miRNeasy 96 Advanced QIAcube HT Kit

• Isolement de miARN exempt de phénol à partir d’échantillons de sérum et de plasma humain, de souris ou de rat
• Un traitement automatisé simple et fiable pour économiser du temps et de l’argent
• MiARN de haute qualité pouvant être utilisé dans toute application en aval
• Des rendements homogènes de miARN à partir de petites quantités de matériels de départ

Le miRNeasy 96 Advanced QIAcube HT Kit est conçu pour une purification automatisée à haut débit de l’ARN total libre (principalement du miARN et d’autres petits ARN) à partir de faibles volumes de sérum et de plasma sur le QIAcube HT. Grâce à la technologie éprouvée RNeasy avec membrane de silice dans un format pratique de 96 puits, les contaminants et inhibiteurs sont éliminés pour ne garder qu’un ARN de haute qualité prêt à être utilisé dans les analyses en aval.

Le miRNeasy 96 Advanced QIAcube HT Kit est la version à moyen ou haut débit du miRNeasy Serum/Plasma Advanced Kit et fournit le même rendement et la même qualité d’ARN à l’aide d’une technologie d’isolement sans phénol (voir les figures  Performances comparables à celles d’un kit manuel utilisant les mêmes volumes et  Performances comparables à celles d’un kit manuel utilisant les mêmes quantités d’ARN). Le miRNeasy 96 Advanced QIAcube HT Kit isole efficacement l’ARN total, y compris le miARN, à partir d’échantillons de sérum et de plasma humains et animaux entre 50 µl et 200 *l ( Traitement de différentes quantités de plasma). Le kit est compatible avec la plupart des dispositifs de prélèvement sanguin (voir la figure  Compatibilité avec différents tubes de prélèvement sanguin). Le protocole sans phénol utilise la technologie de colonnes de centrifugation facile à automatiser au format de 96 puits et réduit au minimum le temps de manipulation. Contrairement aux kits d’autres fournisseurs, le miRNeasy 96 Advanced QIAcube HT Kit combine facilité d’utilisation et protocole sans phénol sans renoncer à la qualité ou au rendement de l’ARN (voir la figure  Rendements ou performances comparables ou supérieurs).

Le miRNeasy 96 Advanced QIAcube HT Kit assure une purification automatisée de l’ARN total libre (principalement du miARN et d’autres petits ARN) à partir de sérum et de plasma humains et animaux entre 20 et 200 µl à l’aide de l’instrument QIAcube HT. Les propriétés de liaison sélective d’une membrane de silice sont associées à un format à haut débit de 96 puits pour le traitement simultané et entièrement automatisé de 24 à 96 échantillons sur l’instrument QIAcube HT. Le kit associe la lyse des échantillons basée sur la guanidine, une étape d’élimination des inhibiteurs et une purification basée sur la membrane de silice de l’ARN total.

Le système fournit deux protocoles : un protocole de transfert pour déplacer le lysat de l’étape de précipitation de protéines jusqu’à la plaque Rneasy 96 et un protocole d’isolement de l’ARN libre afin d’extraire le miARN du lysat. Les procédures donnent un ARN de haute qualité qui se révèle performant dans les applications en aval.

La lyse est effectuée manuellement dans des conditions hautement dénaturantes avec de la guanidine thiocyanate pour inactiver immédiatement les RNases et assurer la purification de l’ARN intact (voir la figure  Procédure du miRNeasy 96 Advanced QIAcube HT Kit).

Après le démarrage du cycle d’exécution, de l’isopropanol est ajouté au surnageant contenant de l’ARN afin de fournir les conditions de liaison appropriées à l’ensemble des molécules d’ARN provenant d’environ 18 nucléotides (nt). Les échantillons sont par la suite transférés (manuellement ou automatiquement) aux puits de la plaque RNeasy 96. Les liaisons et les contaminants de l’ARN total sont éliminés efficacement. L’ARN de haute qualité est ensuite élué dans de l’eau sans RNase et est prêt à être utilisé dans toute application en aval.

Le miRNeasy 96 Advanced QIAcube HT Kit isole l’ARN total libre et exosomal du plasma ou du sérum. Parmi les applications en aval :

• La découverte de biomarqueurs
• Le profilage d’expression
• Séquençage à haut débit
• Real-time RT-PCR quantitative
• Analyse de puce à ADN