Rotor-Gene Multiplex PCR Kit

For ultrafast, multiplex, real-time PCR and two-step RT-PCR on Rotor-Gene cyclers

Optimized for ultrafast, reliable results on Rotor-Gene cyclers
Sensitive detection of up to 4 targets in 1 tube
Successful multiplex PCR without the need for optimization
Reliable quantification of low- and high-abundance targets

The Rotor-Gene Multiplex PCR Kit is designed for use with the Rotor-Gene Q and other Rotor-Gene cyclers, providing ultrafast, highly reliable quantification in multiplex, real-time PCR and two-step RT-PCR using sequence-specific probes. Depending on the cycler configuration, up to 4 cDNA or gDNA targets (e.g., 1 control gene and 3 target genes) can be quantified simultaneously in the same tube. Outstanding performance is achieved through the combination of a specially optimized master mix and the unique Rotor-Gene cycler. For convenience, the master mix can be stored at 2–8°C.

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関連資料

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製品名		Cat. no.	List price:
Rotor-Gene Multiplex PCR Kit (80) Trial kit for 80 x 25 µl reactions: 1 ml 2x Rotor-Gene Multiplex PCR Master Mix, 2 ml RNase-Free Water		204772	Inquire
Rotor-Gene Multiplex PCR Kit (400) For 400 x 25 µl reactions: 3 x 1.7 ml 2x Rotor-Gene Multiplex PCR Master Mix, 2 x 2 ml RNase-Free Water		204774	¥86,000

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Rotor-Gene Multiplex PCR Kit は分子生物学実験用です。疾病の診断、治療または予防の目的には使用することはできません。

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Rotor-Gene Multiplex PCR Kitと次のターゲット用にデザインしたTaqManを用いてRotor-Gene Qでduplexの2ステップリアルタイムRT-PCRを行なった； [A] IL8 (インターロイキン8) 、[B] ACTB (β-アクチン)。白血球由来のｃDNAテンプレートの10倍希釈液（1 pg～100 ng）を用いた解析で約95%の高いPCR効率が得られた。[C] C_T 値はコントロールとしてのsingleplex反応で得られた値に同等で、このduplexアッセイの信頼性を証明している。|ヒト白血球cDNA の10 倍段階希釈液（10 ng～10 pg）をテンプレートとして、4-plex リアルタイムPCR を行なった。Rotor-Gene Q とRotor-Gene Multiplex PCR Kit、あるいはS 社の装置とキットを用いてtriplicate で反応を行なった。 [A] 増幅されたターゲットおよび対応するTaqManプローブのレポーター色素。[B]4 種類のターゲットで得られたC_T 値（S 社の装置とキットではIFNG が増幅しなかった； N.D.）Rotor-Gene Q で得られたC_T 値が低いことは、高感度検出を証明している。[C] Rotor-Gene Multiplex PCR Kitを用いたTNF の増幅プロット。[D] S社のキットを用いたTNF の増幅プロット。[E] Rotor-Gene Multiplex PCR Kitを用いたIFNGの増幅プロット。[F]S社のキットを用いたIFNG の増幅プロット。|[A] Rotor-Gene Multiplex PCR Master Mix中のQ-Bond は、短い一本鎖DNA へのDNA ポリメラーゼの結合アフィニティーを大幅に増大させるため、プライマーのアニーリング時間を数秒間に短縮できる。さらにDNAの融解をサポートするユニークなバッファー組成が、変性およびエクステンション時間を短縮する。[B] Q-Bondが存在しないと、プライマーとポリメラーゼが段階的にテンプレートに結合するのでプライマーのアニーリングに時間がかかる。|Rotor-Gene Multiplex PCR Kitは簡単な操作でマルチプレックスリアルタイム定量PCRを実現する。汎用されている方法に比べて、本キットはプライマー、Mg²⁺、 Taq DNA polymeraseの濃度に対する至適化が不要で、リファレンス遺伝子にくらべてターゲット遺伝子のコピー数が少ないアッセイのような難しいアッセイでも同様である。|[A] NH₄⁺はアニーリングステップで非特異的なプライマーがテンプレートDNAに結合するのを回避する。[B] 画期的なPCR 添加物であるFactor MP は、テンプレート周辺でのプライマー濃度を高める。K⁺や他の陽イオンとともに、Factor MPは特異的に結合したプライマーを安定化し、HotStarTaq Plus DNA Polymeraseによる効果的なプライマーエクステンションを可能にする。|

パフォーマンス

With the Rotor-Gene Multiplex PCR Kit, up to 4 cDNA targets can be simultaneously and rapidly quantified in the same tube, increasing throughput and saving precious sample material (see figures "Reliable multiplex analysis" and "Reliable duplex analysis"). Genes of different expression levels are all amplified in the same tube with the same high efficiency, enabling reliable relative quantification of gene expression.

原理

Amplifying reference and target genes in the same reaction instead of in separate reactions increases the reliability of gene quantification by minimizing handling errors. The Rotor-Gene Multiplex PCR Kit enables reliable multiplex real-time PCR quantification of cDNA targets on the Rotor-Gene Q without the need for optimization of reaction and cycling conditions (see flowchart "QIAGEN multiplex kits"). Highly specific amplification is assured through a balanced combination of K⁺ and NH₄⁺ ions, which promote specific primer annealing and enable high PCR specificity and sensitivity, while synthetic Factor MP, an innovative PCR additive specially developed for challenging multiplex PCR applications, allows different amplicons in the same reaction to all be amplified with the same high efficiency (see figure "Unique PCR buffer").

Fast cycling without compromising performance is achieved using Q-Bond, a novel PCR additive that considerably shortens cycler run times (see figure "Fast primer annealing"). In addition, the highly stringent hot-start enzyme HotStarTaq Plus DNA Polymerase is rapidly activated at the start of PCR by a brief 5-minute incubation at 95ºC.

Components of 2x Rotor-Gene Multiplex PCR Kit*
Component	Features	Benefits
HotStarTaq Plus DNA Polymerase	5 min activation at 95ºC	Set up of qPCR reactions at room temperature
Rotor-Gene Multiplex PCR Buffer	Balanced combination of NH₄⁺ and K⁺ ions	Specific primer annealing ensures reliable qPCR results
	Synthetic Factor MP	Reliable multiplexing analysis of up to 4 targets in the same tube
	Unique Q-Bond additive	Faster PCR run times enable faster results and more reactions per day

操作手順

A ready-to-use master mix eliminates the need for optimization of reaction and cycling conditions. Simply add template cDNA and primer-probe sets to the master mix and program the cycler. The handbook supplied with the kit lists recommended dyes and contains a single protocol for all multiplex qPCR assays.

For optimal results in real-time two-step RT-PCR, we recommend synthesizing cDNA using the QuantiTect Reverse Transcription Kit. The kit provides fast cDNA synthesis in just 20 minutes with integrated removal of genomic DNA contamination.

アプリケーション

The Rotor-Gene Multiplex PCR Kit is optimized for fast, real-time PCR and two-step RT-PCR analysis using sequence-specific probes on the Rotor-Gene Q. It is also compatible with the Rotor-Gene 3000 and the Rotor-Gene 6000. Up to 4 cDNA or gDNA targets can be simultaneously and rapidly quantified in the same tube, increasing throughput and saving precious sample material.

For ultrafast, one-step qRT-PCR multiplex analysis of RNA targets using sequence-specific probes on Rotor-Gene cyclers, use the Rotor-Gene Multiplex RT-PCR Kit.

Feature	Specifications
Applications	Real-time quantification of genomic DNA or cDNA targets in a multiplex format
Description	For ultrafast quantitative multiplex real-time PCR and two-step RT-PCR using sequence-specific probes
Reaction type	Real-time PCR and two-step RT-PCR
Real-time or endpoint	Real-time
Sample/target type	DNA, cDNA
Single or multiplex	Multiplex
SYBR Green I or sequence-specific probes	Sequence-specific probes
Thermal cycler	Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000
With or without ROX	Without ROX dye

パンフレット

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	(EN) - Rotor-Gene Q - Pure Detection Now with even more applications!	詳細を表示
	(JA) - Rotor-Gene Q 優れた温度均一性を実現するリアルタイムPCR 装置	詳細を表示

FAQ

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	How do you achieve fast cycling, yet still deliver the same performance in PCR as that achieved with standard cycling? FAQ ID -1430	表示
	Are Rotor-Gene Kits compatible with reaction setup using the QIAgility instrument? FAQ ID -2116	表示
	Do the master mixes in Rotor-Gene Kits contain dUTP to allow UNG pretreatment? FAQ ID -2117	表示
	Why is the initial activation step different for Rotor-Gene Probe, SYBR Green and Multiplex Kits? FAQ ID -2118	表示
	What are the main differences between Rotor-Gene and QuantiTect or QuantiFast PCR Kits? FAQ ID -2119	表示
	Will Rotor-Gene Kits also work on the Rotor-Gene 6000 and 3000 cyclers? FAQ ID -2121	表示
	Do limiting primer concentrations need to be determined when using the Rotor-Gene Multiplex PCR Kit? FAQ ID -2128	表示
	If housekeeping and target genes differ significantly in abundance, will they both be amplified with equal efficiency using the Rotor-Gene Multiplex PCR Kit? FAQ ID -2129	表示
	Are probes other than TaqMan® probes, such as FRET probes, compatible with fast cycling with the Rotor-Gene Multiplex PCR Kit? FAQ ID -2130	表示
	Are TaqMan® Gene Expression Assays from Applied Biosystems compatible with the Rotor-Gene Multiplex PCR Kit? FAQ ID -2131	表示
	Do you have any information or guidelines regarding the choice of reference genes for real-time PCR? FAQ ID -2371	表示
	What real-time cycler should I use for my qPCR experiments? FAQ ID -2670	表示

キットハンドブック

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	(EN) - Rotor-Gene Multiplex Handbook For fast multiplex real-time PCR, two-step RT-PCR, and one-step RT-PCR using sequence-specific probes on Rotor-Gene cyclers	詳細を表示
	Rotor-Gene Multiplexプロトコールとトラブルシューティング - (JA) 配列特異的なプローブとRotor-Gene サイクラーを用いた迅速なマルチプレックス・リアルタイムPCR、2 ステップRT-PCR、1 ステップRT-PCR	詳細を表示

テクニカルインフォメーション

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	(EN) - Critical factors for synthesis of cDNA for real-time PCR analysis	詳細を表示
	Overcoming the challenges of real-time, multiplex PCR - (EN)	詳細を表示

MSDS

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	Safety Data Sheets Download Safety Data Sheets for QIAGEN product components.	表示

安全データシート

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	MSDS Rotor-Gene Multiplex PCR Kit (80)
	MSDS Rotor-Gene Multiplex PCR Kit (400)

画像

信頼できるduplex解析

信頼できるマルチプレックス解析

ヒト白血球cDNA の10 倍段階希釈液（10 ng～10 pg）をテンプレートとして、4-plex リアルタイムPCR を行なった。Rotor-Gene Q とRotor-Gene Multiplex PCR Kit、あるいはS 社の装置とキットを用いてtriplicate で反応を行なった。 [A] 増幅されたターゲットおよび対応するTaqManプローブのレポーター色素。[B]4 種類のターゲットで得られたC_T 値（S 社の装置とキットではIFNG が増幅しなかった； N.D.）Rotor-Gene Q で得られたC_T 値が低いことは、高感度検出を証明している。[C] Rotor-Gene Multiplex PCR Kitを用いたTNF の増幅プロット。[D] S社のキットを用いたTNF の増幅プロット。[E] Rotor-Gene Multiplex PCR Kitを用いたIFNGの増幅プロット。[F]S社のキットを用いたIFNG の増幅プロット。

プライマーの高速なアニーリング

[A] Rotor-Gene Multiplex PCR Master Mix中のQ-Bond は、短い一本鎖DNA へのDNA ポリメラーゼの結合アフィニティーを大幅に増大させるため、プライマーのアニーリング時間を数秒間に短縮できる。さらにDNAの融解をサポートするユニークなバッファー組成が、変性およびエクステンション時間を短縮する。[B] Q-Bondが存在しないと、プライマーとポリメラーゼが段階的にテンプレートに結合するのでプライマーのアニーリングに時間がかかる。

Successful Multiplex PCR-Based Genotypic Analysis without the Need for Optimization

QIAGENマルチプレックスキット

Rotor-Gene Multiplex PCR Kitは簡単な操作でマルチプレックスリアルタイム定量PCRを実現する。汎用されている方法に比べて、本キットはプライマー、Mg²⁺、 Taq DNA polymeraseの濃度に対する至適化が不要で、リファレンス遺伝子にくらべてターゲット遺伝子のコピー数が少ないアッセイのような難しいアッセイでも同様である。

Unique Type-it Microsatellite PCR Buffer Promotes Stable and Efficient Annealing

ユニークなPCRバッファー

[A] NH₄⁺はアニーリングステップで非特異的なプライマーがテンプレートDNAに結合するのを回避する。[B] 画期的なPCR 添加物であるFactor MP は、テンプレート周辺でのプライマー濃度を高める。K⁺や他の陽イオンとともに、Factor MPは特異的に結合したプライマーを安定化し、HotStarTaq Plus DNA Polymeraseによる効果的なプライマーエクステンションを可能にする。