Ni-NTA Superflow Cartridges
Für die Aufreinigung von Proteinen mit His-tag auf Flüssigchromatographiesystemen
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Cat. No. / ID: 30761
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Ni-NTA Superflow, das am meisten zitierte Harz bei der Aufreinigung von Proteinen mit His-tag, ist in vorgefüllten 1-ml- und 5-ml-Kartuschen für die automatisierte Aufreinigung auf Flüssigchromatographiesystemen wie FPLC, ÄkTA und BioLogic oder die manuelle Aufreinigung mit einer Spritze verfügbar.
Verglichen mit anderen Harzen überzeugt Ni-NTA durch eine überragende Leistung mit hohen Ausbeuten an hochreinem Protein (siehe Abbildung Ni-NTA übertrifft andere Harze und liefert hohe Ausbeuten an hochreinen Proteinen). Ein unabhängiger Vergleich mit anderen handelsüblichen Nickel-Harzen zeigte, dass bei Ni-NTA Superflow die Nickelauswaschung (Leaching) am geringsten ausfiel (siehe Abbildung Eine unabhängige Studie zeigt, dass Ni-NTA weniger Nickel verliert als jedes andere getestete Harz). Dies ist wichtig, da bei Auswaschung von Nickel aus dem Harz die verbleibenden geladenen Liganden als Ionenaustauscher agieren und auch Proteine ohne Tag binden, welche dann die Elutionsfraktionen kontaminieren. Die höhere Stabilität von Ni-NTA bedeutet, dass es selbst in Gegenwart von 10 mM DTT genutzt werden kann, um vollständig aktive, hochreine Proteine zu erhalten (siehe Abbildung Die zusätzliche Koordinationsstelle von Ni-NTA bindet das Nickelion fester als IDA).
Wie in der Tabelle dargestellt, ist die Reinheit über alle Aufreinigungsmaßstäbe hinweg gleichbleibend hoch. Ni-NTA Superflow Cartridges sind ein Element der umfassenden und komplementären Lösungen, die QIAGEN für Proteine mit His-tag anbietet (siehe Abbildung Skalierbare Aufreinigung von Proteinen mit His-tag in Nanogramm- bis Gramm-Mengen).
Matrix | Matrix- volumen |
Kultur- volumen |
Ausbeute | Wiederfindung (%) | Reinheit* |
---|---|---|---|---|---|
Ni-NTA Magnetic Agarose Beads (Mikro-Maßstab) | 100 μl | 1 ml | 33 μg | ~90 % | ~97 % |
Ni-NTA Superflow (kleiner Maßstab) | 500 μl | 320 ml | 6 mg | ~80 % | ~96 % |
Ni-NTA Superflow (mittlerer Maßstab) | 10 ml | 1,7 l | 109 mg | ~80 % | ~98 % |
Ni-NTA Superflow (großer Maßstab) | 100 ml | 18 l | 2 g | > 88 % | ~97 % |
Ni-NTA-Matrizes sind die Affinitätschromatographielösung der Wahl für die Aufreinigung von Proteinen mit His-tag (siehe Abbildung Effiziente Ein-Schritt-Aufreinigung von Proteinen mit His-tag). Dank ihrer Stabilität sind sie kompatibel mit einem breiten Spektrum an Pufferkomponenten, einschließlich stark denaturierender Agenzien, Detergenzien und sogar reduzierender Agenzien (siehe Tabelle Mit der His/Ni-NTA-Interaktion kompatible Reagenzien). Diese Flexibilität ermöglicht es Forschenden, optimale Aufreinigungsschemata zu entwickeln und gleichzeitig von den ausgezeichneten Trenneigenschaften von Ni-NTA zu profitieren, so dass ein zweiter Chromatographieschritt oft überflüssig wird.
Denaturierende Agenzien | Detergenzien | Reduzierende Agenzien | Sonstige | Salze | Langfristige Lagerung |
---|---|---|---|---|---|
6 M Gu-HCl | 2 % Triton X-100 | 20 mM β-ME | 50 % Glycerin | 4 M MgCl2 | Bis zu 30 % Ethanol |
8 M Harnstoff | 2 % Tween 20 | 10 mM DTT | 20 % Ethanol | 5 mM CaCl2 | oder 100 mM NaOH |
1 % CHAPS | 20 mM TCEP | 20 mM TCEP | 20 mM Imidazol | 2 M NaCl |
Ni-NTA-Matrizes können verwendet werden, um die Aufreinigung von Proteinen mit His-tag für Strukturuntersuchungen (z. B. durch Proteinkristallographie oder NMR) aufzuskalieren oder Gramm-Mengen für die Produktion von Biopharmazeutika herzustellen.
Features | Specifications |
---|---|
Applications | Proteomik |
Gravity flow or spin column | FPLC oder Spritze |
Binding capacity | Bis zu 50 mg/ml |
FPLC | Ja |
N- or C-terminal tag | Beides |
Bead size | 60–160 µm |
Processing | Manuell/Automatisiert |
Scale | Großer Maßstab |
Start material | Zelllysat |
Support/matrix | Superflow |
Tag | 6xHis-tag |
Yield | Bis zu 50 mg (1 ml-Kartusche), bis zu 250 mg (5 ml-Kartusche) |