Choisissez l’enzyme qu’il vous faut pour des échantillons mieux nettoyés et un traitement plus rapide
Les réactifs et les réactants résiduels peuvent compromettre les processus en aval. Utilisez la bonne préparation enzymatique pour nettoyer vos échantillons avant de passer à l’étape suivante. Accélérez et optimisez l’amplification et la transcription grâce à des additifs bien connus.
Enzymes pour le clivage et le nettoyage des réactifs résiduels
Le nettoyage enzymatique des échantillons d’ADN à l’exonucléase I, la DNase I, la RNase A, la protéinase K et autres nucléases et protéases permet d’éliminer les amorces, nucléotides et enzymes résiduels avant une analyse des SNP, un séquençage à haut débit, un séquençage d’ADN de Sanger, un bioprocédé ou d’autres procédures en aval.
La protéinase K est une endopeptidase à large spectre communément utilisée pour la digestion des protéines, notamment les DNases et RNases. Une étape de digestion enzymatique est souvent appliquée lors de la préparation d’acides nucléiques sans aucune incidence sur l’intégrité de l’ADN ou de l’ARN isolé. La protéinase K est active dans des conditions de réaction très diverses, notamment à des températures élevées et en présence de laurylsulfate de sodium (SDS).
Une protéinase K de qualité NGS est disponible pour la plupart des applications les plus exigeantes, comme la préparation d’acides nucléiques pour le séquençage à haut débit. Une purification supplémentaire donne un produit enzymatique de haute qualité avec une activité spécifique accrue, une solubilité nettement supérieure (× 2,5) et une pureté remarquable avec un contenu d’ADN ≤ 0,1 pg/mg. La protéinase K de qualité NGS est dépourvue d’exonucléases, d’endonucléases et de ribonucléases.
L’enzyme DAPase TAGZyme et le système TAGZyme sont utilisés pour l’extraction de l’étiquette His à partir de protéines contenant un point d’arrêt de la DAPase intrinsèque (exprimé avec le vecteur pQE-2 TAGZyme) ou à partir de protéines contenant un point d’arrêt de la glutamine défini.
Il existe toute une gamme d’enzymes domestiques pour le clivage et le nettoyage des réactifs résiduels.
Enzymes visant à améliorer le rendement
Vous pouvez améliorer le rendement et la qualité de PCR des matrices en utilisant des protéines qui viennent contrer les inhibiteurs de PCR et en ajoutant des protéines de liaison à l’ADN spécifiques aux réactions d’amplification et de séquençage. La protéine de liaison à l’ADN, la protéine du gène 32 issue du bactériophage T4 (T4gp32), accroît l’efficacité de l’amplification par PCR avec un certain nombre de matrices diverses. En outre, l’utilisation de la protéine de liaison à l’ADN simple brin (SSB) E. coli dans les réactions de séquençage d’ADN accroît la résolution des cycles de séquençage.
Un meilleur taux de transcription in vitro est possible grâce à un traitement à la pyrophosphatase inorganique, un composant essentiel des réactions pour la préparation d’ARN. Cette enzyme clive le pyrophosphate en deux molécules de phosphate et empêche la précipitation du pyrophosphate avec le magnésium.
* Cette réaction hautement exergonique peut être associée à des transformations biochimiques défavorables pour que ces transformations arrivent à leur terme.
† Pousse l’équilibre chimique vers la synthèse de l’ADN en éliminant le pyrophosphate de la réaction. Cette enzyme ne peut être inactivée par la chaleur, elle conserve une pleine activité après une incubation de plusieurs heures à 100 °C.
Clivage de brin UDG
Le clivage de brin par UDG est un outil important en biotechnologie moléculaire, il permet le clivage contrôlé et localisé d’ADN simple brin et double brin synthétisé de façon chimique ou enzymatique avec une ou plusieurs intégrations de désoxyuridine (dUTP).
Découvrez les enzymes utilisées pour le nettoyage enzymatique et l’amélioration du rendement
FAQ sur la réduction des artefacts et le nettoyage de réaction
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