Ni-NTA Fast Start Kit
Für die Aufreinigung und den Nachweis rekombinanter Proteine mit His-tag aus E. coli-Lysaten
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✓ Schnelle und zuverlässige (Nach-)Bestellung
Ni-NTA Fast Start Kit (6)
Kat.-Nr. / ID. 30600
Für die Aufreinigung und den Nachweis von sechs Proteinpräparationen mit 6xHis-tag: 6 x Fast Start Säulen, Penta-His-Antikörper, Puffer und Reagenzien
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Ni-NTA Fast Start Kit ist für molekularbiologische Anwendungen vorgesehen. Dieses Produkt ist nicht für die Diagnose, Prävention oder Behandlung einer Krankheit bestimmt.
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Eigenschaften
- Ideal für Forschende, die neu in den Proteinwissenschaften sind
- Alles, was Sie für eine effiziente Aufreinigung brauchen, in einem Kit
- Einfache Protokolle und unkomplizierte Verarbeitung
- Bis zu 25 mg Protein je Säule in nur 90 Minuten
Angaben zum Produkt
Das Ni-NTA Fast Start Kit bietet alles, was für eine schnelle, effiziente Aufreinigung von Proteinen mit His-tag aus geklärten E.coli-Lysaten benötigt wird, einschließlich vorgefüllter Ni-NTA-Säulen. Die im Kit enthaltenen Puffer ermöglichen die Aufreinigung von Proteinen entweder unter nativen oder denaturierenden Bedingungen. Das Kit enthält auch einen Anti-His-Antikörper für den Nachweis exprimierter Proteine mit His-tag.
Leistung
Das Ni-NTA Fast Start Kit bietet alles, was Sie für eine schnelle, effiziente Aufreinigung von Proteinen mit His-tag aus geklärten E. coli-Lysaten benötigen. Die im Kit enthaltenen Puffer ermöglichen die Aufreinigung von Proteinen entweder unter nativen oder denaturierenden Bedingungen (siehe Abbildung Hochreine Proteine unter nativen oder denaturierenden Bedingungen). Einfache, unkomplizierte Protokolle und gebrauchsfertige Reagenzien machen das Ni-NTA Fast Start Kit zu einem idealen Ausgangspunkt für Wissenschaftlerinnen und Wissenschaftler, die ihre Forschung auf das Gebiet der Proteinexpression ausweiten möchten, aber mit den Verfahren zur Proteinaufreinigung nicht vertraut sind.
Prinzip
Das Ni-NTA Fast Start Kit basiert auf der bemerkenswerten Selektivität des patentierten Ni-NTA(Nickel-Nitrilotriessigsäure)-Harzes für Proteine mit einem Affinitätstag aus sechs oder mehr Histidinresten (zusammenhängend oder alternierend) – dem His-tag. Diese Technologie erlaubt die Ein-Schritt-Aufreinigung nahezu jedes Proteins mit His-tag unter nativen oder denaturierenden Bedingungen. NTA, das über vier Chelationen-Bindestellen für Nickelionen verfügt, bindet Nickel fester als metallchelatbildende Aufreinigungssysteme, die nur drei verfügbare Bindestellen für die Interaktion mit Metallionen besitzen. Die zusätzliche Chelation-Bindestelle verhindert das Auswaschen von Nickelionen und führt zu Proteinpräparationen mit höherer Reinheit verglichen mit denen, die mit anderen metallchelatbildenden Aufreinigungssystemen gewonnen wurden. Der His-tag bildet auch das Epitop, das durch den im Kit enthaltenen Penta-His-Antikörper erkannt wird.
Verfahren
Die Zellen werden in dem mitgelieferten Lysepuffer lysiert und zentrifugiert, um ein geklärtes Lysat zu erhalten. Dieses Lysat wird auf eine Fast Start Column aufgetragen, wo die Proteine mit His-tag mit hoher Affinität binden, während die Proteine ohne Tag die Säule passieren. Nach dem Waschen werden die aufgereinigten Proteine durch Puffer mit Imidazol (native Bedingungen) oder mit niedrigem pH-Wert (denaturierende Bedingungen) eluiert (siehe Abbildung Hochreines Protein mit 6xHis-tag). Das Aufreinigungsverfahren und die Proteinausbeute können mittels SDS-PAGE, Western Blotting und Immundetektion mit dem mitgelieferten Penta-His-Antikörper nachverfolgt werden.
Anwendungen
Das Ni-NTA Fast Start Kit ermöglicht eine zuverlässige Ein-Schritt-Aufreinigung von Proteinen mit 6xHis-tag, die anschließend für jede beliebige Applikation eingesetzt werden können, einschließlich:
- Funktionsstudien
- Immunisierung zur Antikörperproduktion
- Assays mit Protein-Protein- und Protein-DNA-Interaktionen
- Strukturuntersuchungen
Ergänzende Daten und Abbildungen
Hochreines Protein mit His-tag.
Hochreines Protein mit His-tag.
Spezifikationen
| Eigenschaften | Spezifikationen |
|---|---|
| Applications | Proteomik |
| Support/matrix | Ni-NTA-Matrix |
| Processing | Manuell |
| Binding capacity | 5–20 mg/ml |
| Special feature | Ni-NTA-Technologie |
| Gravity flow or spin column | Gravity flow |
| Start material | Zelllysat |
| Tag | 6xHis-tag |
| Yield | < 10 mg Protein je Säule |
Ressourcen
Kit Handbooks (2)
Technical Information (2)
Safety Data Sheets (1)
Certificates of Analysis (1)
FAQ
What are your recommendations for PCR template preparation for use with the EasyXpress Insect Kit II?
Should I use Ni-NTA Agarose in column or batch format for purification of 6xHis-tagged proteins?
What are the features and benefits of the QIAexpress 6xHis Tag System?
3353 - What is the composition of the elution buffer in the Ni-NTA Fast Start Kit?
What are the compatibilities of different reagents with Ni-NTA matrices?
Can Ni-NTA resins be used to purify protein with an internal His-tag?
How can I be sure that I am harvesting my induced bacterial culture at the best time point for protein expression?
To optimize the expression of a given recombinant protein, a time-course analysis of the level of protein expression in the induced culture is recommended. Intracellular protein content is often a balance between the amount of soluble protein in the cells, the formation of inclusion bodies, and protein degradation. By checking the 6xHis-tagged protein present at various times after induction in the soluble and insoluble fractions, the optimal induction period can be established, and the bacterial culture can be harvested at this time. It may be useful to perform plasmid Mini preparations on culture samples during the time-course to enable monitoring of plasmid (expression construct) maintenance.
Below, you can see an example of a time course of recombinant protein expression using the QIAexpress System. You can find this information also in the Section 'Expression in E. coli' in the QIAexpressionist Handbook. The handbook is an important resource for useful background information and protocols. For instructions on how to isolate protein from the soluble and insoluble fractions of induced cultures please see Protocol 14. "Protein minipreps of 6x His-tagged proteins from E. coli under native conditions" and Protocol 19. "6xHis-tagged protein minipreps under denaturing conditions."
Time course of expression using the QIAexpress System. Expression of 6xHis-tagged DHFR was induced with 1 mM IPTG. Aliquots were removed at the times indicated and purified on Ni-NTA Agarose under denaturing conditions. Proteins were visualized by Coomassie staining. Yields per liter culture were 2.8, 5.5,12.3, 33.8, and 53.9 mg, respectively. ■A Crude cell lysate; ■B purification with Ni-NTA. 1: flow-through, 2 & 3: first and second eluates; M: markers; C: noninduced control.
FAQ-788
Are the buffers in the Ni-NTA Fast Start Kit the same as the ones for use with Ni-NTA purchased separately?
Which resin is used in the QIAexpress Ni-NTA Fast Start Columns?
How can I remove imidazole from a protein sample?