QuantiTect Virus Kits

Para la detección muy sensible de ARN y/o ADN vírico

S_1084_5_GEN_V2

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QuantiTect Virus Kit (1000)

Cat. No. / ID:  211015

Para 1000 reacciones de 50 µl: QuantiTect Virus Master Mix (contiene colorante ROX), QuantiTect Virus RT Mix, RNase-Free Water, QuantiTect Nucleic Acid Dilution Buffer
4888,00 US$
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Reference dye
Rox in Mastermix
Rox in vial
Reactions
1000
200
50
QuantiTect Virus Kits están concebidos para su uso en aplicaciones de biología molecular. Estos productos no están concebidos para el diagnóstico, la prevención ni el tratamiento de enfermedades.

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Features

  • Gran sensibilidad en ensayos simples y múltiples
  • Detección de ARN y/o ADN vírico en la misma reacción
  • Detección clara de señales positivas débiles
  • Protocolos universales y rápidos de dos pasos
  • Mezcla maestra quíntuple para mayor sensibilidad con más entrada de muestra

Product Details

El QuantiTect Virus Kit está diseñado especialmente para la detección muy sensible de hasta 4 dianas de ácidos nucleicos víricos mediante RT-PCR múltiple de un paso en tiempo real con sondas específicas de secuencia. Es posible detectar varias dianas víricas de ARN y/o ADN vírico más controles internos en un solo tubo sin perder sensibilidad. La mezcla maestra quíntuple concentrada permite añadir una mayor entrada de muestra y contiene HotStarTaq Plus DNA Polymerase. La QuantiTect Virus RT Mix contiene una exclusiva formulación de Sensiscript Reverse Transcriptase que está optimizada para la detección muy sensible de ARN vírico. Hay dos formatos de kits disponibles: el QuantiTect Virus Kit para termocicladores que necesitan un colorante ROX para la normalización de la fluorescencia y el QuantiTect Virus +ROX Vial Kit para otros termocicladores. Por motivos de conveniencia, la mezcla maestra puede almacenarse a una temperatura de 2-8 °C.

Performance

La amplificación con los QuantiTect Virus Kits proporciona curvas sigmoides pronunciadas en un rango de diluciones, incluso para las bajas cantidades de molde con valores de CT altos (consulte la figura “  Determinación inequívoca de los valores de CT en un amplio rango dinámico”). Esto permite la determinación exacta de los valores de CT para la cuantificación de ácidos nucleicos víricos en la real-time PCR.

Los ensayos múltiples permiten la detección de varias dianas de ARN y/o ADN vírico más controles internos en un amplio rango lineal sin pérdida de sensibilidad “ Detección fiable del ARN vírico en un amplio rango lineal” y “   Detección mejorada de cantidades bajas de ARN vírico”).

El QuantiTect Nucleic Acid Dilution Buffer, suministrado con los kits, estabiliza los patrones de ARN y ADN durante la preparación de la reacción y la dilución y previene la pérdida de ácidos nucleicos en las superficies de plástico, como tubos o puntas de pipetas. El tampón permite la dilución fiable de patrones utilizados para cuantificar ácidos nucleicos víricos, lo que ofrece un rango lineal más amplio, desde valores de CT bajos a altos y garantiza el almacenamiento más prolongado de los patrones sin degradación (consulte la figura “ Almacenamiento y dilución fiables de patrones de ARN”).

See figures

Principle

Los QuantiTect Virus Kits permiten la detección muy sensible de ácidos nucleicos víricos en ensayos simples o múltiples en el primer intento (consulte el diagrama de flujo “ Kits de análisis múltiple de QIAGEN ”). La mezcla maestra optimizada garantiza que los productos de PCR de una reacción múltiple se amplifiquen con la misma eficacia y sensibilidad que los productos de PCR en la reacción de amplificación simple correspondiente.

La amplificación de genes diana y de control en la misma reacción, en lugar de en reacciones independientes, aumenta la fiabilidad de la cuantificación genética al reducir al mínimo los errores de manipulación. El QuantiTect Virus Buffer contiene una combinación equilibrada de iones de K+ y NH4+, así como estabiliza el exclusivo Factor MP sintético, que juntos favorecen la hibridación estable y eficaz de cebadores y sondas al molde de ácido nucleico, lo que resulta en una alta eficacia de la PCR (consulte la figura “ Tampón de PCR exclusivo”). Además, la exclusiva formulación de la Sensiscript Reverse Transcriptase garantiza la transcripción inversa muy sensible del ARN vírico, mientras que la HotStarTaq Plus DNA Polymerase proporciona un riguroso hot start, lo que impide la formación de productos no específicos.

Componentes del QuantiTect Virus Kit
Componente del kitCaracterísticaBeneficios
5x QuantiTect Virus Master MixMezcla maestra concentradaMuy concentrada y optimizada para la detección sensible de virusSe pueden añadir volúmenes mayores de molde al ensayo para aumentar la sensibilidad
HotStarTaq Plus DNA PolymeraseActivación de 5 min a 95 ºCPreparación de reacciones de qPCR a temperatura ambiente
QuantiTect Virus BufferCombinación equilibrada de iones de NH4+ y K+La hibridación de cebadores específicos garantiza la fiabilidad de los resultados de la PCR
Factor MP sintéticoAnálisis múltiple fiable de hasta 4 genes en el mismo tubo
Componentes adicionales del kitQuantiTect Virus RT MixContiene una exclusiva formulación de Sensiscript Reverse TranscriptaseOptimizado para la detección muy sensible de ARN vírico
QuantiTect Nucleic Acid Dilution BufferFormulación de tampón patentada para la dilución y el almacenamiento de patrones de ácido nucleico.Estabiliza los patrones de ADN y ARN durante la preparación de la reacción y dilución y previene la pérdida de ácidos nucleicos en las superficies de plástico, como tubos o puntas de pipetas
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Procedure

Los QuantiTect Virus Kits ofrecen un análisis por real-time PCR muy sensible de ácidos nucleicos víricos (ARN y/o ADN) y controles internos utilizando sondas específicas de secuencia. Las reacciones se pueden llevar a cabo con o sin un paso de transcripción inversa, lo que permite el diseño flexible de ensayos múltiples para detectar dianas de ARN, dianas de ADN o dianas de ARN y ADN. Siga el protocolo del manual de uso para obtener resultados rápidos y fiables.

Los kits están disponibles con o sin colorante de referencia pasivo ROX en la mezcla maestra (consulte la tabla).

Elegir el QuantiTect Virus Kit correcto
Colorante ROXKitTermocicladores compatibles
Se suministra en la mezcla maestraQuantiTect Virus KitTodos los termocicladores de Applied Biosystems, excepto Applied Biosystems 7500
Se suministra en un tubo separadoQuantiTect Virus +ROX Vial KitApplied Biosystems 7500 y termocicladores de
Bio-Rad, Cepheid, Eppendorf, QIAGEN, Roche, Agilent y otros proveedores

Para las aplicaciones de RT-PCR de un paso de punto final, rápida y muy sensible, incluida la detección de virus, recomendamos utilizar el QIAGEN OneStep RT-PCR Kit.

Applications

Los QuantiTect Virus Kits proporcionan RT-PCR de un paso o PCR en tiempo real simples o múltiples sensibles mediante el uso de sondas específicas de secuencia para la detección simultánea de ADN y/o ARN víricos más controles internos. Los kits pueden utilizarse en una gran variedad de termocicladores en tiempo real, incluidos los instrumentos de Applied Biosystems, Bio-Rad, Cepheid, Eppendorf, QIAGEN, Roche (excepto los termocicladores de capilares) y Agilent.

Supporting data and figures

Specifications

FeaturesSpecifications
ApplicationsDetección de virus
SYBR Green I or sequence-specific probesSondas específicas de secuencia
Real-time or endpointTiempo real
Reaction typeTranscripción inversa y PCR
Thermal cyclerLa mayoría de los termocicladores en tiempo real (excepto los termocicladores capilares; p. ej., LightCycler® 1.x y 2.0)
Sample/target typeDianas de ARN y/o ADN
With or without ROXDisponibles con ROX en la mezcla maestra y con ROX en un vial separado
Single or multiplexÚnico o múltiple

Resources

Brochures & Guides (1)
Now with even more applications!
Safety Data Sheets (1)
Kit Handbooks (1)
For highly sensitive real-time singleplex or multiplex PCR or one-step RT-PCR using sequence-specific probes for detection of viral DNA and RNA and internal controls
Certificates of Analysis (1)

FAQ

How do I setup and validate a multiplex PCR assay with QIAGEN PCR kits?

Ensure PCR amplicons are as short as possible, ideally 60–150 bp. Always use the same algorithm or software to design the primers and probes. For optimal results, only combine assays that have been designed using the same parameters.

 

Check the functionality of each set of primers and probes in individual assays before combining the different sets in the multiplex assay. Choose compatible reporters and quenchers based on a specific instrument. See How do I select appropriate reporter and quencher combinations for multiplex PCR.

 

FAQ ID -9093
Can I use uracil-N-glycosylase (UNG) with the QuantiFast and Rotor-Gene PCR kits?

No. UNG treatment does not provide any advantage for the QuantiFast and Rotor-Gene PCR kits because the mastermixes do not contain dUTP. Use the QuantiTect kits if you intend to use the UNG treatment.

FAQ ID -9092
Why do I see multiple high-intensity peaks in my qPCR dissociation curve at temperatures less than 70ºC?

If the extra peaks seem irregular or noisy, do not occur in all samples, and occur at temperatures less than 70 ºC, then these peaks may not represent real PCR products and instead may represent artifacts caused by instrument settings.

 

Usually extra peaks caused by secondary products are smooth and regular, occur reproducibly in most samples, and occur at temperatures greater than 70 ºC. Characterization of the product by agarose gel electrophoresis is the best way to distinguish between these cases. If only one band appears by agarose gel then the extra peaks in the dissociation curve are instrument artifacts and not real products. If this is the case, refer to the thermal cycler user manual, and confirm that all instrument settings (smooth factor, etc.) are set to their optimal values.

 

FAQ ID -90990
How do I quantify gene expression levels if the amplification efficiencies are different between the genes of interest and endogenous reference gene?

The REST 2009 (Relative Expression Software Tool) software applies mathematic models that compensate for the different PCR efficiencies of the gene of interest and reference genes. In addition, the software can use multiple reference gene normalization to improve the reliability of result, as well as provides statistical information suitable for robust comparison of expression in groups of treated and untreated. QIAGEN offers the REST 2009 software free of charge.

FAQ ID -9095
What is the threshold cycle or Ct value?
The Ct or threshold cycle value is the cycle number at which the fluorescence generated within a reaction crosses the fluorescence threshold, a fluorescent signal significantly above the background fluorescence. At the threshold cycle, a detectable amount of amplicon product has been generated during the early exponential phase of the reaction. The threshold cycle is inversely proportional to the original relative expression level of the gene of interest.
FAQ ID -2682
What do I do if no fluorescent signal is detected in a real-time PCR assay?

Check the template quality and integrity by amplifying an endogenous control gene. Check the amplicon by QIAxcel Advanced system or agarose gel electrophoresis to show that amplification was successful.

 

Determine whether the gene of interest is expressed in your sample. See How can I find out if my gene of interest is express in a specific tissue type or cell line.  Ensure the assay setup and cycling conditions are correct, and that the data collection channel matches the emission wavelength of the fluorescent dye used. Use a control sample in which the gene of interest is definitely expressed.

 

If the issue persists, please send the original run file to QIAGEN Technical Services.

FAQ ID -9091
How do I select appropriate reporter and quencher combinations for multiplex PCR?

For duplex analysis, using non-fluorescent quenchers (e.g., Black Hole Quencher®) is preferred over fluorescent quenchers (e.g., TAMRA fluorescent dye). For triplex and 4-plex analysis, QIAGEN strongly recommends using non-fluorescent quenchers. Generally, use the green channel, the yellow channel, and the orange and crimson channels to detect the least abundant target, the second least abundant target, and the two most abundant targets, respectively. For instrument-specific recommendations, please see the handbooks for the QuantiTect Multiplex PCR kit, QuantiFast Multiplex kit or Rotor-Gene Multiplex kit.

 

FAQ ID -9094
Can I skip the gDNA wipeout buffer treatment step for the QuantiTect Reverse Transcription Kit?

The gDNA wipeout buffer incubation step can be skipped when the total RNA is free from genomic DNA. However, the gDNA wipeout buffer is still required to be added because the reverse transcription step is optimized in the presence of components in the gDNA wipeout buffer.

FAQ ID -9098
How should I handle and store absolute quantitation standards for real-time experiments?
Store the standards at a high concentration in aliquots at -20oC to -70oC. If using low concentrations, stabilize standards with carrier nucleic acid. It is always best to use freshly diluted standards for each experiment. If possible, use siliconized tubes for standard (and target) dilutions. This will prevent any unspecific binding of nucleic acids to the plastic.
FAQ ID -9099
How do I ensure reliable results for High Resolution Melting (HRM) assays?

Reliable HRM analysis results depend on template quality, highly specific HRM PCR kit with a saturation dye, a real-time instrument with HRM capability, and powerful software package. Factors critical for successful HRM analysis are:

 

  • Use the same genomic DNA purification procedure for all samples being analyzed by HRM. This avoids variation due to differing composition of elution buffers.
  • DNA template concentrations should be normalized using the same dilution buffer. Ensure the CT values are below 30 and differ no more than 3 CT values across individual samples.
  • Design assays with amplicon length 70–350 bp. For SNP analysis, use amplicon length 70–150 bp.
  • Always start with 0.7 µM primer concentration

 

For more details, please refer to the HRM Technology – FAQs and the Critical Success Factor for HRM performance.

FAQ ID -9097
Why should DNA or cDNA targets be less than 250 bp long for real-time PCR?

Shorter amplification products facilitate high PCR efficiencies. Ideally, amplicon length should be less than 150 bp for optimal amplification efficiency. PCR efficiencies close to 100% are a crucial prerequisite for accurate quantification of target copy numbers in real-time PCR.

FAQ ID-751
What is the difference between QuantiTect Virus Kit and the new QuantiFast Pathogen +IC Kits?
The QuantiTect Virus Kit and the new QuantiFast Pathogen +IC Kits are based on similar reaction chemistry and show identical sensitivity but as a new feature, the QuantiFast Pathogen kits include an Internal Control template and the corresponding primer/probe set for duplex amplification of a user-defined pathogen target with the provided Internal Control. Additional new features are pack size, kit variants, ROX variants, and speed.
FAQ ID -2448
Can the Internal Controls be ordered separately in the QuantiFast Pathogen + IC kit for use during purification?

Yes, the Internal Control RNA (High conc.) and Internal Control DNA (High conc.) templates are available under a separate catalog number. After reconstitution according to the description in the handbook, these IC templates have a 10x higher concentration than the Internal Control templates provided in the kits.   They are sufficiently concentrated to be spiked into the sample prep without replacing too much of the sample input volume.

 

**Please note that there is no assay (primer/probe set) for amplification of the IC included in these separate catalog numbers. The assay is only included in the QuantiFast Pathogen PCR +IC Kit and QuantiFast Pathogen RT-PCR +IC Kit.  The ICs cannot be used with the QuantiTect Virus kits because the assay (primer/probe set) for the detection of the IC is provided with the QuantiFast Pathogen Kits only.

 

FAQ ID -2451
How do I avoid collecting a fluorescence reading from primer-dimer with the QuantiTect SYBR Green PCR Kit?

Depending on primer design and copy number of target, primer-dimer may occur and its signal might be detected. Typical strategies against this are to optimize PCR conditions and/or redesign the assay.

 

Alternatively, an additional data-acquisition step can be added to the 3-step cycling protocol. First, determine the melting temperatures (Tm) for both the amplicon and the primer-dimer. Then, add a 15 second data-acquisition step with a temperature that is higher than the primer-dimer Tm, but approximately 3ºC lower than the specific amplicon Tm.

FAQ ID -9096