Rotor-Gene SYBR^® Green PCR Kit

For ultrafast, real-time PCR and two step RT-PCR using SYBR Green on Rotor-Gene cyclers

Specific and sensitive detection of even low-copy targets
Accurate detection of a wide range of template amounts
Specially formulated master mix for reliable results without optimization
Guaranteed performance combined with QuantiTect Primer Assays

The Rotor-Gene SYBR Green PCR Kit is designed for use with the Rotor-Gene Q and other Rotor-Gene cyclers, providing ultrafast, highly specific quantification of gDNA and cDNA targets with quantitative real-time PCR or two-step RT-PCR using SYBR Green I detection. Outstanding qPCR performance is achieved through the combination of a specially optimized master mix and the unique Rotor-Gene cycler. For convenience, the master mix can be stored at 2–8°C.

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製品名		Cat. no.	List price:
Rotor-Gene SYBR Green PCR Kit (400) For 400 x 25 µl reactions: 3 x 1.7 ml 2x Rotor-Gene SYBR Green PCR Master Mix, 2 x 2 ml RNase-Free Water		204074	¥55,000

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Rotor-Gene SYBR^® Green PCR Kit は分子生物学実験用です。疾病の診断、治療または予防の目的には使用することはできません。

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特異性と感度の高い検出|10コピーのターゲットを確実かつ高い特異性で検出|プライマーの特異的なアニーリング|プライマーの高速なアニーリング|

ヒト白血球cDNA の10倍段階希釈液（10 ng～0.1 ng）とBCL2 (B-cell CLL/lymphoma 2)用QuantiTect Primer Assay を用いて2ステップリアルタイム RT-PCRを行なった。[A] Rotor-Gene Q とRotor-Gene SYBR^® Green PCR Kit、あるいは[B] A_II社の装置とキットを用いて反応をtriplicateで行なった。Rotor-Geneシステムでは低いC_T 値が得られ、triplicates内でより再現性が高い結果が得られた。融解曲線解析はシングルピークであり（挿入図）、ターゲットが特異的に増幅されたことを示す。|PPIA (cyclophilin A)用の QuantiTect Primer Assayを用いて、プラスミドDNAの10倍段階希釈液 (10⁹～ 10コピー）のリアルタイムPCRを行なった。反応はRotor-Gene Qと Rotor-Gene SYBR^® Green PCR Kitを用いてtriplicateで行なった。[A] Rotor-Geneシステムでは全希釈範囲にわたり信頼できる検出を実現し、各triplicatesで再現性の高いC_T値が得られた。[B] 融解曲線解析はターゲットの特異的な増幅を示唆している。|Rotor-Gene Q PCRバッファー中の陽イオンによりプライマーのアニーリングにおける特異性が増加。K⁺は二本鎖DNAのリン酸基に結合し、プライマーのアニーリングを安定化する。NH₄⁺は、ミスマッチな塩基対間の水素結合を不安定化する。|[A] Rotor-Gene SYBR^® Green PCR Master Mix中のQ-Bondは、短い一本鎖DNAへのDNAポリメラーゼの結合アフィニティーを大幅に増大させるため、プライマーのアニーリング時間を数秒間に短縮できる。さらにDNAの融解をサポートするユニークなバッファー組成が、変性およびエクステンション時間を短縮する。[B] Q-Bondが存在しないと、プライマーとポリメラーゼが段階的にテンプレートに結合するのでプライマーのアニーリングに時間がかかる。|

パフォーマンス

The Rotor-Gene SYBR Green PCR Kit is well suited for use in gene expression analysis of cDNA targets (see figures "Highly specific and sensitive detection" and "Reliable and specific detection down to 10 copies").

When QuantiTect Primer Assays are used together with the Rotor-Gene SYBR Green PCR Kit, highly sensitive quantification of specific PCR products is achieved without the need for optimization (see table).

Superior performance in RT-PCR with SYBR Green
	QIAGEN		Supplier A_II
	C_T	Mean deviation	C_T	Mean deviation
BAX (BCL2-associated X protein)	24.84	0.05	29.57	0.46
BCL2 (apoptosis gene)	26.96	0.05	32.83	0.29
MYC (proto-oncogene)	28.42	0.21	35.26	0.72
b-Actin (housekeeping gene)	20.24	0.03	24.39	0.12

原理

The Rotor-Gene SYBR Green PCR Kit enables rapid and reliable real-time PCR quantification on the Rotor-Gene Q without the need for optimization of reaction and cycling conditions. The fluorescent dye SYBR Green I in the master mix enables the analysis of many different targets without having to synthesize target-specific labeled probes. Highly specific amplification is assured through a balanced combination of K⁺ and NH₄⁺ ions, which promote specific primer annealing, enabling high PCR specificity and sensitivity (see figure "Specific primer annealing"). Fast cycling without compromising performance is achieved using Q-Bond, a novel PCR additive that enables cycler run times of as low as 45 minutes (see figure "Fast primer annealing").

Components of 2x Rotor-Gene SYBR Green PCR Kit*
Component	Features	Benefits
HotStarTaq Plus DNA Polymerase	5 min activation at 95ºC	Set up of qPCR reactions at room temperature
Rotor-Gene SYBR Green PCR Buffer	Balanced combination of NH₄⁺ and K⁺ ions	Specific primer annealing ensures reliable qPCR results
Rotor-Gene SYBR Green PCR Buffer	Unique Q-Bond additive	Faster PCR run times enable faster results and more reactions per day
SYBR Green I dye	Yields a strong fluorescent signal upon binding double-stranded DNA	Highly sensitive quantification

操作手順

The Rotor-Gene SYBR Green PCR Master Mix eliminates the need for optimization of reaction and cycling conditions. Simply add DNA template DNA and primers to the master mix and program the cycler. Instructions are provided in the detailed handbook supplied with the kit.

For gene expression analysis using real-time two-step RT-PCR, the combination of the Rotor-Gene SYBR Green PCR Kit, QuantiTect Reverse Transcription Kit, QuantiTect Primer Assays, and Rotor-Gene Q provides a complete, ready-to-run solution. The QuantiTect Reverse Transcription Kit delivers fast cDNA synthesis in just 20 minutes with integrated removal of genomic DNA contamination. QuantiTect Primer Assays are bioinformatically validated primer sets for any gene from human, mouse, rat, and many other species. Assays can be easily ordered online at the GeneGlobe Web portal.

アプリケーション

The Rotor-Gene SYBR Green PCR Kit provides rapid real-time quantification of cDNA and gDNA targets on the Rotor-Gene Q. The Kits are also compatible with the Rotor-Gene 3000 and the Rotor-Gene 6000.

For ultrafast, one-step qRT-PCR gene expression analysis of RNA targets using SYBR Green I on Rotor-Gene cyclers, use the Rotor-Gene SYBR Green RT-PCR Kit.

Feature	Specifications
Applications	Real-Time quantification of genomic DNA or cDNA targets
Description	For ultrafast quantitative real-time PCR and two-step RT-PCR using SYBR Green I on Rotor-Gene cyclers
Reaction type	Real-time PCR and two-step RT-PCR
Real-time or endpoint	Real-time
Sample/target type	DNA, cDNA
Single or multiplex	Single
SYBR Green I or sequence-specific probes	SYBR Green I
Thermal cycler	Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000
With or without ROX	Without ROX dye

パンフレット

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	(EN) - Rotor-Gene Q - Pure Detection Now with even more applications!	詳細を表示
	(JA) - Rotor-Gene Q 優れた温度均一性を実現するリアルタイムPCR 装置	詳細を表示

FAQ

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	What is a QuantiTect Primer Assay? FAQ ID -1141	表示
	How do you achieve fast cycling, yet still deliver the same performance in PCR as that achieved with standard cycling? FAQ ID -1430	表示
	Do you have a protocol for Rotor-Gene software setup for the Rotor-Gene SYBR Green PCR and RT-PCR Kits? FAQ ID -2104	表示
	Are Rotor-Gene Kits compatible with reaction setup using the QIAgility instrument? FAQ ID -2116	表示
	Do the master mixes in Rotor-Gene Kits contain dUTP to allow UNG pretreatment? FAQ ID -2117	表示
	Why is the initial activation step different for Rotor-Gene Probe, SYBR Green and Multiplex Kits? FAQ ID -2118	表示
	What are the main differences between Rotor-Gene and QuantiTect or QuantiFast PCR Kits? FAQ ID -2119	表示
	Will Rotor-Gene Kits also work on the Rotor-Gene 6000 and 3000 cyclers? FAQ ID -2121	表示
	Why is a 2-step (and not a 3-step) cycling protocol recommended for Rotor-Gene SYBR Green Kits? FAQ ID -2122	表示
	Do QuantiTect Primer Assays also work with Rotor-Gene SYBR Green PCR Kits? FAQ ID -2123	表示
	Will QuantiTect Primer Assays work with Rotor-Gene SYBR Green Kits using an annealing step at 60ºC? FAQ ID -2124	表示
	Do you have any information or guidelines regarding the choice of reference genes for real-time PCR? FAQ ID -2371	表示
	How do I create a workspace that is free of DNA contamination, prior to carrying out a qPCR experiment? FAQ ID -2654	表示
	What real-time cycler should I use for my qPCR experiments? FAQ ID -2670	表示
	What is a dissociation curve, and why is it important to run a dissociation curve, following qPCR using SYBR Green chemistry? FAQ ID -2678	表示
	What is the threshold cycle or Ct value? FAQ ID -2682	表示
	How can I predict the percent qPCR signal due to contaminating DNA, for a given qPCR assay, and its matching NRT control? FAQ ID -2688	表示
	Why do I see multiple high-intensity peaks in my qPCR dissociation curve at temperatures less than 70 ºC? FAQ ID -2690	表示

キットハンドブック

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	(EN) - Rotor-Gene SYBR Green Handbook For fast real-time PCR, two-step RT-PCR, and one-step RT-PCR using SYBR Green I on Rotor-Gene cyclers	詳細を表示
	(EN) - QuantiTect Primer Assay Handbook For genomewide, ready-to-use real-time RT-PCR assays using SYBR Green detection	詳細を表示
	Rotor-Gene SYBR Green プロトコールとトラブルシューティング - (JA) Rotor-Gene SYBR Green PCR Kit Rotor-Gene SYBR Green RT-PCR Kit SYBR Green I とRotor-Gene サイクラーを用いた高速リアルタイムPCR、2ステップRT-PCR、高速1ステップRT-PCR	詳細を表示
	(JA) - QuantiTect Primer Assay プロトコールとトラブルシューティングゲノムワイドで即使用可能なリアルタイムRT-PCRアッセイ（SYBR Green検出）用	詳細を表示

テクニカルインフォメーション

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	(EN) - Critical factors for synthesis of cDNA for real-time PCR analysis	詳細を表示
	(JA) - 簡便で正確なリアルタイムPCR実現のために	詳細を表示
	(JA) - SYBR Green マスターミックスの重要性	詳細を表示

Supplementary Protocols

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	Rotor-Gene® software setup for the Rotor-Gene SYBR® Green PCR Kit - (EN)	詳細を表示

MSDS

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	Safety Data Sheets Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.	表示

安全データシート

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	MSDS Rotor-Gene SYBR Green PCR Kit (400)

画像

Highly specific and sensitive detection.

特異性と感度の高い検出

Reliable and specific detection down to 10 copies.

10コピーのターゲットを確実かつ高い特異性で検出

PPIA (cyclophilin A)用の QuantiTect Primer Assayを用いて、プラスミドDNAの10倍段階希釈液 (10⁹～ 10コピー）のリアルタイムPCRを行なった。反応はRotor-Gene Qと Rotor-Gene SYBR^® Green PCR Kitを用いてtriplicateで行なった。[A] Rotor-Geneシステムでは全希釈範囲にわたり信頼できる検出を実現し、各triplicatesで再現性の高いC_T値が得られた。[B] 融解曲線解析はターゲットの特異的な増幅を示唆している。

Specific primer annealing using a balanced combination of K+ and NH4+ ions

プライマーの特異的なアニーリング

Rotor-Gene Q PCRバッファー中の陽イオンによりプライマーのアニーリングにおける特異性が増加。K⁺は二本鎖DNAのリン酸基に結合し、プライマーのアニーリングを安定化する。NH₄⁺は、ミスマッチな塩基対間の水素結合を不安定化する。

プライマーの高速なアニーリング

[A] Rotor-Gene SYBR^® Green PCR Master Mix中のQ-Bondは、短い一本鎖DNAへのDNAポリメラーゼの結合アフィニティーを大幅に増大させるため、プライマーのアニーリング時間を数秒間に短縮できる。さらにDNAの融解をサポートするユニークなバッファー組成が、変性およびエクステンション時間を短縮する。[B] Q-Bondが存在しないと、プライマーとポリメラーゼが段階的にテンプレートに結合するのでプライマーのアニーリングに時間がかかる。

Rotor-Gene SYBR® Green PCR Kit

Rotor-Gene SYBR^® Green PCR Kit