Gentherapie mit digitaler PCR – Entwicklung sicherer und wirksamer Therapien
Die Gentherapie hat das Potenzial, durch den Transfer von genetischem Material in die richtigen Körperzellen die Behandlung monogener Erkrankungen grundlegend zu verändern und möglicherweise sogar zur Heilung zu führen. Gentherapie kann mit Plasmiden durchgeführt werden, aber zumeist kommt ein virusvermittelter Gentransfer mit dem Adeno-assoziierten Virus (AAV) oder Lentivirus zum Einsatz.
AAV-Vektoren werden oftmals aufgrund ihrer kleineren Verpackungsgröße (~5 kb) bevorzugt, aufgrund derer sie sich für die Einbringung kleiner Gene besonders eignen. Da sie nicht integrierend sind, weisen sie zudem eine relativ geringe Systemtoxizität auf. Außerdem können sie sich nicht ohne Helfervirus vermehren, was sie sicher für den klinischen Einsatz macht.
Workflow der Gentherapie
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Kontaminationskontrolle
Die Verschleppung von restlicher Wirtszell-DNA (Host-Cell DNA, HCD) stellt bei der Herstellung von Protein- und Impfstoff-Therapeutika ein wesentliches Sicherheitsrisiko dar. Zu den Risiken zählen durch Ihr Zell- oder Gentherapieprodukt verursachte Onkogenität, Infektiosität und Immunogenität. Aus diesem Grund dürfen die HCD-Konzentrationen nicht die durch Regulierungsbehörden wie die US Food and Drug Administration und die Weltgesundheitsorganisation festgelegten Werte überschreiten.
Verglichen mit der qPCR bietet die digitale PCR eine höhere Nachweissensitivität bei geringeren eingesetzten Templatemengen, wodurch robustere Applikationen möglich werden. Ein Multicopy-Target-Assay gewährleistet, dass die Ergebnisse nicht durch den Fragmentierungsgrad der Rest-DNA (resDNA), ein Problem bei der qPCR, beeinflusst werden.
Darüber hinaus kann kontaminierende DNA in Ihren PCR-Reagenzien eine signifikante Quelle von Hintergrund und falsch positiven Ergebnissen sein. Ultra Clean Production erhöht die Spezifität und Effizienz der sondenbasierten digitalen PCR für eine genaue Singleplex- oder bis zu 5-plex-Analyse. Dedizierte Prozesse werden implementiert, um die Ultra Clean Production des Master-Mix zu ermöglichen und so den Hintergrund an kontaminierender DNA und GC-bedingte systematische Messabweichungen zu minimieren, damit Sie Ihren PCR-Reagenzien voll und ganz vertrauen können. Durch diese Eigenschaften eignet sich der Master-Mix ideal für kontaminationsfreie mikrobielle Applikationen sowie Qualitätskontroll-Applikationen wie das Testen auf Rest-DNA.
