His-Strep pQE-TriSystem Vector Set

• Expression parallèle dans trois systèmes avec une seule construction
• Pas besoin d’un sous-clonage chronophage
• Expression de haut niveau
• Expression extrêmement régulée
• Stabilité améliorée des constructions cytotoxiques

Le His-Strep pQE-TriSystem Vector Set permet l’expression des protéines avec un marqueur 6xHis-tag et le marqueur Strep-tag II. Le double marqueur permet la purification par un système de purification par affinité en deux étapes, cela permet une purification simple et très efficace des protéines ultrapures dans une procédure standardisée. Le système accroît en outre le débit, car il n’est plus nécessaire de développer et optimiser des protocoles propres aux protéines. Les protéines recombinantes présentant les deux marqueurs sont purifiées dans l’ordre sur des matrices Ni-NTA et Strep-Tactin (consultez l’illustration «  Procédure par affinité en deux étapes »). Les deux étapes de purification par affinité donnent une protéine complète ultrapure et entièrement active qui est adaptée à toute application en aval.

Les protéines recombinantes qui présentent deux petits marqueurs d’affinité (marqueurs 6xHis-tag et Strep-tag II) sont correctement exprimées dans des cellules d’E. coli, d’insecte ou de mammifère grâce aux pQE-TriSystem His-Strep Vectors. Après la lyse cellulaire et la clarification du lysat, les protéines sont d’abord purifiées par chromatographie d’affinité sur ions métalliques immobilisés (IMAC), basée sur l’interaction éprouvée marqueur 6xHis-tag/Ni-NTA. Après élution à partir de la matrice Ni-NTA avec l’imidazole, les protéines recombinantes (qui portent aussi l’épitope Strep-tag II) sont chargées directement dans une matrice Strep-Tactin (consultez l’illustration « Procédure de purification par affinité en deux étapes »). Aucun échange de tampon n’est requis. La protéine est éluée à partir de la matrice Strep-Tactin avec de la biotine ou de la desthiobiotine. Les protéines peuvent être détectées avec une spécificité et une sensibilité élevées à l’aide d’anticorps monoclonaux de souris Strep-tag ou d’anticorps anti-His (consultez l’illustration «  Détection hautement sensible de protéines présentant un marqueur Strep-tag »).

Le système de purification par affinité en deux étapes est parfaitement adapté à des applications qui exigent une grande pureté, difficile à obtenir avec le seul marqueur His-tag, par exemple pour les protéines exprimées dans des cellules eucaryotes. La très grande pureté et le côté pratique du système de purification par affinité en deux étapes en font la méthode idéale pour :

• Purification des protéines de haute pureté
• Analyses des structures et des fonctionnements
• Expression dans les systèmes eucaryotes