HotStarTaq Master Mix Kit

For highly specific amplification for any PCR application

  • High PCR specificity without the need for optimization
  • Easy reaction setup at room temperature
  • Ready-to-use master mix format reduces pipetting steps
HotStarTaq Master Mix contains HotStarTaq DNA Polymerase, the unique QIAGEN PCR Buffer that minimizes the requirement for optimization, and dNTPs. Providing all components in a master mix reduces pipetting steps and the risk of contamination, while increasing throughput and reproducibility.
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HotStarTaq Master Mix Kit (250 U)
3 x 0.85 ml HotStarTaq Master Mix (contains 250 units HotStarTaq DNA Polymerase, PCR Buffer with 3 mM MgCl2, and 400 µM of each dNTP)and 2 x 1.7 ml RNase-Free Water
203443
$321.00
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HotStarTaq Master Mix Kit (1000 U)
12 x 0.85 ml HotStarTaq Master Mix (contains 1000 units HotStarTaq DNA Polymerase, PCR Buffer with 3 mM MgCl2, and 400 µM of each dNTP) and 8 x 1.7 ml RNase-Free Water
203445
$1,201.00
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Hot StarTaq Master Mix Kit (2500 U)
1 x 25 ml HotStarTaq Master Mix (contains 2500 units HotStarTaq DNA Polymerase PCR Buffer with 3 mM MgCl2, and 400 µM of each dNTP) and 1 x 50 ml RNase-Free Water
203446
$2,756.00
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HotStarTaq Master Mix Kit  は分子生物学実験用です。疾病の診断、治療または予防の目的には使用することはできません。


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HotStarTaq操作手順|卓越した性能|異なるプライマー/テンプレートシステムにおける高特異性|RT-PCR性能へのホットスタートの影響|高感度のシングルセルPCR|異なったマグネシウム濃度への適応|Multiplex PCRにおける特異的な増幅|プライマーアニーリングの特異性増大|
HotStarTaq操作は迅速かつ容易で最高の使いやすさを実現する。|ヒトゲノムDNA 1 μgに添加されたHIV-pol遺伝子50コピーから、497 bpフラグメントを増幅した。様々なホットスタート酵素を使用した:QIAGENのHotStarTaq DNA Polymerase(HotStarTaq)、AII社のホットスタート酵素(Hot-start enzyme)、L社のTaq抗体ミックス(Antibody-mediated)、R社のホットスタートではない酵素(No hot start)。矢印は特異的なPCR産物を示す。各PCR反応液から同量を2%アガロースゲルにロードした。M:マーカー。|3種類の異なるプライマー/テンプレートシステムでR社のTaq DNA polymerase(R)、あるいはHotStarTaq DNA Polymerase(H)を用い、同じ条件下でPCRを行なった。システム 1:ヒトゲノムDNAからD-IgIの1.1 kbのフラグメントを増幅した。システム 2:ヒトゲノムDNAからX連鎖性若年性網膜分離症に関与している染色体領域の296 bpのフラグメントを増幅した。システム 3:トータルRNAより合成されたcDNAからβ-アクチンの214 bpのフラグメントを増幅した。M:マーカー。|ヒトインターロイキン1レセプター(タイプ II)遺伝子の1.1 kbフラグメントをcDNAから増幅した。増幅反応は以下の組み合わせで3セット調製した: L社のTaq DNA polymeraseとバッファー(No hot start); L社の抗体修飾した酵素とバッファー(Antibody-mediated);QIAGENのHotStarTaq DNA PolymeraseとPCR Buffer(HotStarTaq)。M:マーカー。|フローサイトメトリーを用いて直接各PCRチューブに分離した1個の細胞からマウスp53 遺伝子の500 bp フラグメントを増幅した。各反応は以下の組み合わせで行なった:QIAGENのHotStarTaq DNA PolymeraseとPCR Buffer(HotStarTaq)、AII社のホットスタート酵素とバッファー(Hot-start enzyme)、L社の抗体修飾した酵素とバッファー(抗体利用)。M:マーカー。|表記のMg2+濃度で、QIAGEN PCR BufferとTaq DNA Polymerase(QIAGEN)を用いてPCR反応を行なった。同じ条件のPCR反応をAII社のPCRバッファーとTaq DNA polymerase を用いて行なった。QIAGENのバッファーと酵素を使用した各実験ではシングルコピーのヒトプリオンタンパク遺伝子が良好に増幅された。M:マーカー。|マウスのp53遺伝子フラグメントをゲノムDNAからマルチプレックスPCRで増幅した。R社の酵素(No hot start)および QIAGEN のHotStarTaq Master Mix Kit(HotStarTaq Master Mix)を用いて、スタンダードの条件で増幅反応を同時に行なった。M:マーカー。|QIAGEN PCR Buffer中のアンモニウムイオンとカリウムイオンにより、プライマーのアニーリングにおける特異性が増加。K+ はDNA バックボーンのリン酸基(P)に結合し、テンプレートへのプライマーアニーリングを安定化する。サーマルサイクリング条件下では、アンモニウムイオンおよびアンモニアの両方として存在するNH4+は、塩基(B)間の水素結合に相互作用するため、ミスマッチの塩基間の水素結合を不安定にする。これら2 種類の陽イオンの組み合わせ効果により、幅広い温度範囲において非特異的なプライマー/テンプレート結合に対して特異的な結合の比率が高く保たれる。|
パフォーマンス

Each lot of HotStarTaq Master Mix Kit is subjected to a comprehensive range of quality control tests, including a stringent PCR specificity and reproducibility assay in which low-copy targets are amplified. HotStarTaq Master Mix Kit outperformed kits tested from other suppliers and ensures high specificity and superior performance in hot-start PCR (see figures "Higher specificity with different primer–template systems" and "Superior performance " and table). The innovative PCR buffer provided with the kit ensures specificity over a wide range of PCR conditions, minimizing the need for optimization (see figure "Tolerance to variable temperatures and magnesium concentrations").

The combination of high specificity and easy handling makes the HotStarTaq Master Mix Kit suitable for use with complex genomic or cDNA templates (see figure "Effect of hot start on RT-PCR performance"), multiple primer pairs (see figure "Specific amplification in multiplex PCR"), and templates isolated from difficult sources or very low-copy targets (see figure "Highly sensitive single-cell PCR"). It is also suitable for projects such as genetic screening, in which large numbers of samples are amplified.

Comparison of hot-start methods 
HotStarTaq DNA Polymerase Hot-start enzyme from Supplier AII Antibody-mediated Manual Wax barrier
Specific amplification ++ + + +/– +/–
Minimal PCR optimization ++ +/– +/–
Easy to use ++ ++ +
HotStarTaq DNA Polymerase specifications

Concentration: 5 units/µl
Recombinant enzyme: Yes
Substrate analogs: dNTP, ddNTP, dUTP, biotin-11-dUTP, DIG-11-dUTP, fluorescent-dNTP/ddNTP
Extension rate: 2–4 kb/min at 72°C
Half-life: 10 min at 97°C ; 60 min at 94°C
Amplification efficiency: ≥105 fold
5'–>3' exonuclease activity: Yes
Extra A addition: Yes
3'–>5' exonuclease activity: No
Contaminating nucleases: No
Contaminating RNases: No
Contaminating proteases: No
Self-priming activity: No 

原理

HotStarTaq Master Mix is a ready-to-use mixture of HotStarTaq DNA Polymerase, QIAGEN PCR Buffer, and dNTPs. HotStarTaq DNA Polymerase, a modified form of Taq DNA Polymerase, provides high specificity in hot-start PCR.

HotStarTaq DNA Polymerase

HotStarTaq DNA Polymerase is supplied in an inactive state and has no polymerase activity at ambient temperatures. This prevents extension of nonspecifically annealed primers and primer dimers formed at low temperatures during PCR setup and the initial PCR cycle (see figures "Superior performance in hot-start PCR" and "Higher specificity with different primer–template systems"). HotStarTaq DNA Polymerase is activated by a 15-minute incubation at 95°C, which can be incorporated into any existing thermal-cycler program.

QIAGEN PCR Buffer

QIAGEN PCR Buffer maintains specific amplification in every cycle of PCR by promoting a high ratio of specific-to-nonspecific primer binding during the annealing step in each PCR cycle (see figure "Increased specificity of primer annealing"). Owing to a uniquely balanced combination of KCl and (NH4)2SO4, the buffer provides stringent primer-annealing conditions over a wider range of annealing temperatures and Mg2+ concentrations than conventional PCR buffers. Optimization of PCR by varying the annealing temperature or the Mg2+ concentration is therefore often minimal or not required (see figures "Wide annealing temperature window" and "Tolerance to variable magnesium concentration").

操作手順
HotStarTaq Master Mix Kit is supplied in a convenient master mix format for maximum ease of use. HotStarTaq DNA Polymerase is activated by a 15-minute, 95°C incubation step, which can easily be incorporated into existing thermal cycling programs. Room-temperature reaction setup using the master mix is fast and easy — simply pipet 25 µl HotStarTaq Master Mix into each PCR tube and add 25 µl of primers and template DNA diluted in the RNase-free water provided with the kit (see figure "HotStarTaq procedure"). Pipetting steps are minimized, reducing the possibility of errors and contamination, and ensuring increased throughput and reproducibility. The kit includes a streamlined, optimized protocol for fast and easy PCR setup.
アプリケーション

HotStarTaq Master Mix Kit is highly suitable for a wide variety of applications, including challenging applications such as amplification of: 

  • Complex genomic templates
  • Complex cDNA templates (e.g., RT-PCR)
  • Very low-copy targets (e.g., single-cell PCR)
  • Reactions with multiple primer pairs
Feature
Specifications
Applications PCR, RT-PCR, Complex genomic templates, very low-copy targets
Enzyme activity 5'-> 3' exonuclease activity
Mastermix Yes
Reaction type PCR amplification
Real-time or endpoint Endpoint
Sample/target type Genomic DNA and cDNA
Single or multiplex Single
With/without hotstart With hotstart

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キットハンドブック
1
HotStarTaq DNA Polymerase; HotStarTaq Master Mix Kit - For highly specific hot-start PCR without optimization  
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User-Developed Protocols
1
As starting material, 5 g soil was mixed with different amounts of Bacillus subtilis cells. Sensitivity was 5 x 103 cells/5g soil.
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クイックスタートプロトコール
1
References
0
画像
Highly specific PCR results with both manual and automated PCR setup
HotStarTaq操作手順

HotStarTaq操作は迅速かつ容易で最高の使いやすさを実現する。

Superior Performance in Hot-Start PCR
卓越した性能
ヒトゲノムDNA 1 μgに添加されたHIV-pol遺伝子50コピーから、497 bpフラグメントを増幅した。様々なホットスタート酵素を使用した:QIAGENのHotStarTaq DNA Polymerase(HotStarTaq)、AII社のホットスタート酵素(Hot-start enzyme)、L社のTaq抗体ミックス(Antibody-mediated)、R社のホットスタートではない酵素(No hot start)。矢印は特異的なPCR産物を示す。各PCR反応液から同量を2%アガロースゲルにロードした。M:マーカー。
Higher Specificity with Different Primer–Template Systems
異なるプライマー/テンプレートシステムにおける高特異性
3種類の異なるプライマー/テンプレートシステムでR社のTaq DNA polymerase(R)、あるいはHotStarTaq DNA Polymerase(H)を用い、同じ条件下でPCRを行なった。システム 1:ヒトゲノムDNAからD-IgIの1.1 kbのフラグメントを増幅した。システム 2:ヒトゲノムDNAからX連鎖性若年性網膜分離症に関与している染色体領域の296 bpのフラグメントを増幅した。システム 3:トータルRNAより合成されたcDNAからβ-アクチンの214 bpのフラグメントを増幅した。M:マーカー。
Effect of Hot Start on RT-PCR Performance
RT-PCR性能へのホットスタートの影響
ヒトインターロイキン1レセプター(タイプ II)遺伝子の1.1 kbフラグメントをcDNAから増幅した。増幅反応は以下の組み合わせで3セット調製した: L社のTaq DNA polymeraseとバッファー(No hot start); L社の抗体修飾した酵素とバッファー(Antibody-mediated);QIAGENのHotStarTaq DNA PolymeraseとPCR Buffer(HotStarTaq)。M:マーカー。
Single-Cell PCR
高感度のシングルセルPCR
フローサイトメトリーを用いて直接各PCRチューブに分離した1個の細胞からマウスp53 遺伝子の500 bp フラグメントを増幅した。各反応は以下の組み合わせで行なった:QIAGENのHotStarTaq DNA PolymeraseとPCR Buffer(HotStarTaq)、AII社のホットスタート酵素とバッファー(Hot-start enzyme)、L社の抗体修飾した酵素とバッファー(抗体利用)。M:マーカー。
Wide Annealing-Temperature Window
異なったマグネシウム濃度への適応
表記のMg2+濃度で、QIAGEN PCR BufferとTaq DNA Polymerase(QIAGEN)を用いてPCR反応を行なった。同じ条件のPCR反応をAII社のPCRバッファーとTaq DNA polymerase を用いて行なった。QIAGENのバッファーと酵素を使用した各実験ではシングルコピーのヒトプリオンタンパク遺伝子が良好に増幅された。M:マーカー。
Specific Amplification in Multiplex PCR
Multiplex PCRにおける特異的な増幅
マウスのp53遺伝子フラグメントをゲノムDNAからマルチプレックスPCRで増幅した。R社の酵素(No hot start)および QIAGEN のHotStarTaq Master Mix Kit(HotStarTaq Master Mix)を用いて、スタンダードの条件で増幅反応を同時に行なった。M:マーカー。
NH4+ and K+ cations in QIAGEN PCR buffers increase specific primer annealing
プライマーアニーリングの特異性増大
QIAGEN PCR Buffer中のアンモニウムイオンとカリウムイオンにより、プライマーのアニーリングにおける特異性が増加。K+ はDNA バックボーンのリン酸基(P)に結合し、テンプレートへのプライマーアニーリングを安定化する。サーマルサイクリング条件下では、アンモニウムイオンおよびアンモニアの両方として存在するNH4+は、塩基(B)間の水素結合に相互作用するため、ミスマッチの塩基間の水素結合を不安定にする。これら2 種類の陽イオンの組み合わせ効果により、幅広い温度範囲において非特異的なプライマー/テンプレート結合に対して特異的な結合の比率が高く保たれる。