Qproteome Mitochondria Isolation Kit

Pour l’isolement efficace de préparations mitochondriales d’une grande pureté

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Qproteome Mitochondria Isolation Kit

Cat. No. / ID:  37612

Tampons et réactifs pour 12 préparations mitochondriales haute pureté
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418,00 €
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Le Qproteome Mitochondria Isolation Kit est destiné aux applications de biologie moléculaire. Ce produit n’est pas conçu pour le diagnostic, la prévention ou le traitement des maladies.

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Features

  • Mitochondries intactes d’une grande pureté
  • Grande reproductibilité avec une procédure standardisée
  • Format de kit pratique, rapide et facile à utiliser

Product Details

Le Qproteome Mitochondria Isolation Kit permet d’effectuer des préparations mitochondriales parfaitement actives d’une très grande pureté, dans une procédure standardisée rapide et reproductible, à l’aide d’une centrifugeuse de paillasse standard.

Performance

Contrairement à une méthode de centrifugation différentielle issue de la littérature, l’analyse des protéines de marqueur d’un compartiment cellulaire indique que le Qproteome Mitochondria Isolation Kit donne des fractions mitochondriales quasiment sans contamination croisée (voir l’illustration Fractions mitochondriales quasiment sans contamination croisée). La quasi-absence de contaminants cytosoliques facilite nettement l’analyse d’espèces peu abondantes comme le révèlent les analyses de 2D-PAGE, et cette procédure douce donne une fraction hautement enrichie qui contient des mitochondries intactes (voir l’illustration  Mitochondries d’une grande pureté avec membranes mitochondriales intactes ). Pour démontrer l’intégrité, vous pouvez aussi mesurer le colorant fluorescent ajouté (voir l’illustration Davantage de mitochondries intactes par milligramme de protéine).
See figures

Principle

L’un des principaux problèmes des chercheurs travaillant sur les mitochondries est la séparation performante des fractions mitochondriales et cytosoliques. Les méthodes de préparation classiques sont fastidieuses, chronophages et nécessitent l’utilisation d’une ultracentrifugeuse. Le Qproteome Mitochondria Isolation Kit permet d’effectuer des préparations mitochondriales parfaitement actives d’une très grande pureté, dans une procédure standardisée rapide et reproductible, à l’aide d’une centrifugeuse de paillasse standard.

Applications

Les mitochondries font l’objet d’études approfondies dans un certain nombre de domaines, notamment l’apoptose, la protéomique, la recherche biomédicale et la découverte de nouveaux médicaments. Le Qproteome Mitochondria Isolation Kit donne des mitochondries d’une grande pureté dont les protéines conservent leur conformation native et leur pleine activité biologique, ainsi sont-elles tout à fait adaptées aux études sur l’apoptose, à l’analyse de 2D-PAGE et à d’autres dosages biochimiques.

Supporting data and figures

Specifications

FeaturesSpecifications
ApplicationsSDS-PAGE, spectrométrie de masse, dosages d’activité
Sample size5 × 10e6 à 2 × 10e7 cellules, 20 mg à 60 mg
For glycoproteins: which type of glycoproteinsn.d
Binding capacity/yield20 à 80 µg
SpeciesEucaryotes
Fractions isolatedUne fraction
Start materialCellules, tissus

FAQ

Can mitochondria separated with the Qproteome Mitochondria Isolation Kit be used for downstream DNA isolation?

Even though we have not tested this, we assume that both the QIAamp DNA Micro Kit and the AllPrep DNA/RNA Mini Kit will work to isolate DNA from mitochondria separated with the Qproteome Mitochondria Isolation Kit.

 

FAQ ID -1188
Which Qproteome or Protein Fractionation Kits from QIAGEN are compatible with tissue samples?

The Qproteome Cell Compartment Kit, the Qproteome Nuclear Protein Kit, the Qproteome Mitochondria Isolation Kit, and the PhosphoProtein Purification Kit are compatible with tissue samples. The respective protocol can be found in the respective handbook.

The Qproteome Mammalian Protein Prep Kit is also compatible with tissue, there is the QIAGEN Supplementary Protocol: Purification of protein from animal tissues using the Qproteome Mammalian Protein Prep Kit and the TissueRuptor™ available. For all these protocols the TissueRuptor is used.

 

 

 

FAQ ID -755
Can the nuclei and cell debris fraction generated in the QProteome Mitochondria isolation procedure be used for further fractionation?

We have not tested this application. We would suggest to split the sample, and perform different fractionation procedures separately on the two sample portions.

If splitting the sample is not feasible, then it should theoretically be possible to use the pellet generated at step 7 of the QProteome Mitochondria Isolation Kit protocol (containing cell debris, nuclei and unbroken cells) as starting material for the Qproteome Nuclear Protein Kit.

Please note that this application will have to be tested and optimized by the enduser.

 

FAQ ID -1185
Is it possible to collect intact mitochondria before or after the density gradient centrifugation step of the Qproteome Mitochondria Isolation protocol?

Highly pure and intact mitochondria can be collected after the density gradient centrifugation at step 11b of the Qproteome Mitochondria Isolation protocol.

The fraction collected at step 9 of the protocol, prior to the cushion centrifugation, contains intact as well as broken mitochondria, and may also comprise structures of the ER, Golgi and plasma membranes.

FAQ ID -1187
How many cells can be used with the Qproteome Mitochondria Isolation Kit, and how much mitochondrial protein can be expected?

The Qproteome Mitochondria Isolation Kit can be used with 5 x 106 to 2 x 107 cells. Depending on the cell line, the yield from a single fractionation procedure is 20–80 µg protein from 5 x 106 cells.

Protein can be isolated from the mitochondria using, e.g. the QProteome Mammalian Protein Prep Kit, or home-made lysis buffers.

 

 

FAQ ID -1189
Do you have a kit for protein isolation from mitochondria prepared with your Qproteome Mitochondria Isolation Kit?

Yes, you can use the Qproteome Mammalian Protein Prep Kit to isolate proteins from mitochondria separated with the Qproteome Mitochondria Isolation Kit.

 

FAQ ID -1190
Do I need an ultracentrifuge for the density gradient centrifugation step in the Qproteome Mitochondria Isolation protocol?
No, an ultracentrifuge is not required for the Qproteome Mitochondria Isolation Kit. All centrifugation steps are performed in a standard table-top centrifuge.
FAQ ID -1186
What starting material can be used with the Qproteome Mitochondria Isolation Kit?

The Qproteome Mitochondria Isolation Kit has been developed for cultured mammalian cells. We have tested HeLa, Cos7, NIH, HEK 293 and SH-SY5Y cell lines.

We have not tested animal tissue, yeast, or plant cells. Animal tissue might work if a method for cell disruption that leaves the mitochondria intact can be found. Unfortunately, we do not have any protocol recommendations for these starting materials.

FAQ ID -1184