PCRの新たな絶対–デジタルPCR

デジタルPCRの力 – 干し草の山から1本の針を見つける

デジタルPCR（dPCR）はサンプルを多数の個別の反応に分割し、各反応に0個または1個以上のターゲット分子が存在するようにする技術です。このアプローチにより、典型的な「干し草の山の中の針」問題である強力な陰性のバックグラウンドに対してひとつの陽性を検出することが驚くほど容易になります。このような場合、検出限界が低いため、標準的なリアルタイム定量PCR（qPCR）は実行可能な方法としては除外されます。

デジタルPCRの決定的な特徴は、核酸の絶対定量です。パーティショニングの後、反応はエンドポイントPCRサイクルを受け、蛍光シグナルが存在するか（陽性反応）、存在しないか（陰性反応）、パーティションを分析します。この情報に基づいて、サンプル中に存在する分子の絶対数を計算できます。qPCRとは異なり、dPCRは標準曲線に依存しません。そのため、dPCRはqPCRよりも検出限界が低く、精度が高くなります。

コピー数多型分析、遺伝子発現定量、レアターゲット検出などの高感度アプリケーションにデジタルPCRを使用する研究者が増えています。この方法は、細胞および遺伝子治療研究、がん研究、感染症サーベイランス、食品検査などの進歩に貢献しています。

ドロップレットデジタルPCR技術と比べた利点

ナノプレートを使用するテクノロジーには、デジタルドロップレットPCR （ddPCR）と比較して大きなメリットがあります。

• 固定パーティションはサイズの変動と合体を防ぎます
• 密封したナノプレートはウェルからウェルへの汚染を防ぎます
• サンプルのすべてのパーティションを同時に読み取るので、より高速で読み取りが可能です
• ユーザーフレンドリーで使い慣れたプレートは、qPCRと同じようにピペッティングが簡単です
• プレートはフロントエンド自動化に適しています

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