HiSpeed Plasmid Mega 和 Giga EF Kits

• 制备时间约 50 分钟
• 无需离心实现裂解物澄清和异丙醇沉淀
• 沉淀过程中无 DNA 颗粒损失风险
• 高拷贝质粒 DNA 产量高达 10 mg
• LyseBlue 可实现最优裂解和最大 DNA 产量
• 包括内毒素去除 (<0.04 EU/μg DNA)

HiSpeed Plasmid Mega 和 Giga EF Kits 提供基于阴离子交换的真空驱动大规模质粒 DNA 制备，只需一个离心步骤即可洗脱最终质粒 DNA。纯化后的 DNA 与通过 2 论 CsCl 梯度离心得到的 DNA 相当，适合用于转染级应用。该方案需要使用 QIAvac HiSpeed LS 真空歧管。

HiSpeed EF Mega Giga Kits 必须与 QIAvac HiSpeed LS 一起使用。

HiSpeed Plasmid Mega 和 Giga EF Kits 包含 QIAfilter Cartridges、HiSpeed Tips 和 QIAconcentrator 模块，用于使用真空歧管进行快速的大规模质粒制备。真空驱动 QIAfilter 模块取代了传统阴离子交换程序中的离心步骤，使纯化更快、更方便。QIAconcentrator 可在乙醇沉淀后通过离心提供高浓度 DNA。可从 500 ml 或 2.5 L 培养液中分别纯化高达 2.5 mg (Mega) 或 10 mg (Giga) 高拷贝质粒 DNA（培养液量取决于质粒拷贝数、插入片段大小、宿主菌株和培养基）。HiSpeed Tip 设计可实现很高的流速，让质粒纯化的 DNA 结合、洗涤和洗脱步骤执行速度更快。HiSpeed 提取的质粒 DNA 不含内毒素 (<0.04 EU/µg DNA)。

HiSpeed Tips 中独特的阴离子交换树脂专为纯化核酸而开发。其卓越的分离性能可使 DNA 纯度相当于或优于连续两轮 CsCI 梯度离心所获的纯度。HiSpeed Plasmid Mega 和 Giga EF Kits 可去除裂解步骤中释放的细菌内毒素，这些内毒素会影响 DNA 向原代细胞和敏感培养细胞中的转染。从 HiSpeed Plasmid Mega/Giga EF Kits 中获得的不含内毒素 DNA 非常适合用于获得可重现且可靠的转染结果。QIAGEN 超纯无内毒素 DNA 也适用于基因治疗研究和其他敏感应用。

QIAfilter Cartridges（见图“ QIAfilter Mega-Giga Cartridge”）是专用过滤装置，设计用于替代细菌细胞碱裂解后的离心步骤。QIAfilter Cartridges 只需离心分离所需的一小部分时间即可完全去除 SDS 沉淀并澄清细菌裂解物。预包装 HiSpeed Tips 靠重力流工作，永远不会干涸，从而尽量减少质粒制备所需的手动操作时间。

独特的 QIAconcentrator（见图“ HighSpeed Plasmid Giga EF 程序”）取代了传统上纯化后用于收集异丙醇沉淀 DNA 的离心步骤。QIAconcentrator 模块在异丙醇-缓冲液混合物流过时捕获沉淀的 DNA。然后用 TE 缓冲液或水将 DNA 从 QIAprecipitator 中简单地洗脱到采样管中。这一独特模块还消除了颗粒损失风险，该风险可能发生在离心后倾析上清液时。

内毒素又称脂多糖或 LPS，是 E. coli 等革兰氏阴性菌的细胞膜成分（见图“ 细菌细胞壁”）。内毒素在质粒纯化的裂解步骤中释放，它们会显著降低内毒素敏感细胞系的转染效率。此外，在转染实验中，内毒素会与 DNA 竞争“自由”转染试剂，从而影响质粒 DNA 的摄取。

内毒素还会诱导巨噬细胞和 B 细胞等免疫细胞的非特异性免疫反应激活，这可能导致对转染结果产生错误解读。这些反应包括诱导蛋白质和脂质（如 IL-1 和前列腺素）的合成。总之，内毒素是转染实验设置中的一个不可控变量，会影响结果的结局和重复性，令其难以比较和解读。在基因治疗研究中，内毒素会通过引起内毒素休克综合征和激活补体级联造成干扰。>

中和的细菌裂解物在 QIAfilter Cartridge 中孵育，数秒内通过真空澄清。在此阶段，向过滤后的裂解物中加入 Endotoxin Removal Buffer。无需孵育。将滤液倒入 HiSpeed 吸头进行质粒 DNA 纯化（见图“ HighSpeed Plasmid Giga EF 程序”）。将洗脱 DNA 与异丙醇混合，然后用真空吸入 QIAconcentrator 并洗涤。然后用 TE 缓冲液或水将浓缩并脱盐的 DNA 从 QIAconcentrator 中直接洗脱到一个新的采样管中。

使用 HiSpeed Plasmid Mega 和 Giga EF Kits 纯化的 DNA 在从克隆和测序到转染非常敏感的细胞和原代细胞以及质粒介导基因沉默等所有应用中都能获得优异的结果。