miScript miRNA PCR Arrays

For SYBR® Green-based, real-time PCR profiling of miRNAs using the miScript PCR System

  • Sensitive and specific mature miRNA expression profiling
  • PCR arrays for pathway, disease, or miRNome profiling
  • Free online data analysis tools
miScript miRNA PCR Arrays are mature miRNA-specific forward primers (miScript Primer Assays) that have been arrayed in biologically relevant pathway-focused, disease-focused, or whole miRNome panels. miScript miRNA PCR Arrays are part of the miScript PCR System for miRNA detection and quantification. cDNA is prepared using the miScript II RT Kit with miScript HiSpec Buffer and is used as a template in real-time PCR with a miScript miRNA PCR Array and the miScript SYBR Green PCR Kit.

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miScript miRNA PCR Arrays は分子生物学実験用です。疾病の診断、治療または予防の目的には使用することはできません。


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Pathway-FocusedあるいはmiRNome miScript miRNA PCR Arrayレイアウト:プレートフォーマットA、C、D、F、M|miRNome miScript miRNA PCR Array およびmiScript miRNA HC PCR Array レイアウト: プレートフォーマットE、G|Pathway-Focused miScript miRNA PCR Arrayレイアウト: プレートフォーマットE、G|miScript miRNA PCR Arrayレイアウト: Rotor-Disc format R|miScript miRNA QC PCR Arrayレイアウト:プレートフォーマットA、C、D、F|miScript miRNA QC PCR Arrayレイアウト:プレートフォーマットE、G|miScript miRNA QC PCR Arrayレイアウト: Rotor-Disc format R|全miRNomeプロファイリング|血清あるいは血漿中の循環miRNAの発現解析|
ウェルA1~G12(1-84) はそれぞれパスウェイ/疾病/機能に関連するmature miRNA用miScript Primer Assayを含む。ウェルH1とH2はC. elegans miR-39 miScript Primer Assayのreplicateで、アレイデータの標準化にも使用可能 (Ce)。ウェルH3~H8には、アレイデータの標準化のためのコントロールとして使用する様々なsnoRNA/snRNA用アッセイが入っている(SN1=SNORD61アッセイ、SN2=SNORD68アッセイ、SN3=SNORD72アッセイ、SN4=SNORD95アッセイ、SN5=SNORD96Aアッセイ、SN6=RNU6B/RNU6-2アッセイ)。ウェルH9とH10は逆転写反応コントロール(miRTC)のreplicate。ウェルH11とH12はポジティブPCRコントロール(PPC)のreplicate。|ウェルA1~P12(1~372)はそれぞれパスウェイ/疾病/機能に関連するmature miRNA用miScript Primer Assayを含む。ウェルP13とP14はC. elegans miR-39 miScript Primer Assayのreplicateで、アレイデータの標準化にも使用可能 (Ce)。ウェルP15~P20には、アレイデータの標準化のためのコントロールとして使用する様々なsnoRNA/snRNA用アッセイが入っている(SN1=SNORD61アッセイ、SN2=SNORD68アッセイ、SN3=SNORD72アッセイ、SN4=SNORD95アッセイ、SN5=SNORD96Aアッセイ、SN6=RNU6B/RNU6-2アッセイ)。ウェルP21とP22は逆転写反応コントロール(miRTC)のreplicate。ウェルP23とP24はポジティブPCRコントロール(PPC)のreplicate。|フォーマットE、GのPathway-Focused miScript miRNA PCR Arrayは、96ウェルフォーマットA、C、D、Fで提供されている同じアッセイを4 replicatesで含む。|ウェル1~84はそれぞれパスウェイ/疾病/機能に関連する遺伝子に対応するmiScript Primer Assayを含む。ウェル85と86はC. elegans miR-39 miScript Primer Assayのreplicateで、アレイデータの標準化にも使用可能 (Ce)。ウェル87~92には、アレイデータの標準化のためのコントロールとして使用する様々なsnoRNA/snRNA用アッセイが入っている(SN1=SNORD61アッセイ、SN2=SNORD68アッセイ、SN3=SNORD72アッセイ、SN4=SNORD95アッセイ、SN5=SNORD96Aアッセイ、SN6=RNU6B/RNU6-2アッセイ)。ウェル93と94は逆転写反応コントロール(miRTC)のreplicate。ウェル95と96はポジティブPCRコントロール(PPC)のreplicate。ウェル97~100は空。|各列のウェル1と2はC. elegans miR-39 miScript Primer Assaysのreplicate(39)を含む。各列のウェル3はmiR-16 miScript Primer Assay (16)を含む。各列のウェル4はmiR-21 miScript Primer Assay(21)を含む。各列のウェル5はmiR-191 miScript Primer Assay (191)を含む。各列のウェル6 ~8は様々なsnoRNA(61 = SNORD61 assay, 95 = SNORD95 assay, 96A = SNORD96A assay)用アッセイを含む。各列のウェル9と10はmiRTC miScript Primer Assays(miRTC)のreplicate。各列のウェル11と12はポジティブPCRコントロール(PPC)のreplicate。これらのフォーマットでは最高8個のcDNAサンプルの品質評価が可能。|ウェル1~4 はC. elegans miR-39 miScript Primer Assays(39)をそれぞれreplicateで含む。 ウェル5 と 6は miR-16 miScript Primer Assays(16)をそれぞれreplicateで含む。 ウェル7と 8はmiR-21 miScript Primer Assays(21)をそれぞれreplicateで含む。ウェル9 と10はmiR-191 miScript Primer Assays(191)をそれぞれreplicateで含む。ウェル11~16はそれぞれ異なるsnoRNAs(61 = SNORD61 assay、95 = SNORD95 assay、96A = SNORD96A assay)が含まれている。ウェル17~20はmiRTC miScript Primer Assays(miRTC)をそれぞれreplicateで含む。 ウェル21~24はポジティブPCRコントロール(PPC)のそれぞれのreplicateが含まれる。このフォーマットは32 cDNAサンプルまでの品質評価が可能。|ウェル1と2は C. elegans miR-39 miScript Primer Assayのreplicate。ウェル3はmiR-16 miScript Primer Assayを含む。ウェル4はmiR-21 miScript Primer Assayを含む。ウェル5はmiR-191 miScript Primer Assay を含む。ウェル6 ~8は様々なsnoRNA(ウェル6 = SNORD61 assay、ウェル7 = SNORD95 assay、ウェル8= SNORD96A assay)用アッセイを含む。ウェル9と10はmiRTC miScript Primer Assays(miRTC)のreplicate。ウェル11と12はポジティブPCRコントロール(PPC)のreplicate。このパターンはウェル13~96までさらに7回繰り返される。ウェル97~100は空。このフォーマットでは最高8個のcDNAサンプルの品質評価が可能。|脱メチル化剤5-aza-2’-dC(5-aza-2’-deoxycytidine )で処理/未処理のHCT 116大腸がん細胞からトータルRNAを精製した。この試薬はDNAに取り込まれ、メチル化反応を起こすDNA methyltransferaseの活性部位に共有結合された結果、DNA methyltransferaseを不可逆的に阻害する。cDNAは、miScript HiSpec BufferとmiScript II RT Kitを用いて調製した。リアルタイムPCRによるmature miRNA発現のプロファイリングにHuman miRNome miScript miRNA PCR ArrayとmiScript SYBR® Green PCR Kitを使用した。オンラインのmiScript miRNA PCR Array Data Analysis Toolを用いてデータ解析を行なった。[A] 2-ΔCT 値のスキャッタープロットは、2種類のサンプルのmature miRNA発現レベルで有意な差異を証明している。[B] ボルケーノプロットは、制御されたmiRNA(±4-foldをカットオフとして使用し、赤線で示す)を示す。5-aza-2’-dC処理したHCT116細胞では、104種類のmiRNAが強くアップレギュレートされ、30種類が強くダウンレギュレートされた。p値で0.05を用いると(青線で記載)、104種類のmiRNAのうち89種類のアップレギュレーションが、また30種類のmiRNAのうち21種類のダウンレギュレーションで有意差があった。|健常および大腸がんの血清サンプル由来のプールしたRNAの相対的なmiRNA発現レベルを、Human Serum & Plasma miScript miRNA PCR Arrayで解析したスキャッタープロットを示す。|
パフォーマンス
Discover biomarkers in serum or plasma samples

The range of pathway-focused miScript miRNA PCR Arrays is continually expanding to enable new discoveries about the roles of miRNAs in biological processes. The content of miScript miRNA PCR Arrays is selected using our proprietary methodology, which ensures that each array is up-to-date and biologically relevant. One of the most exciting areas of current miRNA research involves the assessment of miRNAs present in serum or plasma samples. The discovery of relatively stable, extracellular miRNAs in serum and plasma has generated huge interest in the use of changes in these miRNA levels as potential noninvasive biomarkers for a variety of diseases. As a result, the Serum & Plasma miScript miRNA PCR Array has been developed. This array enables rapid profiling of the 84 most relevant miRNAs associated with serum and plasma (see figure "Analysis of expression of circulating miRNAs in serum or plasma").

Profile entire miRNomes with a single cDNA sample

In addition to pathway-focused arrays, up-to-date miRNome miScript miRNA PCR Arrays are available for a variety of species including human, mouse, rat, dog, and rhesus macaque. With less than 1 µg RNA, the entire human miRNome can be rapidly profiled (see figure "Whole miRNome profiling"). Each assay in a miScript miRNA PCR Array has been bench verified to ensure sensitive and specific detection of mature miRNA by real-time PCR.

原理

The miScript PCR System enables sensitive, specific miRNA quantification and profiling using SYBR Green real-time PCR. The miScript PCR System covers all the steps involved in conversion of RNA to cDNA and subsequent real-time PCR detection of miRNAs.

Mature miRNA profiling with the miScript PCR System uses the following components:

miScript II RT Kit — this kit enables simple, single-step cDNA synthesis. A single cDNA synthesis reaction can be used for detection of hundreds of miRNAs. The dual buffer system meets the distinctive needs of miRNA quantification using real-time PCR.
miScript PreAMP PCR Kit and Primer Mixes — this kit enables an optional preamplification step when working with limited RNA amounts.
miScript SYBR Green PCR Kit — this kit includes QuantiTect SYBR Green PCR Master Mix and the miScript Universal Primer, a reverse primer that allows detection of miRNAs in combination with a miScript Primer Assay or miScript miRNA PCR Array.
miScript miRNA PCR Array — Cutting-edge miScript miRNA PCR Arrays consist of mature miRNA-specific forward primers (miScript Primer Assays) arrayed in biologically relevant pathway- or disease-focused panels or miRNome panels. 
操作手順

The miScript miRNA PCR Array Service includes:

Total RNA (including miRNA) purificationPurification of total RNA from cells, tissues, blood, formalin-fixed paraffin-embedded (FFPE) samples, laser capture microdissection (LCM) samples, fine needle aspiration biopsies (FNAB), and other small samples if required Reverse transcription using the miScript II RT KitmiRNA profiling using a pathway-focused, disease-focused, or whole miRNome miScript miRNA PCR ArrayData analysis

Sample processing

For instructions regarding sample submission and shipping, contact QIAGEN Technical Services. Samples accepted are total RNA, cells, or tissue. An RNA Isolation Service is provided if required.

Before shipping:

Obtain a sample submission form from QIAGEN Technical Services. Complete the form and include it with the sample shipment. Include the amount of material and its storage conditions. Sign and date the form. Ship according to the instructions for your sample type.

Submitting cells or tissue samples

All sample collection should be carried out in a timely manner in an RNase free environment. Pay close attention to the minimum sample amounts required. If you have less than these minimum amounts, or your previously isolated samples have been stored differently then we recommend, contact QIAGEN Technical Services before submitting your samples.

Cells:

Provide at least 1 million (106) cells for each sample. Specify the number of cells on the order form. Snap freeze the cell pellets in liquid nitrogen. Alternatively, provide homogenized cell lysates (see the miRNeasy Mini Handbook for details of lysis using QIAzol Lysis Reagent) Store samples frozen at -80 ºC, and ship on dry ice.

Tissue:

If possible, provide at least 50 mg of tissue for each sample. If possible, specify the weight of the tissue on the order form. Upon collection, stabilize samples in RNAprotect Tissue Reagent or AllProtect Tissue Reagent overnight. After overnight incubation, remove excess reagent before freezing. Snap freeze tissues in liquid nitrogen. Store samples frozen at -80 ºC, and ship on dry ice.

FFPE samples:

Consult QIAGEN Technical Services before isolating and submitting samples, and preferably before sample collection. For slide-mounted tissue sections, submit at least 4 slides with at least 5- to 10-micron thick sections. More slides may be requested from certain tissue sources, if available. For freshly cut sections of whole FFPE blocks, submit three to four 20-micron thick sections. Specify fixation procedure and age of samples. Store and ship at ambient temperature.

LCM samples:

Consult QIAGEN Technical Services before isolating and submitting samples. Store samples frozen at -80 ºC, and ship on dry ice.

FNAB and other small samples:
Consult QIAGEN Technical Services before isolating and submitting samples.

Other sample types:

Consult QIAGEN Technical Services before isolating and submitting samples.

Submitting purified RNA

RNA samples are very sensitive to RNase digestion. Wear gloves and maintain an RNase-free work area while purifying RNA.

Recommended RNA purification methods
Sample type Method
Cultured cells miRNeasy Kit or RNeasy Plus Kit (used with QIAGEN Supplementary Protocol: Purification of miRNA from animal cells using the RNeasy Plus Mini Kit and RNeasy MinElute Cleanup Kit) or RNeasy Plus Micro Kit
Tissue miRNeasy Kit
FNAB miRNeasy Kit
FFPE samples miRNeasy FFPE Kit
LCM samples miRNeasy FFPE Kit for samples from FFPE sections; miRNeasy Kit for samples from cryosections
Small samples yielding less than 100 ng total RNA miRNeasy Kit
Whole blood Before RNA preparation, red blood cells must be removed from whole blood samples using either selective lysis (e.g., as described in the QIAamp RNA Blood Mini Handbook) or a density gradient centrifugation medium (e.g., Lymphoprep, Greiner Bio-One [cat. no. 1031966]). RNA should then be purified from the white blood cell fraction using the miRNeasy Mini Kit. Alternative methods of RNA purification include use of the PAXgene Blood RNA Kit.
Total RNA isolated using a phenol-based method Clean up the RNA using an miRNeasy Kit
Other sample types Contact QIAGEN Technical Services
 

For best results from the PCR Array, all RNA samples should be suspended in the RNase-free water provided with the RNA Isolation kit. Do not use DEPC-treated water.

Note: Total RNA preps are highly suitable for use with the miScript miRNA PCR Array Service. It is not necessary to provide small RNA-enriched preps.

Quality control

We recommend verifying the quality of purified RNA using UV spectrophotometry. Please submit the results to the miScript miRNA PCR Array Service for evaluation.
To assess RNA quality by examining ribosomal RNA band integrity, electrophorese a fraction of each RNA sample on a denaturing agarose gel or on the QIAxcel.

Note: Due to the fragmentation associated with formalin fixation and paraffin embedding, RNA isolated from FFPE blocks and slides is always degraded, and the extent of degradation varies among samples. Therefore, while the integrity of RNA isolated from FFPE blocks or slides may be determined by the methods described here, it may only be useful for the purposes of comparing samples.

Note: RNA yields from some sources, such as serum or plasma samples, LCM samples, and FNAB samples are too low to enable quality control by these methods.

Data delivery

Data analysis is performed using QIAGEN data analysis software. Data in an electronic form can be downloaded from a secure FTP Website or delivered via email. A complete data and experiment report includes:

Raw CT valuesΔΔCT AnalysisExcel spreadsheet (data analysis using pair-wise comparisons, including raw data, tabular results as well as Scatter, 3D, and Volcano plots)

アプリケーション

miScript miRNA PCR Arrays are used as part of the miScript PCR System for:

Pathway- and disease-focused miRNA profiling
miRNome profiling
Biomarker discovery

You are not authorized to download the resource

キットハンドブック
4

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Pathway-Focused miRNA PCR Array あるいはmiRNome miScript miRNA PCR Array を用いたリアルタイムPCR(SYBR Green ベース)によるmicroRNA のプロファイリング
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miScript II RT Kit

miScript SYBR Green PCR Kit

miScript miRNA PCR Arrays

miScript miRNA QC PCR Array

For SYBR Green-based, real-time PCR profiling of microRNAs using pathway-focused arrays, HC arrays, and miRNome arrays


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機器テクニカル資料
2
For pathway-focused miRNA or miRNome analysis
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For gene expression and genomic analysis
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ダウンロードファイル
1
Data analysis file for miScript miRNA PCR Array All miRNA QC (96-well plate, Rotor-Disc 100)
Catalog number- 331221
Pathway number- MIXX-989Z
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画像
Pathway-Focused or miRNome miScript miRNA PCR Array layout for plate formats A, C, D, F
Pathway-FocusedあるいはmiRNome miScript miRNA PCR Arrayレイアウト:プレートフォーマットA、C、D、F、M
ウェルA1~G12(1-84) はそれぞれパスウェイ/疾病/機能に関連するmature miRNA用miScript Primer Assayを含む。ウェルH1とH2はC. elegans miR-39 miScript Primer Assayのreplicateで、アレイデータの標準化にも使用可能 (Ce)。ウェルH3~H8には、アレイデータの標準化のためのコントロールとして使用する様々なsnoRNA/snRNA用アッセイが入っている(SN1=SNORD61アッセイ、SN2=SNORD68アッセイ、SN3=SNORD72アッセイ、SN4=SNORD95アッセイ、SN5=SNORD96Aアッセイ、SN6=RNU6B/RNU6-2アッセイ)。ウェルH9とH10は逆転写反応コントロール(miRTC)のreplicate。ウェルH11とH12はポジティブPCRコントロール(PPC)のreplicate。
miRNome miScript miRNA PCR Array layout for plate formats E, G
miRNome miScript miRNA PCR Array およびmiScript miRNA HC PCR Array レイアウト: プレートフォーマットE、G
ウェルA1~P12(1~372)はそれぞれパスウェイ/疾病/機能に関連するmature miRNA用miScript Primer Assayを含む。ウェルP13とP14はC. elegans miR-39 miScript Primer Assayのreplicateで、アレイデータの標準化にも使用可能 (Ce)。ウェルP15~P20には、アレイデータの標準化のためのコントロールとして使用する様々なsnoRNA/snRNA用アッセイが入っている(SN1=SNORD61アッセイ、SN2=SNORD68アッセイ、SN3=SNORD72アッセイ、SN4=SNORD95アッセイ、SN5=SNORD96Aアッセイ、SN6=RNU6B/RNU6-2アッセイ)。ウェルP21とP22は逆転写反応コントロール(miRTC)のreplicate。ウェルP23とP24はポジティブPCRコントロール(PPC)のreplicate。
Pathway-Focused miScript miRNA PCR Array layout for plate formats E, G
Pathway-Focused miScript miRNA PCR Arrayレイアウト: プレートフォーマットE、G
フォーマットE、GのPathway-Focused miScript miRNA PCR Arrayは、96ウェルフォーマットA、C、D、Fで提供されている同じアッセイを4 replicatesで含む。
miScript miRNA PCR Array layout for Rotor-Disc format R
miScript miRNA PCR Arrayレイアウト: Rotor-Disc format R
ウェル1~84はそれぞれパスウェイ/疾病/機能に関連する遺伝子に対応するmiScript Primer Assayを含む。ウェル85と86はC. elegans miR-39 miScript Primer Assayのreplicateで、アレイデータの標準化にも使用可能 (Ce)。ウェル87~92には、アレイデータの標準化のためのコントロールとして使用する様々なsnoRNA/snRNA用アッセイが入っている(SN1=SNORD61アッセイ、SN2=SNORD68アッセイ、SN3=SNORD72アッセイ、SN4=SNORD95アッセイ、SN5=SNORD96Aアッセイ、SN6=RNU6B/RNU6-2アッセイ)。ウェル93と94は逆転写反応コントロール(miRTC)のreplicate。ウェル95と96はポジティブPCRコントロール(PPC)のreplicate。ウェル97~100は空。
miScript miRNA QC PCR Array layout for plate formats A, C, D, F.
miScript miRNA QC PCR Arrayレイアウト:プレートフォーマットA、C、D、F
各列のウェル1と2はC. elegans miR-39 miScript Primer Assaysのreplicate(39)を含む。各列のウェル3はmiR-16 miScript Primer Assay (16)を含む。各列のウェル4はmiR-21 miScript Primer Assay(21)を含む。各列のウェル5はmiR-191 miScript Primer Assay (191)を含む。各列のウェル6 ~8は様々なsnoRNA(61 = SNORD61 assay, 95 = SNORD95 assay, 96A = SNORD96A assay)用アッセイを含む。各列のウェル9と10はmiRTC miScript Primer Assays(miRTC)のreplicate。各列のウェル11と12はポジティブPCRコントロール(PPC)のreplicate。これらのフォーマットでは最高8個のcDNAサンプルの品質評価が可能。
miScript miRNA QC PCR Array layout for plate formats E and G.
miScript miRNA QC PCR Arrayレイアウト:プレートフォーマットE、G
ウェル1~4 はC. elegans miR-39 miScript Primer Assays(39)をそれぞれreplicateで含む。 ウェル5 と 6は miR-16 miScript Primer Assays(16)をそれぞれreplicateで含む。 ウェル7と 8はmiR-21 miScript Primer Assays(21)をそれぞれreplicateで含む。ウェル9 と10はmiR-191 miScript Primer Assays(191)をそれぞれreplicateで含む。ウェル11~16はそれぞれ異なるsnoRNAs(61 = SNORD61 assay、95 = SNORD95 assay、96A = SNORD96A assay)が含まれている。ウェル17~20はmiRTC miScript Primer Assays(miRTC)をそれぞれreplicateで含む。 ウェル21~24はポジティブPCRコントロール(PPC)のそれぞれのreplicateが含まれる。このフォーマットは32 cDNAサンプルまでの品質評価が可能。
miScript miRNA QC PCR Array layout for Rotor-Disc format R.
miScript miRNA QC PCR Arrayレイアウト: Rotor-Disc format R
ウェル1と2は C. elegans miR-39 miScript Primer Assayのreplicate。ウェル3はmiR-16 miScript Primer Assayを含む。ウェル4はmiR-21 miScript Primer Assayを含む。ウェル5はmiR-191 miScript Primer Assay を含む。ウェル6 ~8は様々なsnoRNA(ウェル6 = SNORD61 assay、ウェル7 = SNORD95 assay、ウェル8= SNORD96A assay)用アッセイを含む。ウェル9と10はmiRTC miScript Primer Assays(miRTC)のreplicate。ウェル11と12はポジティブPCRコントロール(PPC)のreplicate。このパターンはウェル13~96までさらに7回繰り返される。ウェル97~100は空。このフォーマットでは最高8個のcDNAサンプルの品質評価が可能。
Effortless data analysis
全miRNomeプロファイリング
脱メチル化剤5-aza-2’-dC(5-aza-2’-deoxycytidine )で処理/未処理のHCT 116大腸がん細胞からトータルRNAを精製した。この試薬はDNAに取り込まれ、メチル化反応を起こすDNA methyltransferaseの活性部位に共有結合された結果、DNA methyltransferaseを不可逆的に阻害する。cDNAは、miScript HiSpec BufferとmiScript II RT Kitを用いて調製した。リアルタイムPCRによるmature miRNA発現のプロファイリングにHuman miRNome miScript miRNA PCR ArrayとmiScript SYBR® Green PCR Kitを使用した。オンラインのmiScript miRNA PCR Array Data Analysis Toolを用いてデータ解析を行なった。[A] 2-ΔCT 値のスキャッタープロットは、2種類のサンプルのmature miRNA発現レベルで有意な差異を証明している。[B] ボルケーノプロットは、制御されたmiRNA(±4-foldをカットオフとして使用し、赤線で示す)を示す。5-aza-2’-dC処理したHCT116細胞では、104種類のmiRNAが強くアップレギュレートされ、30種類が強くダウンレギュレートされた。p値で0.05を用いると(青線で記載)、104種類のmiRNAのうち89種類のアップレギュレーションが、また30種類のmiRNAのうち21種類のダウンレギュレーションで有意差があった。
Analysis of expression of circulating miRNAs in serum or plasma holds huge potential as a source of new biomarkers
血清あるいは血漿中の循環miRNAの発現解析
健常および大腸がんの血清サンプル由来のプールしたRNAの相対的なmiRNA発現レベルを、Human Serum & Plasma miScript miRNA PCR Arrayで解析したスキャッタープロットを示す。