TopTaq DNA Polymerase

Read phase-out notice below
For highly reliable end-point PCR applications with unrivaled ease of use

  • Storage at 4°C allows immediate reaction setup
  • Convenient room-temperature handling
  • A single, preoptimized protocol suitable for all PCR assays
  • High yields of specifically amplified DNA
TopTaq DNA Polymerase combines a number of convenient and unique features to provide unrivaled ease of use and ensure high DNA yields in a wide range of PCR applications. The unique TopTaq Stabilizer included in the enzyme storage buffer allows storage of TopTaq DNA Polymerase at 4°C and reaction setup at room temperature without time-consuming thawing of reagents. CoralLoad Concentrate, which contains two gel-tracking dyes for easier pipetting visualization and immediate gel-loading of PCR products, is also provided. High yields of PCR products are achieved, even when amplifying a range of different sized products using the same Mg2+ concentrations and annealing temperatures.

IMPORTANT NOTE: This product is phasing-out until October 15, 2020, and afterward, available only until stocks last. Visit the product page of the successor kit to view improved features or to request a trial kit.

 

For more information and FAQs on this transition, visit: www.qiagen.com/PCRresource.

製品名 Cat. no. List price:
TopTaq DNA Polymerase (50)
50 units TopTaq DNA Polymerase (proprietary recombinant polymerase isolated from a thermophilic eubacterium), 10x PCR Buffer (contains 15 mM MgCl2), 10x CoralLoad Concentrate, 5x Q-Solution, 25 mM MgCl2
200201
Inquire
TopTaq DNA Polymerase (250)
250 units TopTaq DNA Polymerase (proprietary recombinant polymerase isolated from a thermophilic eubacterium), 10x PCR Buffer (contains 15 mM MgCl2), 10x CoralLoad Concentrate, 5x Q-Solution, 25 mM MgCl2
200203
¥22,500
TopTaq DNA Polymerase (1000)
4 x 250 units TopTaq DNA Polymerase (proprietary recombinant polymerase isolated from a thermophilic eubacterium), 10x PCR Buffer (contains 15 mM MgCl2), 10x CoralLoad Concentrate, 5x Q-Solution, 25 mM MgCl2
200205
¥69,000
TopTaq DNA Polymerase (5000)
5000 units TopTaq DNA Polymerase (proprietary recombinant polymerase isolated from a thermophilic eubacterium; supplied in a single vial), 10x TopTaq PCR Buffer (contains 15 mM MgCl2), 10x CoralLoad Concentrate, 5x Q-Solution, 25 mM MgCl2
200207
¥305,000

TopTaq DNA Polymerase  は分子生物学実験用です。疾病の診断、治療または予防の目的には使用することはできません。



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簡便なCoralLoad Concentrate|TopTaq 操作手順|至適化不要で高収量なPCR 産物|プライマーのアニーリングにおける特異性が増加|4℃で安定化|
CoralLoad PCR Buffer [A] は、は2種類のゲルマーカー色素を含んでおり、PCR産物を即ゲルにアプライでき、DNAの泳動を簡単に可視化できる[B] 。|酵素保存バッファー中に含まれているTopTaq Stabilizerのユニークな特性により、TopTaq DNA Polymeraseは4℃で保存できる市場初のPCR増幅酵素です。TopTaq StabilizerがTopTaq DNA Polymeraseに結合することにより、ポリメラーゼの不活性化を防ぎます。低温でポリメラーゼがテンプレートDNAやプライマーと結合することも防ぎます。最初の変性ステップの際に、TopTaq Stabilizer はポリメラーゼ活性を低下することなくポリメラーゼから遊離します。この特性により、反応セットアップに氷は不要です。 また、試薬の解凍に必要な時間を節約できます。|[A] 100 bpから2 kbまでの大きさの14 種類のPCR 産物を哺乳動物ゲノムDNAから増幅するためにTopTaq DNA Polymeraseを用いた。 PCRは、スタンダードなプロトコールに従い同一のサイクリング条件を用いた。[B] 図A のレーン11 ~ 14と同じ4 種類のPCR産物を表記のメーカーのDNA ポリメラーゼを用いて同一サイクリング条件で増幅した。TopTaq DNA Polymerase(QIAGEN)はフラグメントのサイズにかかわらず高い収量で特異的なPCR 産物を増幅した。|QIAGEN PCRバッファー中のアンモニウムイオンとカリウムイオンにより、プライマーのアニーリングにおける特異性が増加。K+ はDNA バックボーンのリン酸基(P)に結合し、テンプレートへのプライマーアニーリングを安定化する。サーマルサイクリング条件下では、アンモニウムイオンおよびアンモニアの両方として存在するNH4+は、塩基(B)間の水素結合に相互作用するため、ミスマッチの塩基間の水素結合を不安定にする。これら2 種類の陽イオンの組み合わせ効果により、幅広い温度範囲において非特異的なプライマー·テンプレート結合に対して特異的な結合の比率が高く保たれる。|[A]  TopTaq DNA Polymeraseは、表面に付着した低分子量の分子(TopTaq Stabilizer)によって、4℃あるいは室温でも安定化している。[B]  高温ではポリメラーゼ活性を低下することなくTopTaq Stabilizer はポリメラーゼから完全に遊離する。|
パフォーマンス
TopTaq DNA Polymerase is used for standard and specialized end-point PCR applications. TopTaq DNA Polymerase is the first PCR kit that can be stored at 4°C. TopTaq Stabilizer (contained in the enzyme storage buffer) binds to TopTaq DNA Polymerase, preventing polymerase inactivation during long-term storage. During the initial denaturation step, the TopTaq Stabilizer dissociates from the polymerase without compromising polymerase activity. TopTaq DNA Polymerase outperformed DNA polymerases tested from other suppliers and ensures high yields of specific products, even when using low template amounts, and independent of fragment size (see figure "High PCR product yields without optimization).
原理

TopTaq DNA Polymerase is a recombinant 94 kDa thermostable DNA Polymerase. TopTaq DNA Polymerase has been developed by QIAGEN to provide highly reliable end-point PCR with unrivaled ease of use. Until the development of the TopTaq PCR system, all PCR enzymes required storage at –20°C; however, due to the unique proprietary TopTaq Stabilizer contained in the enzyme storage buffer, TopTaq DNA Polymerase is the first PCR kit that can be stored at 4°C. 

High-yield amplification

TopTaq DNA Polymerase, in combination with the innovative TopTaq PCR Buffer, facilitates amplification of specific PCR products by providing a high ratio of specific-to-nonspecific primer binding. Owing to a uniquely balanced combination of KCl and (NH4)2SO4, the PCR buffer provides stringent primer-annealing conditions over a wider range of annealing temperatures and Mg2+ concentrations than conventional PCR buffers (see figure "Increased specificity of primer annealing"). The need to optimize PCR by varying the annealing temperature or the Mg2+ concentration is dramatically reduced, or often not required. Thus, TopTaq DNA Polymerase provides the same reliability and specificity as Taq DNA Polymerase and additionally offers improved performance in some PCR systems — resulting in higher yields of PCR products (see figure "High yields of PCR product without optimization").

TopTaq Stabilizer

TopTaq Stabilizer binds to TopTaq DNA Polymerase at 4°C and room temperature, preventing polymerase denaturation during long-term storage. Template DNA and primers are also prevented from binding to the polymerase at low temperature. During the initial denaturation step, the TopTaq Stabilizer dissociates from the polymerase without compromising polymerase activity (see figure "Stabilization at 4°C").

CoralLoad Concentrate

For enhanced convenience, TopTaq DNA Polymerase is supplied with CoralLoad Concentrate. CoralLoad Concentrate contains a gel-loading reagent and two gel-tracking dyes. This unique reagent improves pipetting visibility and facilitates estimation of DNA migration distance and optimization of agarose gel run time. When using CoralLoad Concentrate, PCR products can be directly loaded onto an agarose gel without prior addition of loading buffer (see figure "Convenient CoralLoad Concentrate").

Optimized protocol and buffer

With its balanced potassium and ammonium ions, the unique PCR Buffer, used in combination with TopTaq DNA Polymerase, promotes  specific primer–template annealing and simultaneously reduces nonspecific annealing. Maximum yields of specific products are obtained even when using low template amounts.The unique buffer formulation and single preoptimized protocol eliminate the need for optimization of experimental parameters for individual-primer template systems, saving time and costs. High yields of specific amplification product are achieved, even when amplifying a range of fragments of different sizes using the same Mg2+ concentration and annealing temperature (see figure "High PCR product yields without optimization").

Q-Solution

This innovative PCR additive facilitates amplification of difficult templates by modifying the melting behavior of DNA. Use of this unique reagent will often enable or improve suboptimal PCR. Unlike DMSO and other PCR additives, Q-Solution is used at a defined working concentration with any primer-template system and is not toxic.

操作手順

Due to the unique proprietary TopTaq Stabilizer contained in the enzyme storage buffer, TopTaq DNA Polymerase is the first PCR kit that can be stored routinely at 4°C. During the initial denaturation step, the TopTaq Stabilizer freely dissociates from the polymerase without compromising polymerase activity. This added convenience allows immediate reaction setup without the use of ice — saving the time usually required for reagent thawing (see flowchart "TopTaq procedure"). All components can be combined  at room temperature eliminating the need for working on ice. The unique buffer formulation and a single preoptimized protocol eliminate the need for optimization of  experimental parameters for individual primer–template systems.

アプリケーション
TopTaq DNA Polymerase is highly suited to all end-point PCR applications.
Feature
Specifications
Applications PCR, RT-PCR, DNA fingerprinting
dNTP's included No
Enzyme activity 5' -> 3' exonuclease activity
Mastermix No
Reaction type PCR amplification
Real-time or endpoint Endpoint
Sample/target type Genomic DNA and cDNA
Single or multiplex Single
Storage conditions Fridge storage and room temperature setup
With/without hotstart Without Hotstart

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キットハンドブック
2
For standard and specialized end-point PCR applications without the need for optimization
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スタンダードから特殊用途までの至適化不要のエンドポイントPCR
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MSDS
1
Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.
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画像
Ready-to-load PCR buffer
簡便なCoralLoad Concentrate
CoralLoad PCR Buffer [A] は、は2種類のゲルマーカー色素を含んでおり、PCR産物を即ゲルにアプライでき、DNAの泳動を簡単に可視化できる[B]
TopTaq Procedure
TopTaq 操作手順

酵素保存バッファー中に含まれているTopTaq Stabilizerのユニークな特性により、TopTaq DNA Polymeraseは4℃で保存できる市場初のPCR増幅酵素です。TopTaq StabilizerがTopTaq DNA Polymeraseに結合することにより、ポリメラーゼの不活性化を防ぎます。低温でポリメラーゼがテンプレートDNAやプライマーと結合することも防ぎます。最初の変性ステップの際に、TopTaq Stabilizer はポリメラーゼ活性を低下することなくポリメラーゼから遊離します。この特性により、反応セットアップに氷は不要です。 また、試薬の解凍に必要な時間を節約できます。

High PCR product yields without optimization
至適化不要で高収量なPCR 産物
[A] 100 bpから2 kbまでの大きさの14 種類のPCR 産物を哺乳動物ゲノムDNAから増幅するためにTopTaq DNA Polymeraseを用いた。 PCRは、スタンダードなプロトコールに従い同一のサイクリング条件を用いた。[B] 図A のレーン11 ~ 14と同じ4 種類のPCR産物を表記のメーカーのDNA ポリメラーゼを用いて同一サイクリング条件で増幅した。TopTaq DNA Polymerase(QIAGEN)はフラグメントのサイズにかかわらず高い収量で特異的なPCR 産物を増幅した。
NH4+ and K+ cations in QIAGEN PCR buffers increase specific primer annealing
プライマーのアニーリングにおける特異性が増加
QIAGEN PCRバッファー中のアンモニウムイオンとカリウムイオンにより、プライマーのアニーリングにおける特異性が増加。K+ はDNA バックボーンのリン酸基(P)に結合し、テンプレートへのプライマーアニーリングを安定化する。サーマルサイクリング条件下では、アンモニウムイオンおよびアンモニアの両方として存在するNH4+は、塩基(B)間の水素結合に相互作用するため、ミスマッチの塩基間の水素結合を不安定にする。これら2 種類の陽イオンの組み合わせ効果により、幅広い温度範囲において非特異的なプライマー·テンプレート結合に対して特異的な結合の比率が高く保たれる。
Stabilization of TopTaq DNA Polymerase at 4°C
4℃で安定化
[A]  TopTaq DNA Polymeraseは、表面に付着した低分子量の分子(TopTaq Stabilizer)によって、4℃あるいは室温でも安定化している。[B]  高温ではポリメラーゼ活性を低下することなくTopTaq Stabilizer はポリメラーゼから完全に遊離する。