DNA的产率和质量可通过琼脂糖凝胶电泳进行便利的分析。造成较低的产率和质量的可能因素有很多。为了确定存在问题的环节,可于每一纯化步骤都保留一小部分样品,并通过琼脂糖凝胶电泳进行分析。
制备样本
如各个实验方案和下列表格中所示,从澄清裂解液(样本1)、流出液(样本2)、QC洗涤缓冲液的混合组分(样本3)和QF/QN缓冲液洗脱产物(样本4)中各取出部分样品。使用1倍体积的异丙醇沉淀核酸,并使用70%的乙醇洗涤该沉淀,充分蒸干后重悬于10 µl pH8.0的TE缓冲液中。
| 1 |
|
240 µl |
120 µl |
120 µl |
75 µl |
600 µl |
750 µl |
| 2 |
|
240 µl |
120 µl |
120 µl |
75 µl |
50 µl |
24 µl |
| 3 |
|
400 µl |
240 µl |
160 µl |
120 µl |
200 µl |
120 µl |
| 4 |
|
100 µl |
60 µl |
22 µl |
20 µl |
50 µl |
30 µl |
| (制备产物占样本量的百分比) |
2% |
0.40% |
0.08% |
0.02% |
1% |
0.20% |
琼脂糖凝胶分析
在1%的琼脂糖凝胶*中,对于各个质粒纯化步骤中的对应样品各加入2 µl进行电泳。本图显示的是包含了不同组分的分析胶样图,以及每一步出现问题的可能样例。如果您发现了实验中某一特定步骤存在问题,请参阅手册中问题疑难排解指南的相关章节和提示。如果问题仍无法解决,亦或您有更进一步的疑问,请联系QIAGEN的技术服务部门。
*当操作化学品时,请一直穿着合适的实验服、一次性手套和护目镜。需要更多相关信息,请向产品供应商获取相应的安全性数据表(SDS)。