Qproteome Mitochondria Isolation Kit

Für die effiziente Isolierung von hochreinen Mitochondrienpräparationen

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Qproteome Mitochondria Isolation Kit

Cat. No. / ID:  37612

Puffer und Reagenzien für 12 hochreine Mitochondrienpräparationen
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485,00 €
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Qproteome Mitochondria Isolation Kit ist für molekularbiologische Anwendungen vorgesehen. Dieses Produkt ist nicht für die Diagnose, Prävention oder Behandlung einer Krankheit bestimmt.

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Features

  • Hochreine, intakte Mitochondrien
  • Hochreproduzierbar durch standardisiertes Verfahren
  • Praktisches, schnelles und benutzerfreundliches Kit-Format

Product Details

Das Qproteome Mitochondria Isolation Kit liefert vollständig aktive Mitochondrienpräparationen von sehr hoher Reinheit in einem schnellen, reproduzierbaren und standardisierten Verfahren, das mit einer Standard-Tischzentrifuge arbeitet.

Performance

Im Gegensatz zu einer differenziellen Zentrifugationsmethode, wie sie in Publikationen beschrieben wird, zeigt die Analyse von Zellkompartiment-Markerproteinen, dass die mit dem Qproteome Mitochondria Isolation Kit erhaltenen Mitochondrienfraktionen nahezu frei von Kreuzkontaminationen sind (siehe Abbildung „Mitochondrienfraktionen nahezu frei von Kreuzkontaminationen“). Die Tatsache, dass zytosolische Kontaminanten nahezu abwesend sind, erleichtert die Analyse von Spezies mit geringer Häufigkeit, wie 2D-PAGE-Analysen zeigen, und das schonende Verfahren liefert eine hochangereicherte Fraktion mit intakten Mitochondrien (siehe Abbildung „ Hochreine Mitochondrien mit intakten Mitochondrienmembranen “). Die Integrität kann auch durch Messung der Aufnahme eines Fluoreszenzfarbstoffs nachgewiesen werden (siehe Abbildung „Mehr intakte Mitochondrien je Milligramm Protein“).
See figures

Principle

Eines der größten Probleme für Forschende bei der Arbeit mit Mitochondrien ist die effiziente Trennung mitochondrialer und zytosolischer Fraktionen. Die traditionellen Präparationsmethoden sind mühsam und zeitaufwändig und erfordern den Zugang zu einer Ultrazentrifuge. Das Qproteome Mitochondria Isolation Kit liefert vollständig aktive Mitochondrienpräparationen von sehr hoher Reinheit in einem schnellen, reproduzierbaren und standardisierten Verfahren, das mit einer Standard-Tischzentrifuge arbeitet.

Applications

Mitochondrien Gegenstand intensiver Studien in zahlreichen Gebieten wie Apoptose, Proteomik, biomedizinischer Forschung und Wirkstoffentwicklung. Das Qproteome Mitochondria Isolation Kit liefert hochreine Mitochondrien mit Proteinen, deren native Konformation und vollständige biologische Aktivität erhalten bleibt. Dadurch eignen sie sich ideal für Apoptose-Studien, 2D-PAGE-Analysen und andere biochemische Assays.

Supporting data and figures

Specifications

FeaturesSpecifications
ApplicationsSDS-PAGE, Massenspektrometrie, Aktivitätsassays
Sample size5 x 10e6–2 x 10e7 Zellen, 20 mg–60 mg
For glycoproteins: which type of glycoproteinsn. n.
Binding capacity/yield20–80 µg
SpeciesEukaryoten
Fractions isolatedEine Fraktion
Start materialZellen, Gewebe

FAQ

Can mitochondria separated with the Qproteome Mitochondria Isolation Kit be used for downstream DNA isolation?

Even though we have not tested this, we assume that both the QIAamp DNA Micro Kit and the AllPrep DNA/RNA Mini Kit will work to isolate DNA from mitochondria separated with the Qproteome Mitochondria Isolation Kit.

 

FAQ ID -1188
Which Qproteome or Protein Fractionation Kits from QIAGEN are compatible with tissue samples?

The Qproteome Cell Compartment Kit, the Qproteome Nuclear Protein Kit, the Qproteome Mitochondria Isolation Kit, and the PhosphoProtein Purification Kit are compatible with tissue samples. The respective protocol can be found in the respective handbook.

The Qproteome Mammalian Protein Prep Kit is also compatible with tissue, there is the QIAGEN Supplementary Protocol: Purification of protein from animal tissues using the Qproteome Mammalian Protein Prep Kit and the TissueRuptor™ available. For all these protocols the TissueRuptor is used.

 

 

 

FAQ ID -755
Can the nuclei and cell debris fraction generated in the QProteome Mitochondria isolation procedure be used for further fractionation?

We have not tested this application. We would suggest to split the sample, and perform different fractionation procedures separately on the two sample portions.

If splitting the sample is not feasible, then it should theoretically be possible to use the pellet generated at step 7 of the QProteome Mitochondria Isolation Kit protocol (containing cell debris, nuclei and unbroken cells) as starting material for the Qproteome Nuclear Protein Kit.

Please note that this application will have to be tested and optimized by the enduser.

 

FAQ ID -1185
Is it possible to collect intact mitochondria before or after the density gradient centrifugation step of the Qproteome Mitochondria Isolation protocol?

Highly pure and intact mitochondria can be collected after the density gradient centrifugation at step 11b of the Qproteome Mitochondria Isolation protocol.

The fraction collected at step 9 of the protocol, prior to the cushion centrifugation, contains intact as well as broken mitochondria, and may also comprise structures of the ER, Golgi and plasma membranes.

FAQ ID -1187
How many cells can be used with the Qproteome Mitochondria Isolation Kit, and how much mitochondrial protein can be expected?

The Qproteome Mitochondria Isolation Kit can be used with 5 x 106 to 2 x 107 cells. Depending on the cell line, the yield from a single fractionation procedure is 20–80 µg protein from 5 x 106 cells.

Protein can be isolated from the mitochondria using, e.g. the QProteome Mammalian Protein Prep Kit, or home-made lysis buffers.

 

 

FAQ ID -1189
Do you have a kit for protein isolation from mitochondria prepared with your Qproteome Mitochondria Isolation Kit?

Yes, you can use the Qproteome Mammalian Protein Prep Kit to isolate proteins from mitochondria separated with the Qproteome Mitochondria Isolation Kit.

 

FAQ ID -1190
Do I need an ultracentrifuge for the density gradient centrifugation step in the Qproteome Mitochondria Isolation protocol?
No, an ultracentrifuge is not required for the Qproteome Mitochondria Isolation Kit. All centrifugation steps are performed in a standard table-top centrifuge.
FAQ ID -1186
What starting material can be used with the Qproteome Mitochondria Isolation Kit?

The Qproteome Mitochondria Isolation Kit has been developed for cultured mammalian cells. We have tested HeLa, Cos7, NIH, HEK 293 and SH-SY5Y cell lines.

We have not tested animal tissue, yeast, or plant cells. Animal tissue might work if a method for cell disruption that leaves the mitochondria intact can be found. Unfortunately, we do not have any protocol recommendations for these starting materials.

FAQ ID -1184