Anticorps Strep-tag

• Excellents résultats dans les procédures de transfert en point et transfert de western
• Détection hautement sensible et spécifique

Le système de purification par affinité en deux étapes, basé sur le 6xHis-tag et le Strep-tag II court éprouvés, permet une purification simple et très performante des protéines infiniment pures dans une procédure rapide et standardisée. Les protéines recombinantes contenant les deux étiquettes sont purifiées à la suite sur des matrices Ni-NTA et Strep-Tactin (voir l’illustration  Protéine infiniment pure en deux étapes). Les deux purifications par affinité simples donnent une protéine de pleine longueur parfaitement active et infiniment pure adaptée à toutes les applications en aval.

Les protéines recombinantes qui contiennent deux petites étiquettes d’affinité (le 6xHis-tag et le Strep-tag II) sont correctement exprimées dans les cellules d’E. coli, des insectes ou des mammifères à l’aide des pQE-TriSystem His Strep Vectors. Après la lyse cellulaire et la clarification du lysat, les protéines sont d’abord purifiées suivant une procédure de chromatographie d’affinité sur ions métalliques immobilisés (IMAC) qui est basée sur l’interaction éprouvée 6xHis-tag-Ni-NTA. Après l’élution à partir de la matrice Ni-NTA avec l’imidazole, les protéines recombinantes (qui contiennent aussi l’épitope Strep-tag II) sont chargées directement sur une matrice Strep-Tactin. Aucun échange de tampon n’est nécessaire. La protéine est éluée à partir de la matrice Strep-Tactin avec de la biotine ou de la desthiobiotine. Cette purification par affinité en deux étapes donne une protéine infiniment pure (> 98 %) (voir l’illustration  Procédure de purification par affinité en deux étapes). L’ordre des purifications peut être inversé (autrement dit purification Strep-Tactin puis Ni-NTA). Les protéines peuvent être détectées avec une spécificité et une sensibilité élevées à l’aide d’anticorps monoclonaux de souris Strep-tag ou anti-His.

Le système de purification par affinité en deux étapes, avec l’anticorps Strep-tag pour la détection, est parfaitement adapté aux applications dans lesquelles la grande pureté est rare ou difficile à obtenir. La procédure de purification standardisée accroît également le rendement, car il n’est plus nécessaire de développer et optimiser un protocole de purification propre à la protéine. Pratique et offrant une très grande pureté, le système de purification par affinité en deux étapes est la méthode idéale pour :

• Analyse des structures et des fonctionnements
• Expression dans les systèmes eucaryotes