Digital PCR
PCR digital

La novedad absoluta en PCR – PCR digital

Descubrimientos: PCR digital (dPCR)

El poder de la PCR digital: encontrar «la aguja en el pajar»

La PCR digital (dPCR) es una técnica en la que la muestra se divide en muchas reacciones individuales, de tal modo que en cada reacción estén presentes cero, una o más moléculas diana. Gracias a este enfoque es sorprendentemente fácil detectar un solo positivo en un fondo muy potente de negativos, el típico problema de encontrar «la aguja en el pajar». En estos casos, debido a la existencia de un límite de detección más bajo, quedan excluidas las real-time PCR estándar cuantitativas (qPCR) como posible método.

La característica definitoria de la PCR digital es la cuantificación absoluta de los ácidos nucleicos. Después de la partición, las reacciones se someten a termociclado de PCR convencional y las particiones se analizan para determinar la presencia (reacción positiva) o ausencia (reacción negativa) de una señal de fluorescencia. Atendiendo a esta información, se puede calcular el número absoluto de moléculas presentes en la muestra. A diferencia de la qPCR, la dPCR no se basa en curvas estándar. Por ello, la dPCR tiene un límite de detección más bajo y una precisión mayor que la qPCR.

Los investigadores utilizan cada vez más la PCR digital para aplicaciones sensibles, como el análisis de variación del número de copias, la cuantificación de la expresión genética y la detección de dianas raras. El método ha ayudado a avanzar en la investigación de terapias celulares y genéticas, la investigación del cáncer, la vigilancia de enfermedades infecciosas, las pruebas de alimentos, etc.

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DNA, binary code
Nuestra misión es brindarle el conocimiento y las herramientas que necesita para superar los desafíos en su aventura con la PCR digital. A fin de cuentas, es posible que encontrar «la aguja en el pajar» no sea tan difícil como parece.
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Este vídeo se grabó antes de la pandemia COVID-19.
Si el futuro es digital, ¿no deberían serlo también las PCR? Imagínese poder mantener la facilidad de uso de las qPCR y conseguir la mayor sensibilidad y precisión que proporcionan las PCR digitales sin que ello implique demorar la generación del conocimiento cientifico. QIAcuity, el sistema de PCR digital basado en nanoplacas y totalmente integrado de QIAGEN, está especialmente diseñado teniendo en cuenta las necesidades de investigación y las limitaciones de los métodos disponibles actuales. Es hora de simplificar la transición desde las PCR cuantitativas y preparar las aplicaciones esenciales de las investigaciones para el novedoso panorama de las PCR digitales.

Ventajas frente a la tecnología de las PCR digitales por gotas

La tecnología basada en nanoplacas ofrece una serie de ventajas significativas frente a las PCR digitales por gotas (ddPCR). Algunas de estas son las siguientes:

• Las divisiones fijas evitan las variaciones de tamaño y la fusión.
• Las nanoplacas selladas evitan la contaminación cruzada entre pocillos.
• Se agiliza el análisis de los resultados gracias a la lectura simultánea de todas las divisiones de una muestra.
• Las placas son fáciles de usar y el pipeteo es sencillo, como en las qPCR.
• Las placas son compatibles con la automatización de las fases iniciales.

Más información sobre dPCR frente a ddPCR

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Referencias

Huggett JF et al. (2013). The digital MIQE guidelines: Minimum Information for Publication of Quantitative Digital PCR Experiments. Clin Chem. 59(6):892-902.

dMIQE Group, Huggett JF. (2020). The Digital MIQE Guidelines Update: Minimum Information for Publication of Quantitative Digital PCR Experiments for 2020. Clin Chem. 66(8):1012-1029.

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