in our kits so you can scale up reactions, add extra washes or allow for spillage.

FAQ ID -2460