QuantiFast SYBR® Green RT-PCR Kit

For fast, one-step qRT-PCR using SYBR Green I for gene expression analysis

  • Faster results with time savings of up to 60%
  • Sensitive detection of even low copy numbers
  • Accurate detection of a wide range of template amounts
  • Optimized, ready-to-use master mix for fast cycling
  • Universal protocol for all standard and fast cyclers
The QuantiFast SYBR Green RT-PCR Kit delivers fast and specific quantification of RNA targets by real-time one-step RT-PCR using SYBR Green I detection. Q-bond technology and an optimized, ready to use master mix enable shorter real-time  RT-PCR run times, not only on fast cyclers with short ramping times, but also on standard cyclers. The combination of a hot start and a unique qRT-PCR buffer system ensures highly specific and sensitive real-time quantification of RNA targets. The QuantiFast SYBR Green RT-PCR Kit is also supplied with an optimized RT mix for efficient cDNA synthesis in only 10 minutes. For convenience, the master mix can be stored at 2–8°C.
製品名 Cat. no. List price:
QuantiFast SYBR Green RT-PCR Kit (400)
For 400 x 25 µl reactions: 3 x 1.7 ml 2x QuantiFast SYBR Green RT-PCR Master Mix (contains ROX dye), 100 µl QuantiFast RT Mix, 2 x 2 ml RNase-Free Water
204154
¥102,000
QuantiFast SYBR Green RT-PCR Kit (2000)
For 2000 x 25 µl reactions: 25 ml 2x QuantiFast SYBR Green RT-PCR Master Mix (contains ROX dye), 0.5 ml QuantiFast RT Mix, 20 ml RNase-Free Water
204156
¥426,000

QuantiFast SYBR® Green RT-PCR Kit  は分子生物学実験用です。疾病の診断、治療または予防の目的には使用することはできません。


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RT-PCR時間を顕著に短縮|特異的な1ステップRT-PCR|107倍希釈したテンプレートの検出|特異的なプライマーアニーリング|プライマーの高速なアニーリング|
QuantiFast SYBR® Green RT-PCR Kitは、標準的なサイクラーで1ステップリアルタイムRT-PCRのトータルRT-PCR時間を最大60%短縮する(40サイクルで融解曲線解析なし、標準的なQIAGENリアルタイムPCRキットと比較)。L:LightCycler 2.0、A1:ABI PRISM 7900、A2:Applied Biosystems 7500、A3:ABI PRISM 7000。|HeLa細胞のBCL2(アポトーシス遺伝子)発現をLightCycler 2.0上で、1ステップRT-PCRで解析した。RNAの10倍段階希釈液(0.1 ng~100 ng)を用いてduplicateで反応を行なった。[B] Supplier Rの機器専用キット(高速サイクリングプロトコールを使用)と異なり、[A] QuantiFast SYBR® Green RT-PCR Kitは特異的な増幅(融解曲線解析でシングルピーク)および高感度定量(CT値がより低く、各濃度ごとの間隔が均等)を実現した。|QuantiFast SYBR® Green RT-PCR Kitは、Applied Biosystems 7500 Fast System上の1ステップRT-PCR反応で幅広いダイナミックレンジにわたり、HSP89(ヒートショックタンパク質)の転写物を正確に定量した。in vitro転写物の10倍段階希釈液(107~10コピー数)を用いてtriplicateで反応を行なった。|バランスの取れたKClおよび(NH4)2SO4の組み合わせは、プライマーおよびプローブのPCRテンプレートに対する特異的なアニーリングを促進する。K+は二本鎖DNAのリン酸基に結合し、プライマーとプローブのアニーリングを安定化する。NH4+は、ミスマッチな塩基対間の水素結合を不安定化する。|[A] QuantiFast Buffer中のQ-Bondは、短い一本鎖化したDNAへのDNAポリメラーゼの結合アフィニティーを増大させるため、プライマーのアニーリング時間を数秒間に短縮できる。さらにDNAの融解をサポートするユニークなバッファー組成が、変性およびエクステンション時間を短縮する。[B] Q-Bond が存在しないと、プライマーとポリメラーゼが連続的にテンプレートに結合するのでプライマーのアニーリングに時間がかかる。|
パフォーマンス

The QuantiFast SYBR Green RT-PCR Kit delivers highly specific and sensitive results, outperforming other real-time RT-PCR kits used in fast cycling mode (see figure "Specific one-step RT-PCR"). RT-PCR run times are reduced by up to 60% (see figure "Significantly reduced PCR times"), allowing you to get results faster. You can also greatly increase your sample throughput or efficiently share a cycler with other users.

Results in one-step RT-PCR are comparable to those achieved in two-step RT-PCR (see table).

Comparable performance in two-step and one-step RT-PCR on the Applied Biosystems 7500 Fast System
Mean CT value
Amount of cDNA/RNA QuantiFast SYBR Green PCR Kit (two-step RT-PCR) QuantiFast SYBR Green RT-PCR Kit (one-step RT-PCR)
10 ng 20.27 20.11
1 ng 23.44 23.46
0.1 ng 27.18 26.86
NTC 45.00 45.00
Similar CT values were achieved in two-step and one-step RT-PCR analysis of the expression of AK2 (an adenylate kinase) in T98G cells. Reactions were run in triplicate. NTC: no template control.

QuantiFast SYBR Green RT-PCR Kit enables accurate quantification of targets over several log dilutions of template (see figure "Detection over 7 logs of template"). Even small differences in the amount of low-copy targets can be clearly distinguished.

原理

The QuantiFast SYBR Green RT-PCR Kit delivers highly sensitive and specific results over a wide dynamic range on both standard and fast cyclers. The fluorescent dye SYBR Green I in the master mix enables the analysis of many different targets without having to synthesize target-specific labeled probes. A specially developed fast RT-PCR buffer contains the novel PCR additive Q-Bond, which significantly reduces denaturation, annealing, and extension times (see figure "Fast primer annealing"). A balanced combination of K+ and NH4+ ions in the PCR buffer promotes specific primer annealing, enabling high RT-PCR specificity and sensitivity (see figure "Specific primer annealing"). In addition, HotStarTaq Plus DNA Polymerase requires only 5 minutes at 95°C for activation and provides a stringent hot start, preventing the formation of nonspecific products. The optimized QuantiFast RT Mix enables cDNA synthesis in just 10 minutes. 

Components of 2x QuantiFast SYBR Green RT-PCR Kit*
ComponentFeatures and benefits Benefits
HotStarTaq Plus DNA Polymerase 5 min activation at 95ºC Set up of qPCR reactions at room temperature
QuantiFast SYBR Green RT-PCR Buffer Balanced combination of NH4+ and K+ ions Specific primer annealing ensures reliable PCR results
Unique Q-Bond additive Faster PCR run times, enabling faster results and more reactions per day
SYBR Green I dye Yields a strong fluorescent signal upon binding to double-stranded DNA Highly sensitive quantification
ROX dye Normalizes fluorescent signals on Applied Biosystems and, optionally, Agilent instruments Precise quantification on cyclers that require ROX dye. Does not interfere with PCR on any real-time cycler
QuantiFast RT Mix Special blend of reverse transcriptases with high affinity for RNA RNA can be transcribed in just 10 minutes, even through complex secondary structures
* Also contains dNTP mix (dATP, dCTP, dGTP, dTTP).
操作手順

The QuantiFast SYBR Green RT-PCR Kit is a ready-to-use master mix that eliminates the need for optimization of reaction and cycling conditions. Simply add primers and template to the ready-to-use PCR master mix, and start the reaction. Follow the protocol in the handbook to get fast and reliable results on any real-time cycler.

For optimal results in real-time, one-step RT-PCR, we recommend using the QuantiFast SYBR Green RT-PCR Kit in combination with QuantiTect Primer Assays. They are bioinformatically validated primer sets for any gene from human, mouse, rat, and many other species. Assays can be easily ordered online at the GeneGlobe Web portal.

アプリケーション

The QuantiFast SYBR Green RT-PCR Kit is for use in gene expression analysis of RNA targets. QuantiFast SYBR Green RT-PCR Kits are compatible with all available real-time cyclers, including instruments from Applied Biosystems, Bio-Rad, Cepheid, Eppendorf, Roche, and Agilent. For the Rotor-Gene Q and other Rotor-Gene cyclers, we recommend using the Rotor-Gene SYBR Green RT-PCR Kit, which has been specially developed for fast cycling on these instruments.

Feature
Specifications
Applications SYBR Green-based, real-time, one-step RT-PCR
Reaction type Real-time and one-step RT-PCR
Real-time or endpoint Real-time
Sample/target type RNA
Single or multiplex Single
SYBR Green I or sequence-specific probes SYBR Green I
Thermal cycler All real-time cyclers (e.g. LC, RG, ABI)
With or without ROX With ROX

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FAQ
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FAQ ID -849
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キットハンドブック
4
For fast, quantitative, real-time, one-step RT-PCR using SYBR Green I
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For genomewide, ready-to-use real-time RT-PCR assays using SYBR Green detection
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ゲノムワイドで即使用可能なリアルタイムRT-PCRアッセイ(SYBR Green検出)用
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SYBR Green I を用いた高速な1ステップ・リアルタイム定量RT-PCR
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MSDS
1
Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
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画像
Significantly reduced PCR times
RT-PCR時間を顕著に短縮
QuantiFast SYBR® Green RT-PCR Kitは、標準的なサイクラーで1ステップリアルタイムRT-PCRのトータルRT-PCR時間を最大60%短縮する(40サイクルで融解曲線解析なし、標準的なQIAGENリアルタイムPCRキットと比較)。L:LightCycler 2.0、A1:ABI PRISM 7900、A2:Applied Biosystems 7500、A3:ABI PRISM 7000。
Specific one-step RT-PCR on the LightCycler 2.0.
特異的な1ステップRT-PCR
HeLa細胞のBCL2(アポトーシス遺伝子)発現をLightCycler 2.0上で、1ステップRT-PCRで解析した。RNAの10倍段階希釈液(0.1 ng~100 ng)を用いてduplicateで反応を行なった。[B] Supplier Rの機器専用キット(高速サイクリングプロトコールを使用)と異なり、[A] QuantiFast SYBR® Green RT-PCR Kitは特異的な増幅(融解曲線解析でシングルピーク)および高感度定量(CT値がより低く、各濃度ごとの間隔が均等)を実現した。
Detection over 7 logs of template in one-step RT-PCR ont eh Applied Biosystems 7500 Fast System.
107倍希釈したテンプレートの検出
QuantiFast SYBR® Green RT-PCR Kitは、Applied Biosystems 7500 Fast System上の1ステップRT-PCR反応で幅広いダイナミックレンジにわたり、HSP89(ヒートショックタンパク質)の転写物を正確に定量した。in vitro転写物の10倍段階希釈液(107~10コピー数)を用いてtriplicateで反応を行なった。
Specific primer annealing using a balanced combination of K+ and NH4+ ions
特異的なプライマーアニーリング
バランスの取れたKClおよび(NH4)2SO4の組み合わせは、プライマーおよびプローブのPCRテンプレートに対する特異的なアニーリングを促進する。K+は二本鎖DNAのリン酸基に結合し、プライマーとプローブのアニーリングを安定化する。NH4+は、ミスマッチな塩基対間の水素結合を不安定化する。
Fast primer annealing with Q-Bond
プライマーの高速なアニーリング
[A] QuantiFast Buffer中のQ-Bondは、短い一本鎖化したDNAへのDNAポリメラーゼの結合アフィニティーを増大させるため、プライマーのアニーリング時間を数秒間に短縮できる。さらにDNAの融解をサポートするユニークなバッファー組成が、変性およびエクステンション時間を短縮する。[B] Q-Bond が存在しないと、プライマーとポリメラーゼが連続的にテンプレートに結合するのでプライマーのアニーリングに時間がかかる。