对纯化效果进行琼脂糖凝胶分析

Agarose gel analysis of plasmid DNA
通过琼脂糖凝胶分析评估质粒DNA的质量
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DNA的产率和质量可通过琼脂糖凝胶电泳进行便利的分析。造成较低的产率和质量的可能因素有很多。为了确定存在问题的环节,可于每一纯化步骤都保留一小部分样品,并通过琼脂糖凝胶电泳进行分析。
制备样本 
如各个实验方案和下列表格中所示,从澄清裂解液(样本1)、流出液(样本2)、QC洗涤缓冲液的混合组分(样本3)和QF/QN缓冲液洗脱产物(样本4)中各取出部分样品。使用1倍体积的异丙醇沉淀核酸,并使用70%的乙醇洗涤该沉淀,充分蒸干后重悬于10 µl pH8.0的TE缓冲液中。 

琼脂糖凝胶分析所需样本体积
样本 实验方案步骤 Midi Maxi Mega Giga (极低拷贝数质粒/科斯质粒) 
QIAGEN-tip 100
(极低拷贝数质粒/科斯质粒)QIAGEN-tip 500
1 240 µl 120 µl 120 µl 75 µl 600 µl 750 µl
2 240 µl 120 µl 120 µl 75 µl 50 µl 24 µl
3 400 µl 240 µl 160 µl 120 µl 200 µl 120 µl
4 100 µl 60 µl 22 µl 20 µl 50 µl 30 µl
(制备产物占样本量的百分比) 2% 0.40% 0.08% 0.02% 1% 0.20%


琼脂糖凝胶分析 
在1%的琼脂糖凝胶*中,对于各个质粒纯化步骤中的对应样品各加入2 µl进行电泳。本图显示的是包含了不同组分的分析胶样图,以及每一步出现问题的可能样例。如果您发现了实验中某一特定步骤存在问题,请参阅手册中问题疑难排解指南的相关章节和提示。如果问题仍无法解决,亦或您有更进一步的疑问,请联系QIAGEN的技术服务部门。

*当操作化学品时,请一直穿着合适的实验服、一次性手套和护目镜。需要更多相关信息,请向产品供应商获取相应的安全性数据表(SDS)。

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